长郡中学 上课用 分解纤维素的微生物的分离

1、 因为土壤中各类微生物的数量(单位：株/kg)是不同的，例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2 185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。因此，为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。测定土壤中细菌的数量，一般选用104、105和106倍的稀释液进行平板培养；测定放线菌的数量，一般选用103、104和105倍稀释；测定真菌的数量，一般选用102、103和104倍稀释注： 样品的稀释 将10g土样加入盛有90mL无菌生理盐水的锥形瓶中,充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有9mL水的无菌试管中，依次等比稀释至10

2、7稀释度，并按照由107至103稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布平板，不必更换移液管。实验步骤3.微生物的培养与观察将涂布好的培养皿放在30下培养。比较牛肉膏培养基和选择培养基中菌落的数量、形态等，并做好记录。挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基的斜面中，观察能否变红。不同种类的微生物，往往需要不同的培养温度和培养时间。细菌一般在3037的温度下培养12d；放线菌一般在2528的温度下培养57d；而霉菌一般在2528的温度下培养34d。注：一般来说，在一定的培养条件下(相同的培养基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的菌落特征。EMB培养

3、基与大肠杆菌代谢产物产生紫色带金属光边的菌落 当菌落数目稳定时，选取菌落数在30300的平板进行计数。在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求出平均值，并根据平板所对应的稀释度计算出样品中细菌的数目。实验步骤4.细菌的计数每克土壤样品菌数 = 某稀释倍数的菌落平均数稀释倍数细菌培养时所用的稀释液体积一无菌操作1.取土用的小铁铲和盛土样的信封在使用前都需要灭菌。2.应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞。3.在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁操作。操作提示二做好标记注明培养基种类、培养日期、平板培养样品的稀释度等。三规划时间阅读课本27页基础知识部分第

4、一、二段，回答下列问题：1. 纤维素在生物圈的分布状况？一、纤维素和纤维素酶阅读课本27页基础知识部分第一、二段，回答下列问题：1. 纤维素在生物圈的分布状况？纤维素是地球上含量最丰富的多糖类物质。植物的根、茎、叶等器官都含有大量的纤维素。其中棉花是自然界中纤维素含量最高的天然产物。一、纤维素和纤维素酶2.纤维素酶的组成及作用？2.纤维素酶的组成及作用？纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即CX酶、 C1酶和葡萄糖苷酶，前两种酶使纤维素分解成纤维二糖，第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。3、纤维素的分解3、纤维素的分解 能分解纤维素的微生物有各种细菌、真菌和少数放线菌。3、纤维素的分

5、解 能分解纤维素的微生物有各种细菌、真菌和少数放线菌。4、纤维素酶活性的测定实验：3、纤维素的分解 能分解纤维素的微生物有各种细菌、真菌和少数放线菌。方法：滤纸崩溃法4、纤维素酶活性的测定实验：下列生物能分解纤维素的是（ ） 人 兔 牛 蘑菇 纤维杆菌A、 B、 C、 D、下列生物能分解纤维素的是（ ） 人 兔 牛 蘑菇 纤维杆菌A、 B、 C、 D、C二、纤维素分解菌的筛选阅读课本第28页的相关部分，回答下列问题：1.纤维素分解菌的筛选方法二、纤维素分解菌的筛选1.纤维素分解菌的筛选方法刚果红染色法：这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选 阅读课本第28页的相关部分，回答下列问题：2.

6、纤维素分解菌的筛选方法的原理2.纤维素分解菌的筛选方法的原理 刚果红是一种染料，它可以与纤维素形成红色复合物，但并不和纤维二糖、葡萄糖发生这种反应。当纤维素被纤维素酶分解后刚果红纤维素的复合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解为中心的透明圈。这样我们可以通过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。练一练：1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B. 纤维素酶可把纤维素分解成葡萄糖C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖练一练：1.下列关于纤维素酶的说法，错误的是A. 纤维素酶是一种复合酶，至少包括三种B. 纤维素酶可把纤维素分

7、解成葡萄糖C. 纤维素酶可用于去掉植物的细胞壁D. 葡萄糖苷酶可把纤维素分解成葡萄糖2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌2.利用刚果红法可以筛选出纤维素分解菌，下列说法错误的是A. 刚果红能与纤维素形成红色复合物 B. 刚果红能与纤维二糖形成红色复合物 C. 刚果红不能与葡萄糖形成红色复合物D. 若培养基上产生了透明圈，则说明已筛选出了纤维素分解菌三、实验操作土壤取样选择培养梯度稀释将样品涂布到鉴别纤维

8、素分解菌的培养基上挑选产生透明圈的菌落土壤取样取样环境原因土壤取样取样环境富含纤维素的环境中原因土壤取样取样环境富含纤维素的环境中 由于生物与环境的相互依存关系，在富含纤维素的环境中，纤维素分解菌的含量相对提高，因此从这种土样中获得目的微生物的几率要高于普通环境。原因土壤取样 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。土壤取样 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 讨论:如果找不到合适的环境，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？土壤取样 实例：树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等。 讨论:如果找不到合适的环境

9、，可将滤纸埋在土壤中，将滤纸埋在土壤中有什么作用？你认为滤纸应埋进土壤中多深？ 将滤纸埋在土壤中能使纤维素分解菌相对集中，实际上是人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境。一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中。选择培养1.选择培养的目的：1.选择培养的目的：增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离到所需要的微生物选择培养2.制备选择培养基参照课本29页旁栏中的比例配置，回答下列问题a.旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？b.这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？参照课本29页旁栏中的比例配置，回答下列问题a.旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什

10、么？b.这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？是液体培养基，原因是配方中无凝固剂2.制备选择培养基参照课本29页旁栏中的比例配置，回答下列问题a.旁栏中的配方是液体培养基还是固体培养基？为什么？b.这个培养基对微生物是否具有选择作用？如果具有，是如何进行选择的？是液体培养基，原因是配方中无凝固剂有选择作用，本配方中的碳源是纤维素，所以能分解纤维素的微生物可以大量繁殖2.制备选择培养基c.你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？用牛肉膏蛋白胨培养基与之对照c.你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？3.操作方法：将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将

11、锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养12天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？思考：为什么选择培养能够“浓缩”所需的微生物？在选择培养的条件下，可以使那些能够适应这种营养条件的微生物得到迅速繁殖，而那些不适应这种营养条件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“浓缩”的作用梯度稀释按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释，稀释最大倍数到106将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上1. 制备培养基:参照旁栏中的比例2. 涂布平板：将稀释度为104106的菌悬液各取0.1ml涂布在培养基上，30倒置培养挑选产生透明圈的菌落 挑取产生明显

12、的透明圈的菌落，一般即为分解纤维素的菌落。 接种到纤维素分解菌的选择培养基上，在300C 370C培养，可获得纯培养。刚果红染色法方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时就加入刚果红刚果红染色法方法一：先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应方法二：在倒平板时就加入刚果红思考：这两种方法各有哪些优点与不足？ 方法一缺点是操作繁琐，加入刚果红溶液会使菌落之间发生混杂；优点是这样显示出的颜色反应基本上是纤维素分解菌的作用 方法二优点是操作简便，不存在菌落混杂问题缺点一是由于培养基中还含有淀粉类物质，可以使能产生淀粉酶的微生物出现假阳性反应；缺点二有些微生物具有降解色素的能力，

13、它们在长时间培养过程中会降解刚果红，形成明显的透明圈，与纤维素分解菌不易区分1.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点？A.生物结构与功能相适应的观点B.生物结构与功能整体性观点C.生物与环境相适应的观点D.生物发展进化的观点练一练：1.在富含纤维素的环境中寻找纤维素分解菌，符合下列哪一生物学观点？A.生物结构与功能相适应的观点B.生物结构与功能整体性观点C.生物与环境相适应的观点D.生物发展进化的观点练一练：2.从土壤中分离获得某种微生物的步骤是土壤取样梯度稀释选择培养 菌悬液涂布平板挑选出单个菌落A. B.C. D.2.从土壤中分离获得某种微生物的步骤是土壤取样梯度稀释选择培养 菌悬液涂布平板挑选出单个菌落A. B.C. D.3. 有关选择培养正确的叙述是A. 可以增加纤维素分解菌的浓度B. 可以减少纤维素分解菌的浓度C. 所用培养基