丹参对幼年大鼠癫痫持续状态学习记忆及海马ChAT、AChE活性的影响

1、丹参对幼年大鼠癫痫持续状态学习记忆及海马ChAT、AChE活性的影响【摘要】目的：观察丹参(RS)对幼年大鼠癫痫持续状态(SE)学习记忆及海马胆碱乙酰转移酶(hAT)和乙酰胆碱酯酶(AhE)活性的影响。方法：戊四氮(PTZ)诱导大鼠SE,丹参(RS)进展干预,苯巴比妥钠(PB)作为对照，采用rris水迷宫观察大鼠空间记忆的改变，应用匀浆比色法检测大鼠海马hAT、AhE活性。结果：rris水迷宫测试中PTZ组逃避埋伏期延长(P0.05),有效搜索策略百分比降低(P0.01)，平台象限游泳时间百分比降低(P0.01)，海马hAT、AhE活性降低(P0.01)；RS组SE后下降的hAT、AhE活性有

2、所进步，平均埋伏期较PTZ组显著缩短，目的象限停留时间显著高于PTZ组，第13天有效搜索策略百分比高于PTZ组，第23天高于PB组(P0.05)；PB组仅进步AhE活性，PB组平均埋伏期较PTZ组有缩短趋势，但仅第1天有统计学意义，PB组目的象限停留时间显著高于PTZ组。结论：SE可使幼年大鼠学习记忆受损,hAT、AhE可能参与这一变化的病理生理过程。丹参用药可能通过修复海马胆碱能系统改善幼年大鼠SE学习记忆损伤。【关键词】丹参癫痫持续状态学习记忆胆碱乙酰转移酶乙酰胆碱酯酶水迷宫30%50%的癫痫患儿伴有不同程度的学习记忆减退、注意力分散及社会适应才能下降等认知功能障碍，直接影响患儿生活质量。

3、大量研究证实，癫痫发作尤以癫痫持续状态(statusepileptius，SE)，不仅可引起暂时性脑功能障碍，且可致严重的器质性脑损伤，进而引起学习记忆及行为异常等严重后果。本实验讨论了丹参(radixsalviaeiltirrhizae，RS)对幼年SE大鼠学习记忆损伤的改善作用。1材料与方法1.1材料及仪器1.2SE模型制备及实验分组参照文献方法2建立动物模型：戊四氮(pentylenetetrazle，PTZ)20gkg-1大鼠腹腔注射,然后每10in注射10gkg-1,直至到达足够强度和SE持续发作。SE标准:0级，无惊厥发作；级，点头，眨眼，颈动或湿狗样颤抖；级，节律性点头；级，头部

4、抽搐加前肢颤抖；级，第级加后肢站立；级，惊厥致跌倒，全身强直性抽搐。、级发作即为全身性惊厥大发作，持续30in及以上者为SE。将成功SE模型48只随机分为模型对照组(PTZ组)24只，苯巴比妥组(PB组)12只，丹参组(RS组)12只。另设生理盐水对照组(NS组)12只，NS组大鼠腹腔注射同等容量一样次数的生理盐水。惊厥终止发作后12hRS组腹腔注射复方丹参注射液10gkg-1，PTZ组、NS组腹腔注射6lkg-1生理盐水，PB组给予PB60gkg-1腹腔注射，每隔24h重复给等量药1次，持续7d。各组动物混合饲养，每日测体质量以调整注射剂量。1.3大鼠rris水迷宫实验于7d给药完毕后开场进

5、展rris水迷宫实验,程序包括：(1)定位航行实验(plaenavigatintask)用于测量大鼠对水迷宫学习和记忆的才能。实验历时4.5d,每天分上、下午2个时段,共9个时段,每时段训练4次。训练时随机选择1个象限(本实验选择S)开场,按逆时针方向,将大鼠从各象限边缘中点位置面向池壁放入水中,观察并记录在120s内找到平台的时间(逃避埋伏期,esapelateny)。假如大鼠在120s内未能找到平台那么人为引导至平台停留10s后移开,埋伏期记为120s；隐匿平台逃避埋伏期反映动物空间记忆的获得情况,即空间学习记忆才能。(2)空间搜索实验(spatialprbetest)用于测量大鼠学会寻找

6、平台后,对平台空间位置记忆的才能。即在第5天第5次训练时撤除平台,任选一个入水点(本实验选择S)将大鼠面向池壁放入水中,记录120s内动物在目的象限(原平台所在象限,targetquadrant)运动时间。(3)搜寻策略(seahstrategy)。大鼠搜寻站台的策略分直线式、趋向式、随机式和边缘式。观察并记录9个时段的训练期间大鼠每次寻找站台所需的埋伏期和采用的策略。直线式和趋向式游泳轨迹为有效搜索策略,计算每日有效搜索策略百分比3。1.4AhE、hAT活性测定大鼠rris水迷宫实验完毕后直接断头取双侧海马，匀浆比色法测定AhE、hAT活性。hAT的测定是以乙酰辅酶A为底物，在hAT的作用下

7、，反响的生成物和显色剂结合，在324n处测定吸光度，以此计算hAT的活力。酶单位定义为：在pH7.2条件下，2530时每克组织湿质量每分钟转移1nl乙酰基给胆碱的才能定义为一个酶活力单位。详细操作按试剂盒说明书进展。1.5统计学处理2结果2.1PTZ诱导惊厥的行为特征6只大鼠应用40gkg-1、28只50gkg-1、16只60gkg-1PTZ即开场出现惊厥,主要表现为肌阵挛,伴有前肢阵挛的后肢站立,持续13s。随着PTZ每10in注射1次,进入全面性强直收缩阶段的大鼠表现为失去姿势控制,前、后肢伸肌强烈收缩,并伴有发绀。强直阶段后出现全面性强直阵挛惊厥,大鼠SE持续时间在3090in,7只大鼠

8、应用PTZ60gkg-1、34只70gkg-1、9只80gkg-1发生SE，2只大鼠死于SE。幸存的大鼠自动恢复到根本活动程度。PTZ处理大鼠死亡率为10%。2.2rris水迷宫实验PTZ组定向航行实验平均埋伏期延长(P0.01),RS组平均埋伏期较PTZ组显著缩短1、2、4、5d(P0.01)，PB组平均埋伏期较PTZ组有缩短趋势，但仅第1天有统计学意义表1。PTZ组空间探究试验原平台所在象限停留时间较NS组变短P0.05,分别为41.08.3、57.516.3s；RS及PB组目的象限停留时间显著高于PTZ组P0.05，分别为59.218.9、(55.613.0)s。各组第25天有效搜索策略

9、百分比均高于第1天P0.01。第13天PTZ组有效搜索策略百分比低于NS组，RS、PB组均高于PTZ组，且第23天RS组高于PB组P0.05(表2)。表1各组定向航行实验平均埋伏期结果与PTZ组比拟，1)P0.05；与NS组比拟，2)P0.05；与PB组比拟，3)P0.05表2各组有效搜索策略与PTZ组比拟，1)P0.05；与NS组比拟，2)P0.05；与PB组比拟，3)P0.052.3AhE、hAT活性测定PTZ组AhE、hAT活性较NS组显著减弱P0.01，RS组AhE、hAT活性显著高于PTZ组(P0.01)，与NS组无显著差异P0.05，PB干预使SE后AhE活性升高P0.01,hAT

10、活性较SE组无明显改善P0.05。见表3。表3AhE、hAT活性测定结果3讨论Ah是中枢神经系统(NS)中重要神经递质,对NS有兴奋和抑制双重作用,以兴奋为主,参与大脑皮层的唤醒、情绪和运动的协调等功能的调节,特别是学习和认知等方面被认为是关键环节之一。神经末梢胞浆中的胆碱和乙酰辅酶A在AhT的作用下生成Ah，并进入囊泡贮存。AhT是Ah合成的限速酶。在钙离子的参与下，囊泡与突触前膜相交融，释放Ah至突触间隙。然后Ah作用于突出后膜的Ah受体，介导信息的传递，并参与多种生理功能的完成。Ah一旦和受体分开，就迅速被突触间隙内的AhE降解为胆碱和乙酸。大量的研究证明中枢胆碱能递质在学习和记忆行为中

11、有重要的调节作用,保持其功能正常是维持哺乳动物学习记忆的必要条件。以往的研究多侧重于药物对老年痴呆中枢胆碱能系统的影响,对于药物治疗癫痫大发作伴智力低下后中枢胆碱能系统变化的报道较少。徐格林等证实在大鼠发育期诱导癫痫发作可损害大鼠的空间认知才能,而出生前后胆碱补充可以减轻这种损害8。Serra等报道PTZ点燃使自由活动的大鼠海马中乙酰胆碱含量下降至对照组的52，并维持这一程度达4周，至停顿PTZ注射后30d恢复至对照组程度9。经现代工艺提取的丹参化学成分包括丹参酮、丹参酮a、丹参酮b,隐丹参酮及原儿茶醛、丹参素、丹参酸乙等。现代药理研究证实，丹参具有改善缺血再灌注损伤，调节免疫，降低血液黏稠度，改善微循环的作用，改善脑损伤造成的认知功能障碍。本研究结果显示，丹参可明显缩短模型大鼠rris水迷宫定向航行实验平