疫苗及其制备技术

1、疫苗及其制备技术疫苗及其制备技术第1页第一节 概述一、疫苗产生“12世纪，中国开始用人痘接种预防天花”疫苗可预防疾病流行病学与预防学第6版，美国疾病控制与预防中心（CDC） 年出版疫苗及其制备技术第2页一、疫苗产生天花（Smallpox）由天花病毒引发一个烈性传染病天花病毒：呈砖形，能反抗干燥和低温，在痂皮、尘土和被服上可生存数月至一年半之久临床表现：主要为严重毒血症状、皮肤成批依次出现斑疹、丘疹、疱疹、脓疱，最终结痂、脱痂，遗留痘疤。传输路径：飞沫吸入或直接接触。 特点：发展快速，未免疫人群感染后 15-20天内致死率高达30。疫苗及其制备技术第3页一、疫苗产生天花防治中国宋真宗时期（998

2、- 1023年） ：人痘法，吸入天花病人痂粉预防天花。明朝隆庆年间（1567-1572年）：痘衣法、痘浆法、旱痘法和水苗法等各种接种方法出现。清朝顺治死于天花，得过天花康熙继位人痘法缺点：有时也会引发严重天花疫苗及其制备技术第4页一、疫苗产生天花防治欧洲1721年，人痘接种法传入英国1796年，英国医生E. Jenner 利用牛痘防治天花1798年，医学界正式认可“疫苗接种确实是一个行之有效免疫方法”。细胞培养法取得天花病毒牛痘苗 疫苗及其制备技术第5页一、疫苗产生疫苗之父法国免疫学家 Louis Pasteur鸡霍乱弧菌减毒株（第一个细菌减毒活疫苗）疫苗及其制备技术第6页一、疫苗产生巴斯德与

3、狂犬病疫苗异体传代法：将狂犬病毒在兔体内经连续传代，取得了减毒株 疫苗及其制备技术第7页一、疫苗产生巴斯德在疫苗领域卓越贡献细菌分离培养技术减毒菌株取得 连续传代培养法 高温培养法 异体传代法巴氏减毒菌苗创造：为试验免疫学建立了基础疫苗及其制备技术第8页二、疫苗及其技术发展简史（一）减毒活疫苗技术第一次疫苗革命（二）基因重组疫苗技术第二次疫苗革命（三）反向疫苗学技术第三次疫苗革命疫苗及其制备技术第9页二、疫苗及其技术发展简史血源乙肝疫苗：无症状HBsAg携带者血浆提取HBsAg，经纯化，灭活及添加佐剂制成。 基因重组（转基因）乙肝疫苗：利用转基因技术，构建含有乙肝病毒HBsAg基因重组质粒，转

4、入酵母（或重组CHO细胞）表示乙型肝炎表面抗原，在繁殖过程中产生未糖基化HBsAg多肽，经破碎酵母菌体，颗粒形未糖基化HBsAg多肽释放，经纯化，灭活，添加佐剂制成。 疫苗及其制备技术第10页二、疫苗及其技术发展简史基因工程技术在疫苗领域应用构建无毒或减毒疫苗：毒素基因突变构建载体活疫苗：目标基因克隆至临床常规使用活疫苗中疫苗及其制备技术第11页二、疫苗及其技术发展简史（三）反向疫苗学技术蛋白质水平全基因水平筛选含有保护性免疫反应候选抗原详细步骤：1. 基因组信息分析结合基因芯片筛选候选疫苗成份2. 高通量基因重组表示候选疫苗蛋白成份3. 免疫保护性测试疫苗及其制备技术第12页二、疫苗及其技术

5、发展简史例：B型脑膜炎球菌（meningococcus B） 先用计算机分析B型脑膜炎球菌基因组，找到600个潜在疫苗候补，将其中350个在大肠杆菌中进行表示，然后将蛋白提纯用于免疫小鼠，其中找到29个蛋白能诱导小鼠产生抗体，从而到达预防免疫作用。 疫苗及其制备技术第13页第二节 疫苗组成、作用原理、类型与特点一、疫苗组成抗原佐剂防腐剂稳定剂灭活剂 缓冲液、盐类等非活性成份疫苗及其制备技术第14页一、疫苗组成1. 抗原（antigen，Ag）疫苗最主要有效活性成份免疫原性（immunogenicity）：刺激机体特异性免疫细胞活化、增殖、分化并产生免疫效应物。免疫反应性（immunoreact

6、ivity）：与免疫效应物发生特异性结合而产生免疫反应。疫苗及其制备技术第15页一、疫苗组成常见抗原包含： 灭活病毒或细菌 活病毒或细菌（减毒株） 病毒或菌体提纯物 有效蛋白成份 类毒素 细菌多糖 合成多肽 核酸疫苗及其制备技术第16页2. 佐剂（adjuvant）非特异性增强抗原免疫应答或改变免疫应答类型物质。 要求：安全无毒、 在非冷藏条件下稳定作用机制：改变抗原物理形状，延长抗原在机体内保留时间 刺激单核巨噬细胞反抗原递呈能力 刺激淋巴细胞分化，增加扩充免疫应答能力一、疫苗组成疫苗及其制备技术第17页一、疫苗组成常见佐剂：用于人体：铝佐剂 / MF59（水包油乳剂）动物试验：弗氏完全佐剂

7、（FCA） / 弗氏不完全佐剂（FIA）疫苗及其制备技术第18页3. 防腐剂大多数灭活疫苗都使用防腐剂目标：预防外来微生物污染常见： 0.010.02硫柳汞 2-苯氧乙醇 氯仿副作用： 接触性皮炎、变应性结膜炎、耳毒性一、疫苗组成疫苗及其制备技术第19页4. 稳定剂目标：确保作为抗原病毒或其它微生物存活，并保持免疫原性冻干疫苗中常见：乳糖、明胶、山梨醇等。一、疫苗组成疫苗及其制备技术第20页5. 灭活剂灭活病毒或细菌抗原方法：物理方法（如加热、紫外线照射等）化学方法（丙酮、酚、甲醛等）对人体有一定毒害作用，所以在灭活抗原后必须及时从疫苗中除去，并经严格检定以确保疫苗安全性。一、疫苗组成疫苗及其

8、制备技术第21页6. 缓冲液、盐类缓冲液种类、盐类含量都可影响疫苗效力、纯度和安全性，所以都有严格质量标准一、疫苗组成疫苗及其制备技术第22页二、疫苗作用原理当机体经过口服或注射等路径接种疫苗后，其中抗原分子刺激机体免疫系统产生高效价特异性免疫保护物质当机体再次接触到相同病原菌抗原时，免疫系统依循免疫记忆，快速制造出保护物质来阻断病原菌入侵，从而使机体取得针对病原体特异性免疫力，使其免受侵害而取得保护。疫苗及其制备技术第23页三、疫苗类型与特点（一）减毒活疫苗（二）灭活疫苗（三）亚单位疫苗（四）联合疫苗（五）核酸疫苗（六）治疗性疫苗疫苗及其制备技术第24页三、疫苗类型与特点（一）减毒活疫苗（l

9、ive attenuated vaccine）经过一定方法使病原体致病性减弱或丧失后取得由完整微生物组成疫苗制品特点：能引发机体感染但不发生临床症状，但其免疫原性可引发机体免疫反应，刺激机体产生特异性记忆B细胞和记忆T细胞，起到取得长久或终生保护作用。 疫苗及其制备技术第25页三、疫苗类型与特点优点： 接种次数少，反应小，免疫效果好（体液免疫、细胞免疫、黏膜免疫），成本低缺点： 稳定性差，有毒力返祖现象，污染环境，免疫缺点者不能接种疫苗及其制备技术第26页三、疫苗类型与特点疫苗及其制备技术第27页三、疫苗类型与特点（二）灭活疫苗（inactivated vaccine）将病原体经培养增殖、灭活

10、、纯化处理后取得保留病原体几乎全部组分疫苗制品。特点：失去了病原体感染性，但保留了较强免疫原性和很好安全性疫苗及其制备技术第28页三、疫苗类型与特点优点： 稳定性好，反应小，免疫缺点者也可接种缺点： 需屡次接种，免疫效果较差（体液免疫），需要量大疫苗及其制备技术第29页三、疫苗类型与特点疫苗及其制备技术第30页三、疫苗类型与特点（三）亚单位疫苗（subunit vaccine） 利用微生物某种表面结组成份制成能诱发机体产生抗体疫苗制品。分类： 纯化亚单位疫苗：单个蛋白或寡糖组成、佐剂 合成肽亚单位疫苗：抗病毒/肿瘤/细菌、寄生虫感染 基因工程亚单位疫苗疫苗及其制备技术第31页三、疫苗类型与特点

11、基因工程亚单位疫苗（genetic engineering subunit vaccine） 在分离出病原体特异抗原编码基因基础上，将外源基因转入非致病性微生物内表示产物，然后经过分离纯化取得特异蛋白质。 原核细胞（大肠杆菌）、真核细胞（酵母） 活载体疫苗（细菌、病毒）、转基因植物疫苗疫苗及其制备技术第32页三、疫苗类型与特点疫苗及其制备技术第33页三、疫苗类型与特点（四）联合疫苗（combined vaccine）两种或两种以上抗原物理混合后制成疫苗制剂。多联疫苗（multi-combined vaccine）：预防不一样病原微生物引发传染病（例：百白破）多价疫苗（multivalent v

12、accine）：预防由同一病原微生物不一样亚型引发传染病（例：23价肺炎多糖疫苗）疫苗及其制备技术第34页三、疫苗类型与特点疫苗及其制备技术第35页三、疫苗类型与特点（五）核酸疫苗（nucleic acid vaccine）也称基因疫苗（genetic vaccine），包含DNA疫苗和RNA疫苗。由抗原编码基因和载体组成， 导入机体细胞后可经过宿主细 胞转录系统表示蛋白抗原， 诱导宿主产生细胞和体液免疫应答疫苗制剂。疫苗及其制备技术第36页三、疫苗类型与特点DNA疫苗（DNA vaccine）将编码外源性抗原基因插入到含真核表示系统质粒上，导入宿主细胞内表示抗原蛋白，诱导机体产生免疫应答。特

13、点：免疫效果好，制备方便，可重复使用，可用于免疫治疗和联合免疫疫苗及其制备技术第37页三、疫苗类型与特点疫苗及其制备技术第38页三、疫苗类型与特点（六）治疗性疫苗（therapeutic vaccine）在已感染病原微生物或已患有一些疾病机体中，经过诱导特异性免疫应答，到达治疗或预防疾病恶化疫苗制品。最早治疗性疫苗：狂犬病疫苗 疫苗及其制备技术第39页三、疫苗类型与特点1. 基于组成成份及性质分类（1）蛋白质复合重构治疗性疫苗改造靶抗原结构或组合，使其相同而又有异于传统疫苗靶抗原，重新唤起患者功效性免疫应答，进而打破和逆转患者免疫耐受状态。改造方法：蛋白修饰，结构/构型改造，蛋白复合/多肽偶联

14、疫苗及其制备技术第40页三、疫苗类型与特点（2）基因疫苗DNA疫苗：埃博拉（Ebola）疫苗、乙型肝炎（HBV）疫苗、丙型肝炎（HCV）疫苗、人免疫缺点病毒（HIV）疫苗等RNA疫苗：RNA修饰树突状细胞（DC）疫苗等疫苗及其制备技术第41页三、疫苗类型与特点（3）多水平基因修饰细胞疫苗肿瘤治疗性疫苗：肿瘤细胞/DC细胞疫苗制备过程：疫苗及其制备技术第42页三、疫苗类型与特点2. 基于治疗疾病种类分类（1）感染性疾病治疗性疫苗（2）肿瘤治疗性疫苗（3）本身免疫性疾病治疗性疫苗（4）移植用治疗性疫苗疫苗及其制备技术第43页三、疫苗类型与特点疫苗及其制备技术第44页三、疫苗类型与特点预防性疫苗治疗

15、性疫苗病原体蛋白不需改造需经分子设计和重新构建受用者健康人体患者监测伎俩保护性抗体产生情况疾病改进情况激发免疫应答类型体液免疫为主细胞免疫为主疫苗及其制备技术第45页第三节 疫苗制备方法灭活全毒疫苗流感全病毒灭活疫苗减毒活疫苗皮内注射用卡介苗基因工程重组亚单位疫苗重组乙型肝炎疫苗生化提取亚单位组分疫苗吸附破伤风疫苗治疗性疫苗前列腺癌疫苗Sipuleucel-T疫苗及其制备技术第46页疫苗生产普通流程疫苗及其制备技术第47页一、灭活全毒疫苗流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）本品系用世界卫生组织（WHO）推荐并经国家食品药品监督

16、管理局同意流感病毒株，分别接种鸡胚，经培养、收获病毒液，病毒灭活、浓缩和纯化后制成。用于预防本株病毒引发流行性感冒疫苗及其制备技术第48页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）Theinfluenza vaccine is an annual vaccination using a vaccine that is specific for a given year to protect against the highly variableinfluenza virus. Each seasonal influenza va

17、ccine contains antigens representing three (trivalent vaccine) or four (quadrivalent vaccine) influenzavirus strains: two influenza type A virus strains, and either one or two influenza type B virus strains. 疫苗及其制备技术第49页流感病毒甲型流感病毒（Influenza A virus）最轻易发生变异（抗原转变、抗原漂移）世界性流感大流行：甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引发甲型流感病

18、毒依据H (hemagglutinin，血凝素)和N (neuraminidase，神经氨酸酶)抗原不一样分为许多亚型，H有17个亚型（H1H17），N有10个亚型（N1N10）。H1、H5、H7亚型为高致病性疫苗及其制备技术第50页流感病毒乙型流感病毒（Influenza B virus）抗原变异很慢不足流行，对人类致病性较低丙型流感病毒（Influenza C virus）抗原稳定致病力较弱，主要侵犯幼儿和免疫力低下人群，只引发人类不显著或轻微上呼吸道感染疫苗及其制备技术第51页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）In

19、fluenza vaccines may beadministeredas an injectionor as a nasal spray.The U.S.Centers for Disease Control and Prevention recommend that everyone over the ages of 6 months should receive the seasonal influenza vaccine.Vaccination campaignsusually focus on people who are at high risk ofserious complic

20、ationsif they catch the flu, such as the elderly and people living with chronic illnessor those withweakened immune systems, as well as health care workers.疫苗及其制备技术第52页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）（一）制备方法1. 生产用原材料鸡胚是分离各类病毒较为理想材料尿囊腔疫苗及其制备技术第53页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza

21、 whole virion vaccine）（1）鸡胚毒种传代和制备：起源于SPF（Specific pathogen Free）鸡群疫苗生产：起源于封闭式房舍内喂养健康鸡群、9-11日龄无畸形、血管清楚、活动（2）毒种WHO推荐并提供甲型和乙型流感病毒株疫苗及其制备技术第54页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）2. 毒种种子批建立及检定符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”要求疫苗及其制备技术第55页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）2. 毒种

22、种子批建立及检定建立：以毒种为基础传代（5代以内得成品疫苗） 血凝素型别判定试验 血凝抑制试验 单向免疫扩散试验 病毒滴度：鸡胚半数感染剂量法 血凝滴度：血凝法 无菌检验、支原体检验 外源性禽白血病病毒、禽腺病毒检测：ELISA保留：冻干毒种-20以下，液体毒种-60 以下 检定疫苗及其制备技术第56页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）3. 单价原液制备各流感病毒工作种子批分别接种（尿囊腔），33-35培养48-72h病毒收获（尿囊液）收获液检定 微生物程度：菌数105CFU/ml，沙门氏菌为阴性 血凝滴度收获液合并疫苗

23、及其制备技术第57页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）3. 单价原液制备病毒灭活（甲醛200g/ml）、验证及内毒素含量测定浓缩（超滤）、纯化（柱色谱法、蔗糖密度区带离心）及过滤除菌（硫柳汞）单价原液保留（2-8）疫苗及其制备技术第58页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）4. 半成品制备对单价原液依据相同血凝素含量进行配制：15-18g/剂补加硫柳汞5. 成品制备半成品分批、分装及冻干后包装：0.5-1.0ml/剂，含各型流感病毒株血凝素为15g/

24、剂疫苗及其制备技术第59页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）（二）检定要求1. 单价原液检定判别试验：血凝抑制试验、单向免疫扩散试验病毒灭活验证试验：鸡胚存活率、血凝试验血凝素含量检测：单向免疫扩散试验疫苗及其制备技术第60页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）2. 半成品检定游离甲醛含量50g/剂硫柳汞含量50g/剂血凝素含量：配制量80%-120%无菌检验疫苗及其制备技术第61页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza w

25、hole virion vaccine）3. 成品检定判别：单向免疫扩散试验外观：乳白色液体，无异物pH值：6.8-8.0硫柳汞含量 50g/剂蛋白质含量 200g/剂血凝素含量：配制量80%-120%卵清蛋白含量 250 ng/剂抗生素残留量 50 ng/剂疫苗及其制备技术第62页一、流感全病毒灭活疫苗（inactiated influenza whole virion vaccine）疫苗及其制备技术第63页二、减毒活疫苗皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）本品系用卡介菌经培养后，搜集菌体，加入稳定剂冻干制成疫苗及其制备技术第64页

26、二、皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）（一）基础要求生产车间、设备及器具专用制造、包装过程避光工作人员：身体健康、无结核病疫苗及其制备技术第65页二、皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）（二）制备方法1. 生产用菌种： 符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”要求卡介菌D2PB 302菌株疫苗及其制备技术第66页二、皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）2. 种子批建立及检定(12代)培养特征：菌落特征（多皱、微黄菌膜）毒

27、力试验（豚鼠腹腔注射）：体重不减轻，解剖观察无有毒分枝杆菌试验（豚鼠皮下注射）：体重不减轻，解剖观察免疫力试验（豚鼠皮下注射）：解剖分析保留：冻干，8 以下疫苗及其制备技术第67页二、皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）3. 原液制备生产用种子：工作种子批生产用培养基：液体苏通培养基等接种与培养：37-39静止培养收获和合并：搜集菌膜，压干，研磨，加入稳定剂稀释疫苗及其制备技术第68页二、皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）4. 半成品制备稳定剂稀释：0.5-1.0mg/ml5.

28、 成品制备分装、冻干、封口保留疫苗及其制备技术第69页二、皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）（三）检定要求1. 原液检定纯菌检验：涂片镜检浓度测定：参考标准品，分光光度法检测2. 半成品检定沉降率测定：静置，分光光度法检测活菌数测定1.0107 CFU/mg活力测定：XTT法疫苗及其制备技术第70页二、皮内注射用卡介苗（BCG vaccine for intradermal injection）3. 成品检定判别试验：抗酸染色涂片外观：白色疏松体或粉末状，加水成均匀悬液水分3.0%效力测定（豚鼠皮下注射）：局部硬结反应活菌数测定1.0

29、106 CFU/mg无有毒分支杆菌试验（豚鼠皮下注射）：体重不减轻，解剖观察热稳定性试验：37 放置28天，计算活菌率疫苗及其制备技术第71页三、基因工程亚单位疫苗重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）由重组酵母细胞表示乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。疫苗及其制备技术第72页三、重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）（一）制备方法1. 生产用菌种：基因重组构建表示HBsAg重组酿酒酵母原始菌种疫苗及其制备技术第73页三、重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B va

30、ccine）2. 种子批建立及检定符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”要求建立：原始菌种传代 培养物纯度：无细菌和其它真菌检出 HBsAg基因序列测定检定 质粒保有率：平板复制法 活菌率：血细胞计数板 抗原表示率：蛋白质含量、 HBsAg含量保留：工作种子批-70保留，其余液氮保留疫苗及其制备技术第74页三、重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）3. 原液制备发酵：锥形瓶、种子罐、生产罐三级发酵纯化：细胞破碎（Triton X-100） 、硅胶吸附、疏水色谱纯化、硫氰酸盐处理、稀释、过滤除菌保留：2-8 ，不超出3个月疫苗及其制备技术第75页三、

31、重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）4. 半成品制备甲醛处理：100g/ml铝吸附配制：与铝佐剂等量混合5. 成品制备分批、分装及冻干后包装疫苗及其制备技术第76页三、重组乙型肝炎疫苗（recombinant Hepatitis B vaccine）（二）检定要求1. 原液检定特异蛋白带：SDS，20-25kD蛋白带N-端氨基酸序列测定：氨基酸序列分析仪纯度：免疫印迹法、高效液相色谱法2. 半成品检定吸附完全性95%硫氰酸盐含量1.0g/mlTriton X-100含量15.0g/ml疫苗及其制备技术第77页三、重组乙型肝炎疫苗（recombina

32、nt Hepatitis B vaccine）3. 成品检定判别试验：ELISA外观：乳白色混悬液pH值：5.5-7.2铝含量:0.35-0.62 mg/ml疫苗及其制备技术第78页四、生化提取亚单位组分疫苗吸附破伤风疫苗（adsorbed tetanus vaccine）本品系采取破伤风梭状芽孢杆菌，在适宜培养基中培养后提取破伤风毒素蛋白经甲醛脱毒、精制，加入氢氧化铝佐剂制成。疫苗及其制备技术第79页四、吸附破伤风疫苗（adsorbed tetanus vaccine）（一）制备方法1. 生产用菌种：产毒效价高、免疫力强破伤风梭状芽孢杆菌疫苗及其制备技术第80页四、吸附破伤风疫苗（adsor

33、bed tetanus vaccine）2. 种子批建立及检定符合“生物制品生产检定用菌毒种管理规程”要求建立：原始菌种传代 培养特征：专性厌氧菌、培养观察 染色镜检：革兰氏染色检定 生化反应：不发酵糖类、不还原硝酸盐等 产毒试验(小鼠皮下注射)：观察症状 特异性中和试验(小鼠皮下注射)：观察症状保留：2-8疫苗及其制备技术第81页四、吸附破伤风疫苗（adsorbed tetanus vaccine）3. 类毒素原液制备毒素取得：微生物培养，离心上清，除菌过滤脱毒（甲醛）及检定（豚鼠皮下注射）：体重、症状精制：等电点沉淀、盐析、超滤等，加硫柳汞保留：2-8 疫苗及其制备技术第82页四、吸附破伤

34、风疫苗（adsorbed tetanus vaccine）4. 半成品制备佐剂配制：氢氧化铝吸附类毒素配制：7-10 Lf/ml5. 成品制备分批、分装、冻干后包装疫苗及其制备技术第83页四、吸附破伤风疫苗（adsorbed tetanus vaccine）（二）检定要求1. 类毒素原液检定pH值：6.6-7.4纯度：1500Lf/mg蛋白氮特异性毒性检验（豚鼠皮下注射）：体重、症状毒性逆转试验（豚鼠皮下注射）：体重、症状2. 半成品检定无菌检验疫苗及其制备技术第84页四、吸附破伤风疫苗（adsorbed tetanus vaccine）3. 成品检定判别试验：动物试验、絮状试验、凝胶免疫沉淀

35、外观：乳白色悬液化学检定：pH、氢氧化铝、硫柳汞、甲醛等含量效价测定40IU/剂特异性毒性检验（豚鼠皮下注射）：体重、症状疫苗及其制备技术第85页五、治疗性疫苗前列腺癌疫苗Sipuleucel-TDENDREON企业自体细胞免疫疗法 年同意上市，首个被FDA同意治疗性癌症疫苗疫苗及其制备技术第86页五、治疗性疫苗前列腺癌疫苗Sipuleucel-T基础步骤:采集患者外周血单个核细胞，培养生成抗原提呈细胞（树枝状细胞) 树枝状细胞在培养条件下用基因工程制备融合蛋白（PA2024）孵育, 这种融合蛋白由两个别组成: 抗原-前列腺酸性磷酸酶（PAP），PAP能在95%前列腺癌细胞中表示; 粒细胞-巨

36、噬细胞集落刺激因子（GM-CSF), 一个能帮助树枝状细胞成熟和激活免疫信号因子搜集经融合蛋白孵育刺激树枝状细胞等免疫活性细胞重新注入患者体内, 激发体内产生针对携带PAP抗原前列腺癌细胞抗肿瘤免疫反应 疫苗及其制备技术第87页第四节 疫苗生产质量控制疫苗及其制备技术第88页疫苗及其制备技术第89页疫苗及其制备技术第90页疫苗及其制备技术第91页疫苗及其制备技术第92页疫苗及其制备技术第93页一、原材料质量控制（一）生产用水（二）器材、溶液等原材料（三）动物源原材料：SPF级（四）菌种和毒种（五）细胞疫苗及其制备技术第94页（四）菌种和毒种疫苗及其制备技术第95页疫苗及其制备技术第96页二、生

37、产过程质量控制中国生物制品规程GMP人员素质、卫生及无菌要求疫苗及其制备技术第97页疫苗及其制备技术第98页疫苗及其制备技术第99页三、疫苗产品质量控制（一）理化检定 检测疫苗中有效成份和无效有害成份 物理性状检验 蛋白质含量测定：基因工程疫苗 防腐剂含量测定 纯度检验 其它：水分、佐剂等疫苗及其制备技术第100页三、疫苗产品质量控制（二）安全性检定菌、毒种和主要原材料检验半成品检验成品检验疫苗及其制备技术第101页三、疫苗产品质量控制（三）效力检定免疫力试验活疫苗效力测定血清学试验疫苗及其制备技术第102页第五节 疫苗产业特点及应用概况疫苗行业是生物医药领域中比较高端细分领域，含有较高技术壁垒、资金壁垒和政策壁垒。全球疫苗85%疫苗市场被葛兰素史克、赛诺菲安万特、默克、惠氏和诺华这五家跨国制药企业所垄断。我国疫苗市场规模已靠近100亿元，全世界排名前10位制药企业已全部进军中国市场。疫苗及其制备技术第103页一、疫苗研发生产特点需全程监管研发是疫苗供给体系关键周期长、投入高、风险大：10年以上一条生产线只生产一个产品对大规模产业化生产技术需求高投入产出比高疫苗及其制备技术第104页二、我国疫苗分类及需求政府无偿向公民提供、公民依照政府要求