临床免疫学检验：移植免疫与免疫学检测

1、移植免疫与免疫学检测第二十五章教学目标1.掌握：移植抗原的类型, 移植排斥反应的类型和特点，如何预防排斥反应的发生；排斥反应的免疫检测2.熟悉：移植相关的概念，常用的免疫抑制剂3.了解：常见器官移植的种类和特点；一. 基本概念移植（transplantation）受体(receipt):接受移植物的个体，也称宿主。供体(donor): 提供移植物的个体。移植物(graft, transplant):被移植的部分。 将健康细胞，组织或器官从其原部位移植到自体或异体的 一定部位，用以替代或补偿机体所丧失的结构和功能的 现代医疗手段。一. 基本概念移植自体移植同系移植同种异体移植异种移植同卵双生子、

2、近交系动物人人猪人不排斥排斥二. 同种异基因移植排斥的本质本质是对同种异型抗原（alloantigen）的免疫应答，具有免疫应答的所有特征, 如特异性和记忆性，T细胞在移植排斥反应中起关键作用；宿主抗移植物反应移植物抗宿主反应Host versus graft reaction ,HVGRGraft versus host reaction ,GVHR1. 靶抗原(同种异型抗原)主要组织相容性抗原 MHC抗原HLA次要组织相容性抗原 mHC抗原Major histocompatibility complexMinor histocompatibility system引起快而强烈的排斥反应引起

3、的排斥反应一般较弱是引起移植排斥的主要抗原，也称移植抗原如 H-Y为Y染色体连锁, 组织特异性抗原 2.细胞 识别与被识别组织细胞血管内皮细胞HLA I IIHLA I过路细胞（过客细胞）：移植物内APC、淋巴细胞HLA I II主要由受者T细胞介导：CD8+T、CD4+T3.受者T细胞对供者MHC分子的识别（同种识别）直接识别间接识别受者T细胞直接识别供者细胞表面的MHC分子或MHC分子抗原肽复合物供者MHC分子由受者APC摄取、加工后由受者MHC分子所提呈（脱落的MHC分子或脱落的细胞）引起的排斥反应快而强，是早期急性排斥的主要机制引起的排斥反应较晚一些，介导急性排斥反应的中、晚期和慢性排

4、斥反应mHC和其它抗原亦是此种方式识别TAPCAPCT供者APC受者APC任意肽 供者MHC分子的片段直接识别间接识别受者T三.同种异体移植排斥反应的类型及效应机制超急性排斥反应急性排斥反应慢性排斥反应血管接通后数分钟 至 12天移植后数周至数月内移植后数月至数年HVGR1. 超急性排斥反应预存抗体（ABO血型抗体，HLA抗体；术前反复输血、怀孕、再次移植等）抗原（红细胞，血管内皮细胞表面）激活补体直接破坏靶细胞活性片段引起血管通透性增高,中性粒细胞浸润,引起组织损伤纤维蛋白沉积和大量血小板聚集血管炎症反应、血管内凝血，导致血栓器官不可逆性缺血、变性、坏死2. 急性排斥反应细胞免疫排斥体液免疫

5、排斥CD4+ Th介导的迟发型超敏反应性损伤CD8+ CTL的细胞毒效应补体激活,ADCC急性间质炎急性血管炎抗体在移植排斥中的作用1 导致移植物被排斥CDC: 补体依赖的细胞毒性。参与这种作用的抗体主要 是IgM类抗体。2 保护移植物不被排斥ADCC: 抗体依赖的细胞毒性。与移植物结合后，可通过其Fc段 与具有IgG Fc受体的NK细胞、巨噬细胞结合，导致它们 活化，直接破坏移植物。参与这种ADCC作用的抗体是 IgG类。可与移植物上的抗原结合，但不激活补体，也不引起细胞毒效应，却可阻断其他抗体或T细胞与这一抗原决定簇结合，从而起到保护作用，此类抗体被称为封闭抗体/增强抗体（blocking

6、 antibody/enhancing antibody）。 3. 慢性排斥反应由多因素参与急性排斥反应的延续CD4+Th和巨噬细胞相关的慢性炎症反复多次抗体或细胞介导的内皮损伤细胞损伤诱发持续分泌多种生长因子(如胰岛素样生长因子、血小板源性生长因子、转化生长因子等）导致血管壁增厚、间质纤维化间质纤维化、移植物内血管硬化移植物抗宿主反应（Graft versus host reaction ,GVHR ）骨髓移植：供者T细胞对受者细胞的MHC抗原产生的免疫应答，导致宿主皮肤、肝脏、肠道上皮细胞等损害。主要分为急性和慢性两种。四.同种异体移植排斥反应的防治1. ABO抗体筛查2. 细胞毒试验(交

7、叉配型)CDC: 受者血清+供者T/B细胞超急性排斥自身交叉配型:排除假阳性流式细胞术交叉配型3.HLA配型：4. 淋巴细胞交叉配型急、慢性排斥反应供受者淋巴细胞混合培养抗原分型(血清):等位基因分型供者和受者均需做HLA分型，以便选择最匹配的供受者。在HLA-A、B、C、DR、DQ、DP六个位点中一般主要做 DR、A、B，其中II抗原比I类抗原更重要一些。相关统计结果提示：3位点6个抗原均匹配时，移植肾的10年存活率为62%，5抗原为47%，4抗原为45%，3抗原为40%，无1匹配时为33%，说明HLA配型可减少移植物的同种异型抗原性，有助于提高移植物的长期存活率。移植物存活与HLA配型的关

8、系群体反应性抗体（PRA）:1.用40-100份已知HLA类型的无关淋巴细胞做CDC试验，检测待移植受者血清中所含细胞毒性HLA抗体的百分数(PRA)。2.国际上，应用群体反应性抗体水平，判断器官移植 时受体的敏感程度。高PRA 状态的受体对所接受的 移植物将构成较大的威胁。4.使用免疫抑制剂环孢霉素A（CsA）, FK506 :抑制IL-2/IL-2R表达硫唑嘌呤,环磷酰胺：抑制DNA合成，细胞增殖糖皮质激素：抑制MHC分子表达，巨噬细胞的活化生物性免疫抑制剂化学类免疫抑制剂抗淋巴细胞球蛋白（ALG）或抗胸腺细胞球蛋白(ATG)细胞性单克隆抗体：抗CD3,CD4,CD8融合蛋白：IL-2与白

9、喉毒素融和蛋白，CTLA-4/Ig Fc反义寡核苷酸5. 诱导对移植物的免疫耐受大量输入可溶性供者MHC分子或其中的关键性基序，诱导特异性T细胞凋亡乃至耐受大量输入可溶性CTLA-4，以阻断B7与CD28的相互作用，干扰共刺激信号的形成，诱导T细胞无能T细胞疫苗：诱导抗独特性抗体，破坏针对移植物的特异性T 细胞，诱导免疫耐受诱导或过继调节性T细胞、耐受性DC细胞，诱导免疫耐受五 . 排斥反应的免疫监测1. 体液免疫水平的检测： a.特异性抗体水平的检测； b.补体水平的检测；2. 细胞免疫水平的检测： a.外周血T细胞及其亚群的计数和比值变化， CD30、CD69； b.NK细胞活性测定，CD3-CD16+CD56+； c.血清细胞因子测定，IL-2, IFN-, sIL-2R； d.黏附分子及其配体的检测3. 尿微量蛋白的检测： a.有助于判断大器官移植，尤其是肾移植时排斥反应 的发生； b.作为免疫抑制药物肝肾毒副作用的观察指标；4. 急性时相反应