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文档简介

1、单个核细胞的分离与活性鉴定实验目的掌握外周血单个核细胞分离操作基本步 骤，注意事项；了解分离免疫细胞的常用方法；实验原理各种血细胞的体积，形态，密度不同；红细胞和粒细胞的密度较大，为1.092左右；淋巴细胞和单核细胞的密度为1.0761.090；血小板为1.0301.035。利用一种密度介于1.0761.090之间、近于等渗的溶液（聚蔗糖-泛影葡胺）进行等密度梯度离心，从而分离不同类别的血细胞；台盼蓝染色原理：试剂和器材1. 淋巴细胞分离液；2. 标本 肝素抗凝外周血；3. 生理盐水；4. 0.5%台盼蓝染液5. 天平;6. 离心机；7. 显微镜；8. 试管，玻片实验步骤1. 先取2ml淋巴细

2、胞分离液于离心管中；2. 另取一干净试管，依次加入2ml 生 理盐水和2ml 外周血， 并 混匀；3. 沿管壁缓慢将稀释外周血叠加到淋巴细胞分离液上；4. 配平后，离心2000rpm， 20min；5. 小心吸出云雾层，移入另一试管；6. 加入4X体积生理盐水，混匀，1500rpm, 10min, 弃上 清，重 复洗涤2次；7. 加1ml生理盐水重悬；8. 取细胞悬液50l与等体积台盼蓝溶液混匀，静置5min 后，镜下计数200个细胞，统计活细胞数比例； 结果判断及分析1. 活细胞折光性强，胞膜光滑，对染料排斥，拒染；2. 死细胞胞膜不完整，通透性增加，镜下可见被染成蓝色； 活细胞数率=活细胞数/总细胞数X100%注意事项1. 全程操作动作要轻，防止机械损伤；2. 淋巴分离液直接加入管底，避免浸沾管 壁；3. 加样顺序，切勿颠倒；4. 离心要配平，第一次离心时，要调至自 然降速；5. 收集目的细胞时，尽量避免吸入分离 液；方法学评价操作简单，成本低，基本能够满足临床和科研需要；纯度不够；思考题1. 现分离得到4ml单个核细胞悬液，镜下用细胞计数板计数周围4大格， 计数结果为600， 现欲将其浓度调整

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