糖化血红蛋白的基础知识培训

1、糖化血红蛋白的基础知识培训糖化血红蛋白的基础知识培训第1页HbA1c定义 HbA1c: 葡萄糖与血红蛋白链氨基酸末端6个氨基酸结合产生一个特定糖化血红蛋白血红蛋白被糖化后，氨基酸末端所带负电荷会增加 HbA0：没有结合葡萄糖血红蛋白链氨基酸末端6个氨基酸 HbA1c以百分比表示，即以和葡萄糖结合血红蛋白占全部血红蛋白百分比正常参考范围：4%-6%（NGSP/DCCT标化方法）糖化血红蛋白的基础知识培训第2页糖化血红蛋白-血红蛋白糖基化产物葡萄糖进入红细胞，在内部与血红蛋白发生反应血红蛋白葡萄糖红细胞糖化血红蛋白的基础知识培训第3页糖化血红蛋白生物合成过程（两步）血红蛋白葡萄糖中间产物-LA1c

2、 Schiff碱HbA1c第一部：快速反应，生成不稳定A1c（LA1c）第二步：迟缓反应，生成稳定A1c（HbA1c）糖化血红蛋白的基础知识培训第4页糖化和非糖化血红蛋白HbHbA0HbA1HbA1aHbA1bHbA1cHbA()HbA2()HbF()95%2%1-3.5%成人血红蛋白分三种HbA为主要成人Hb非糖化Hb糖化Hb6-8%87-89%血红蛋白HbA1c是怎样计算？A1c%=A1c/A0+HbA1糖化血红蛋白的基础知识培训第5页离子交换色谱所分离组分解释（非糖尿病样本）Hb组成 % of Hb Hb与糖类结合HbA1a 1% HbA1与1,6-二磷酸果糖结合而成 HbA1b 1%

3、丙酮酸与链氨基末端缬氨酸结合而成 HbF 1% 胎儿血红蛋白LA1c 1% 血红蛋白形成HbA1c之前中间产物HbA1c 46% 链氨基酸端与葡萄糖结合产物HbA0 90% 非糖化血红蛋白 胎儿血红蛋白在胎儿及出生6个月以内新生儿体内为高浓度，6个月后基础降为成人水平妇产科 HbA1c主要用于糖尿病妊娠筛查糖化血红蛋白的基础知识培训第6页色谱图举例 HbA1a & HbA1b HbA次要组分LA1c (希夫碱) 和氨甲基乙酰化 Hb HbA1c A0总面积为 100万-500万 A1c 结果糖化血红蛋白的基础知识培训第7页小结什么是HbA1c和HbA0？A1c被糖化后什么电荷增加了？为何糖化血

4、红蛋白在A0峰之前被洗脱下来？测量糖化血红蛋白为何要先对样本溶血？HbA1c是怎样计算？成人血红蛋白包含哪几个？HbF是什么？浓度高时是否会对A1c造成干扰？为何？伯乐糖化试剂能汇报HbF吗？为何？糖化血红蛋白包含哪几个？糖化血红蛋白的基础知识培训第8页HbA1c试验室检测方法糖化血红蛋白的基础知识培训第9页常见HbA1c检测方法 主要有三种检测方法: 1.离子交换高压液相色谱（HPLC） 直接分离HbA1c2.硼酸亲和高压液相色谱 检测产物为总糖化血红蛋白3. 免疫法 检测产物为HbA1c糖化血红蛋白的基础知识培训第10页各检测方法精密度 方法 精密度 电泳 +免疫法 +低压液相色谱（LPL

5、C） +高压液相色谱（HPLC） + 糖化血红蛋白的基础知识培训第11页各检测方法分析物HbA (a2b2)HbA1HbA0HbA1aHbA1bHbA1c非糖化成份糖化成份离子交换色谱和免疫法检测物硼酸亲和色谱检测物糖化血红蛋白的基础知识培训第12页离子交换HPLC检测糖化血红蛋白HbA1c金标准方法 DCCT研究中唯一所采取HbA1c检测方法 NGSP标准化参考方法 检测原理： 基于HbA1c 与其它血红蛋白组分所带电荷不一样，在一定缓冲液离子强度下可与分析柱树脂表面偶联离子基团有不一样程度结合，从而将HbA1c与其它组分(HbA1b, HbA1a,HbF,HbA0) 区分开而得到分离。糖化

6、血红蛋白的基础知识培训第13页离子交换HPLC检测原理色谱图横坐标是时间，纵坐标是信号强度，反应Hb各分析峰浓度高低被校准峰被阴影化被校准峰被阴影化糖化血红蛋白的基础知识培训第14页离子交换HPLC特点采取离子交换原理基于HPLC平台HPLC方法试剂组成包含：分析柱、缓冲液、校准品采取分析柱内填充离子交换树脂作为固定相，树脂上面偶联了带电荷基团以可形成不一样离子强度洗脱梯度缓冲试剂作为流动相。溯源性由试剂盒配套校准品确保分离效果影响原因分析柱内填充物（颗粒越小，分离效果越好，速度越慢）分析柱柱长（越长，分离效果越好，速度越慢）糖化血红蛋白的基础知识培训第15页离子交换HPLC优缺点优点： 1.

7、全自动 2.结果准确，可靠 分析物为HbA1c。 高分辨率方法可同时区分常见血红蛋白变异体，给临床医生已额外医疗提醒 3. 精密度好 CV5%）只报HbA1c一个数值，不能检测血红蛋白变异体高血红蛋白F样本HbA1c检测结果偏低严重黄疸和高脂血影响比色结果国产糖化试剂非标准化问题糖化血红蛋白的基础知识培训第20页小结糖化血红蛋白主要检测方法有什么？检测产物分别是什么？HPLC汉字全称是什么？HbA1c检测金标准方法是？为何？离子交换HPLC检测原理是基于什么不一样？检测试剂应该包含哪些主要组分？分析柱中填充是什么？上面偶联了什么？不一样缓冲液区分是什么？不一样离子交换HPLC方法分辨率一样吗？

8、分辨率关键影响原因是什么？糖化血红蛋白检测结果溯源性由哪种试剂确保？伯乐糖化产品色谱图横坐标是什么？纵坐标是什么？硼酸亲和色谱法检测原理是基于什么？色谱图有几个峰？分别是什么？硼酸亲和色谱法是怎么检测HbA1c？免疫法检测糖化血红蛋白原理是基于什么反应？国产免疫法试剂缺点有哪些？糖化血红蛋白的基础知识培训第21页HbA1c试验室检测干扰原因糖化血红蛋白的基础知识培训第22页常见检测干扰原因非方法学特异干扰原因改变红细胞寿命生理条件可影响 HbA1c结果造成检测结果假性偏低 镰刀细胞性贫血和溶血性贫血 维他命 C和 E （抑制糖化作用）造成检测结果假性偏高 铁缺乏性贫血，脾切除术后 真性红细胞增

9、多症（高原地域）妊娠期 Hb浓度偏低，HbA1c比正常人偏低 糖化血红蛋白的基础知识培训第23页方法学特异干扰原因血红蛋白变异体 (如.HbS, HbC， HbD, HbE)血红蛋白衍生物 (乙酰化、甲酰化衍生物等) 长久服用阿斯匹林病人，体内乙酰化Hb高，结果偏高 肾衰病人氨甲酰基化，造成结果偏高Schiff碱（A1c中间产物） 一些血糖浓度急剧改变1型糖尿病人，Schiff碱升高，胎儿血红蛋白HbF严重黄疸、高血脂糖化血红蛋白的基础知识培训第24页血红蛋白变异体发生率全世界已经发觉了超出一千种血红蛋白变异体全球血红蛋白变异体发生率最新数据是7%*非洲裔美国人：HbS 7.8%；HbC 2.

10、3%1988年,2.5 ,河南*年,3.2 ,丝绸之路*云南：4%云南省阿昌族HbE发病率为41.2%*Kohne E. Hemoglobinopathies: clinical manifestations, diagnosis, and treatment. 1. Dtsch Arztebl Int. ;108(31-32):532-540.*河南省异常血红蛋白调查与化学结构分析研究,新乡医学院学报, 1988, (02) 9-12*中国丝绸之路地域血红蛋白病遗传流行病学特点，人类学学报，V20糖化血红蛋白的基础知识培训第25页变异体对HbA1c准确性影响Ross J.Molinaro,T

11、argeting HbA1c:standardization and clinical laboratory measurement. MLO Jan,糖化血红蛋白的基础知识培训第26页血红蛋白变异体对HbA1c结果准确性影响对个别方法检测结果准确性有影响例：A0后有变异体糖尿病人样本，HbF正常G8标准模式试剂检测结果偏低1%G8 Variant 模式试剂（1.6分钟/test）G8 标准模式试剂（1.0分钟/test）糖化血红蛋白的基础知识培训第27页血红蛋白变异体与血糖监控血红蛋白变异体会影响红细胞寿命，红细胞寿命会影响糖化血红蛋白生成这些病人或许应该有不一样糖化血红蛋白监控时间或者改用

12、其它指标来评定血糖糖化血红蛋白的基础知识培训第28页小结影响HbA1c检测结果非方法学特异干扰原因影响HbA1c检测方法学特异干扰原因有哪些？变异体与A0没有分离开情况下会造成检测结果偏高还是偏低？为何？变异体与A1c没有分离开情况下会造成检测结果偏高还是偏低？为何？血红蛋白变异体会经过两个方面影响糖化血红蛋白，请详述。临床上对于有血红蛋白变异体病人有什么提议？试验室应该怎么满足临床这一需求？糖化血红蛋白的基础知识培训第29页糖化血红蛋白试验室检测指南要求年中国糖尿病杂志8月刊糖化血红蛋白的基础知识培训第30页分析系统要求测定方法要求溯源到IFCC参考方法，如NGSP认证方法 （NGSP认证使

13、用期是1年）2. 试验室要知晓所选分析系统可能存在干扰原因3. POCT方法准确性不能满足临床要求，当前不能用于糖尿病诊疗糖化血红蛋白的基础知识培训第31页中国三级医院试验室检测情况数据统计于NCCL历年室间质评数据采取NGSP标准化方法试验室占比81%糖化血红蛋白的基础知识培训第32页HbA1cTotalGHBHbA1在DCCT和UKPD结果发表之前，美国有800个试验室在做A1c检测，CAP试验调查显示在不一样试验室，用不一样检测方法得出A1c结果存有巨大差异。糖化血红蛋白的基础知识培训第33页HbA1c检测标准化美国从1996年起开展国家糖化血红蛋白标准化计划（NGSP），在HbA1c检

14、测值一致性方面取得了巨大成功在NGSP中心试验室所采取参考方法是 离子交换HPLC NGSP 由指导委员会和试验室网络组成。试验室网络包含一级中心参考试验室（CPRL）、一级参考试验室（PRL）和二级参考试验室（SRL）糖化血红蛋白的基础知识培训第34页目标: 1. 糖化血红蛋白检测项目实现标准化2. 以使各临床试验室检测结果与DCCT汇报结果含有可比性( 该DCCT试验建立了平均血糖与糖尿病并发症发病风险之间关系) 糖化血红蛋白的基础知识培训第35页临床试验室NGSP 网络 厂商 校准品1 新鲜血NGSP 程序(精密度与偏差) 认证2 新鲜血能力比对测试3 新鲜血糖化血红蛋白的基础知识培训第

15、36页NGSP标准化对A1c检测贡献从无序到有序年调查显示多家CAP试验室间使用不一样检测方法CVs在1.3-7.1%之间，基于A1c检测结果已经能够有效标准化 糖化血红蛋白的基础知识培训第37页IFCC标准化年IFCC发表文件，正式推荐 HbA1c检测参考方法为HPLC-MS(质谱)或HPLC-CE(毛细管电泳)校准品为纯化 HbAo 和 HbA1c 混合物，共 6 个浓度室内CV0.472.07%；室间CV1.352.27%糖化血红蛋白的基础知识培训第38页不过，NGSP和IFCC方法检测HbA1c值存在1%-2%差异IFCC%HbA1c2.13.2 4.3 5.4 6.4 7.5 8.6

16、 9.710.7 NGSP%HbA1c456789101112偏差 1.9 1.8 1.7 1.6 1.6 1.5 1.4 1.3 1.3非糖尿病范围控制目标需采取治疗办法糖化血红蛋白的基础知识培训第39页各个标准与IFCC之间转换JDS/JSCC% = 0.927*IFCC% + 1.73NGSP% = 0.915 * IFCC% + 2.15Sweden% = 0.989 * IFCC% + 0.88IFCC%HbA1cJDS%HbA1c2.03.64.35.66.47.68.69.610.811.6NGSP%HbA1c4681012糖化血红蛋白的基础知识培训第40页HbA1c检测必须在世

17、界范围内标准化，包含参考系统和数值汇报 IFCC参考系统是唯一标准化参考系统HbA1c以IFCC单位(mmol/mol)以及转换NGSP units (%)汇报，使用IFCC-NGSP换算公式 需要确保基层糖尿病轻易取得IFCC和NGSP转换公式 杂志编辑和出版物提议采取SI (IFCC) 和NGSP双重单位汇报HbA1c 糖化血红蛋白标准化称谓为HbA1c，在指南或教育材料中也能够简写为A1C 年HbA1c标准化第二次全球共识 (ADA、EASD、IDF、IFCC和ISPAD) in Annals of Clinical Biochemistry, Clinical Chemistry, C

18、linical Chemistry and Laboratory Medicine, Diabetes Care, Diabetes Research and Clinical Practice, Diabetologia, Diabetic Medicine and Pediatric Diabetes. NGSP = 0.09148 * IFCC + 2.152 糖化血红蛋白的基础知识培训第41页NGSP和IFCC之间转换NGSP = 0.09148 * IFCC + 2.152 糖化血红蛋白的基础知识培训第42页糖化血红蛋白HbA1c HbA1c临床应用与试验室检测相符相承试验室检测标准

19、化血糖监控指标 糖尿病筛查与诊疗1993糖化血红蛋白的基础知识培训第43页分析系统性能指标要求汇报结果：以HbA1c相当于HbA1c汇报结果，因为只有这一个分析项目才有评定并发症发生优良数据库。精密度：室内CV3%, 以小于2%为宜；测定质量目标：0.5% HbA1c准确度：与可接收参考值差值在0.5%HbA1c范围内准确度验证方法： 1）参加室间质评活动 2）检测有证参考物质； 3）与运行经过认证系统有资质试验室测定结果进行比对注意：没有直接证据显示其它检验数据与糖尿病长久并发症风险相关(比如：总糖化血红蛋白、果糖胺或糖化血清蛋白)糖化血红蛋白的基础知识培训第44页试验室不精密度对检测结果变异性影响6.5% HbA1c在不一样分析不精密度水平下95.5%离散程度糖化血红蛋白的基础知识培训第45页不一样室内CV对 A1C 分析影响（95%可信区间）CV %6.0% A1C6.5% A1C7.0% A1C25.76-6.246.24 - 6.766.72 - 7.2835.64-6.366.11 - 6.896.58 - 7.4255.4-6.65.85 7.156.3 7.7正常人和病人无法区分血糖控制好坏无法区分HbA1c结果不准确对临床医生判断影响正常值与医学决定水平差值小HbA1c可诊疗DM（只有室内CV3%,才能室间CV5%）