免疫课件2013级实验

1、实 验 二Part I 凝集反应Part II 沉淀反应Part III 免疫血清的制备与应用 -家兔心脏取血潍坊医学院免疫学教研室林志娟Tel: 8462530 实验内容凝集反应 直接凝集反应：玻片凝集ABO血型鉴定 沉淀反应 环状沉淀 琼脂扩散技术：单向免疫扩散、双向免疫扩散 电泳技术：对流免疫电泳实验 心脏取血-免疫血清的制备与应用Part I 凝集反应 定义： 颗粒性抗原（病原微生物或红细胞）与相应的抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的凝集块，这种现象叫做凝集反应。凝集反应直接凝集反应 玻片凝集 细菌鉴定 ABO血型鉴

2、定 试管凝集【原理】细菌、螺旋体和红细胞等颗粒性抗原在适当电解质存在的条件下，可以直接与相应的抗体特异性结合，形成肉眼可见的凝集块。【分类】 ABO血型鉴定人类ABO血型系统【原理】 人类ABO血型抗原分A、B两种。A型血者红细胞膜上有A抗原，B型血者红细胞膜上有B抗原，AB型有A、B两种抗原，O型则不含A、B抗原。 用已知的抗A或抗B试剂与受检者红细胞混合时，抗A和/或抗B血清与红细胞表面上的相应抗原结合而引起红细胞凝集，根据其凝集状况便可判定受试者的血型。抗A 、抗B标准血清、生理盐水；塑料板、采血针、试管、滴管、消毒棉棒、牙签、记号笔等。【实验器材】A B抗B 1滴 抗A 1滴 NS 5

3、滴血 1滴红细胞悬液 红细胞悬液 1滴注意事项消毒处干燥后再取血滴管不可与抗体液面接触不可用牙签的同一头混合液体【实验步骤】结果观察A型B型AB型O型抗A 抗BPart II 沉淀反应【原理】 可溶性抗原（多糖、蛋白质、类脂等）与相应抗体特异性结合，在电解质存在的条件下，如果两者比例适当，在一定的温度下经过一定的时间，可以形成肉眼可见的沉淀物，这种现象称为沉淀反应。 环状沉淀 免疫扩散技术：双向免疫扩散、单向免疫扩散 电泳技术：对流免疫电泳、免疫电泳、火箭免疫电泳【分类】1. 单向免疫扩散【原理】 将某种特异性抗体混合于琼脂中，再于含抗体的琼脂板上打孔，将一定量的抗原加入孔中。孔中抗原向四周呈

4、辐射状扩散。若抗原与已知抗体相对应，在两者比例适合处即出现由IC所形成的沉淀环，其大小与抗原浓度成正比。此实验属于定量实验。主要用于测定血清IgG、IgM、IgA和补体成份的含量。 单向免疫扩散【原理】可溶性抗原与抗体分别加到琼脂板上相应的小孔中，两者各自向四周扩散，若抗原与抗体相对应，两者相遇即发生特异性结合，并在比例合适处形成白色沉淀线。可以用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体），鉴定抗原性物质或免疫血清的浓度、纯度以及比较抗原之间的异同点。2. 双向免疫扩散抗体抗原可用已知抗体（或抗原）检测未知抗原（或抗体），鉴定抗原性物质或免疫血清的浓度、纯度以及比较抗原之间的异同点。24h【实验

5、步骤】123564123564 中央 孔：抗体（AFP诊断血清）。 1、4孔：阳性对照（AFP阳性血清）； 2、3、5、6孔：相应待检抗原。 放入湿盒内，24h后检查结果。 对准序号加样3. 对流免疫电泳试验【原理】在双向免疫扩散基础上加电泳的方法。带电胶体颗粒在电场中移动的方向与其所带电荷有关。抗原在pH8.6的缓冲溶液中带负电荷，由阴极向阳极移动。抗体为球蛋白，只带微弱的负电荷，分子量又大，因为电渗作用反而向负极倒退。抗原与抗体在琼脂两孔间相遇时，在两者比例适当处形成白色沉淀线。抗原、抗体在电场中定向移动，被限制了多方向自由扩散的倾向，因而提高了实验敏感度，且沉淀线出现较快，可在1小时之内

6、观察结果，所以可用于快速诊断。 【实验器材】0.05mol/L，pH8.6巴比妥缓冲液。抗AFP血清，已知AFP阳性血清，待检血清。玻片、吸管、打孔器、微量移液器、电泳仪等。【实验步骤】待检血清已知阳性血清Ag电极电极12123 43 4抗AFP血清Ab抗AFP血清Ab待检血清已知阳性血清Ag电极电极12123 43 4抗AFP血清Ab抗AFP血清Ab？【原理】将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体，这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。取羊红细胞免疫家兔一只，心脏采血，分离血清，血清中含有特异性抗体（抗羊红细胞抗体、溶血素）。Part III 家兔心

7、脏采血 -免疫血清的制备与应用SRBC浆细胞B细胞皮内注射抗体(Ab)溶血素（抗绵羊红细胞抗体）【实验器材】免疫家兔；消毒棉球、注射器、试管、离心机等。固定家兔，用碘酒、酒精消毒心前区皮肤。胸骨左缘外侧1-2cm左右、3-4肋间，（胸骨中线中段略偏左处），选择心跳最明显处垂直进针。注射部位正确时，血液会自动涌入针管。缓慢抽出所需血量，体重2kg左右的家兔，一般每次可采血45ml 。取下注射器针头，将家兔血液缓慢注入无菌试管中。【实验步骤】取血部位要准确，不要划破家兔心脏，尽量不令动物死亡；见到回血再取血；向试管中注射血液时要将针头取下。注意事项1. 抗原抗体检测：特异性、可见性 凝集反应：颗粒性抗原 直接凝集反应 玻片凝集-定性 沉淀反应：可溶性抗原 定性：双扩、对流免疫电泳（双扩电泳） 环状沉淀 定量：单扩2. 心脏取血-免疫血清的制备与应用小结实 验 报 告ABO血型鉴定的原理、步骤、结果、分析；对流免疫电泳实验的原理、步骤、结果、分析。值日 请排