新城疫病毒对血管生长的抑制作用

1、新城疫病毒对血管生长的抑制作用【摘要】目的研究鸡新城疫病毒对血管的生长抑制作用。方法采用小鼠肺癌转移模型观测鸡新城疫病毒NDV对癌细胞转移的影响及组织内微血管的生长情况；用体外药物敏感实验TT检测NDV在不同剂量和作用时间下对人血管内皮细胞EV304细胞的增殖抑制效应；用PI和Hehst33342进展荧光染色检测NDV作用后细胞有无凋亡改变及其形态学变化。结果NDV在体内可以有效抑制小鼠发生癌转移时组织内微血管的生成，在体外可以抑制EV304细胞的增殖并导致较为细微的凋亡现象。结论体内外实验均说明NDV可以抑制肿瘤发生时微血管的生长，这一作用通过抑制血管内皮细胞的增殖而非直接的细胞毒作用实现，

2、该作用机制可能与某种特定病毒蛋白有关，尚待进一步研究。【关键词】NDV；血管生成抑制剂；肺转移GrthInhibitinfNeastleDiseaseVirus(NDV)nVEinKeyrds：NDV;Angigenesisinhibitr;Pulnaryetastasis肿瘤生长依赖从生长环境中获得营养并向环境排泄代谢产物，当肿瘤细胞的量较为少时，其与环境之间的物质交换可以通过弥散的方式来完成，但是，当肿瘤组织增大到一定程度时，物质交换就需要通过其间的血管网来完成。研究说明，肿瘤组织的增长速度与其对血液供给的依赖性成正比。因此，从理论上来说，通过抑制血管生长进而阻断肿瘤的血供，可以到达抑制肿

3、瘤增长及转移的目的。大量研究说明，鸡新城疫病毒可以通过直接的细胞毒作用和对肿瘤细胞凋亡的诱导作用起到抗肿瘤效果1。本研究通过体内、体外两种方法讨论了鸡新城疫病毒对血管生长的抑制作用，进一步提醒了鸡新城疫病毒抗肿瘤作用的机理。1材料和方法1.1实验材料1.2实验方法1.2.2肺转挪动物模型的建立取接种7天左右的种鼠，颈椎脱臼处死后抽取腹水，用生理盐水稀释至2.5106/L。经尾静脉注射接种瘤细胞，每鼠0.2L2。1.2.3抗肿瘤转移实验将接种后的小鼠随机分为空白对照组及治疗组，每组10只。接种后24小时起腹腔给药血凝效价1640，0.2L/只，每3天给药一次，对照组给等量PH7.2的PBS，共给

4、药5次。接种后第15天颈椎脱臼处死小鼠，解剖取肺并检查有无其他脏器及部位的转移。肺组织常规固定、包埋、切取最大截面计数转移灶数，并观察肺组织内血管的生长情况。1.2.5荧光显微镜检测药物对EV304细胞核形态学特征的影响分别将Hehst33342和碘化丙啶PI配成100g/L的母液，用前等量混合。细胞经14NDV处理16h、24h、48h后分组搜集。每个标本取200L移入EP管中，参加荧光染料Hehst33342至终浓度10g/L，碘化丙啶PI20g/L，37下染色15in，取20L细胞悬液迅速滴于载玻片上，加盖玻片，紫外光激发，在荧光显微镜下观察可见4种细胞形态，活细胞VN染为蓝色，核呈正常

5、构造；早期凋亡细胞VA染为蓝色，核呈固缩状或圆珠状；非凋亡的死亡细胞NVN染为红色，核呈正常构造；晚期凋亡细胞NVA也染为红色，但可见明显的染色质凝聚，细胞凋亡率可由以下公式计算4：凋亡率=VA+NVAVN+NVN+VA+NVA100%2结果2.1鸡新城疫病毒对小鼠肺血管生成的影响S180肉瘤尾静脉内接种以形成肺转移灶为主，亦有其他部位的转移。10只对照组小鼠肺外表及肺内均出现直径0.52.0的粒状转移灶，肺组织颜色深红，有明显的充血病症图略，其中出现胸膜黏连3只，腹膜、腋下转移性包块2只。治疗组肺组织发白，除2只肉眼可见极小的转移灶外，其余均为镜下转移灶图略。光镜下S180肉瘤实验性肺转移对

6、照组的转移灶内及周围血供丰富，瘤细胞密集，生长旺盛，有明显的血管增生扩张、充血和出血，一些血管腔内有从转移灶侵入的瘤细胞。并见大片坏死区，见图1，此外，对照组肝脏也可见少量散在的转移灶。NDV组小鼠肺内也见散在的小转移灶，其中有散在的凋亡细胞。未见血管扩张、充血，无血管长入，组织内血管细、少、闭锁，亦未见成片的坏死灶，见图2。2.2TT法观察NDV对血管内皮细胞EV304的影响各浓度NDV对人血管内皮细胞EV304的增殖均有抑制作用，且呈良好的时间量效关系，结果见表1，治疗组细胞生长抑制率同对照组的抑制率比拟有极显著差异P0.01。表1TT法观察鸡新城疫病毒对人血管内皮细胞EV304增殖的抑制作用与空白组比拟:P0.05；*与空白组比拟:P0.012.3荧光显微镜检测细胞核变化在荧光显微镜下，可以观察到存活细胞和凋亡早、晚期及坏死的细胞。药物作用0、12、24、48h其凋亡率分别为0.5%、4%、6%、11%，随诱导时间的延长，凋亡率增高，呈时间依赖关系，见表2。统计说明，NDV组第12、24、48小时时间段凋亡率与阴性组相比虽然表现为不同程度的增加，但均未见显著性差异。镜下观察发现给药组随作用时间的延长，其与空白组相比细胞密度的降低并不主要表现为死亡细胞的增加，而是NDV抑制细胞增殖的