DB11-T1429-2017动物养殖场消毒效果评价规范

1、ICS 65.020.20B 41备案号：56063-2017DB11北京市地方标准DB11/T 14292017动物养殖场消毒效果评价规范Regulation of disinfectant effect evaluation of farms2017 - 06 - 29 发布2017 - 10 - 01 实施北京市质量技术监督局发 布DB11/T 14292017目次前言II范围1规范性引用文件1样品采集1检测2检测数据处理3检测结果判定4IDB11/T 14292017前言本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。本标准由北京市农业局提出并归口。本标准由北京市农业局组织实施。本标

2、准起草单位：北京市兽药监察所、北京农学院、北京市动物疫病预防控制中心、北京市实验动物管理办公室。本标准主要起草人：杜继红、吕涛、刘钧、崔德凤、刘晓冬、李根平、周德刚、张永红、张小飞、马志军、任伟、刘文菊、沈红、孙志文、王亚芳、王海良、孙化一。IIDB11/T 14292017动物养殖场消毒效果评价规范范围本标准规定了动物养殖场消毒后样品采集、检测、检测数据处理和检测结果判定的方法。本标准适用于北京地区畜禽养殖场和普通级实验动物养殖场。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用

3、于本文件。GB 4789.2食品安全国家标准 食品微生物学检验 菌落总数测定GB/T 18204.32013公共场所卫生检验方法 第3部分：空气微生物样品采集舍内物体表面样品时间分别于消毒处理前后 15 min30 min(或根据消毒剂作用效果产生时间自定）进行采样。面积被采面积 100 cm2的取全部表面；被采面积 100 cm2的至少要取 100 cm2。采样点采样区域包括舍内墙壁和设备设施（笼具、水线、料槽）。墙壁选择 4 点（东、南、西、北墙各 1点），距地面垂直高度为 0.8 m 1.5 m，分别位于墙壁的中央平整处，避开通风和降温设施；笼具选择 4 点，位于整体中央平整处；水线选择

4、均匀分布 4 点，位于整体中央平整处；料槽选择 4 点，位于槽的外壁中央平整处。方法将边长 10 cm 的正方形规板用火焰灭菌后，放置于物品表面，用蘸取适量灭菌生理盐水的棉拭子在规板范围内横、竖各 5 次滚动涂抹取样(同一采样拭子不应在同一表面重复涂抹)，无菌操作放入装有 10 mL含适宜中和剂（中和剂的验证试验参见附录A）的灭菌生理盐水试管中，塞紧试管，标记并记录。舍内空气样品时间1DB11/T 14292017分别于消毒处理前和消毒处理后 1530 min（或根据消毒剂作用效果产生时间自定）进行采样(消毒时要关闭畜舍门窗)。采样点采用 5 点法布置测点，布置方法按 GB/T 18204.3

5、2013中附录A的规定执行，采样高度根据养殖场情况设定，地面养殖动物为地面，笼养动物高度为笼架高度的中央水平面。舍内面积不大于 50 m2 的布置 5 个测点，每增加 20 m2 增加 2 个测点。方法采用空气沉降菌法检测，按 GB/T 18204.32013进行操作。场区道路样品（硬化道路或土路）时间分别于消毒处理前和消毒处理后 1530 min（或根据消毒剂作用效果产生时间自定）进行采样。采样点采样区域为养殖场主干道，选择均匀分布 4 点，位于道路中央平整处。方法硬化道路样品采集方法同 3.1.4；土路为用灭菌不锈钢勺铲取道路表面土样 20 g30 g,装于含适宜中和剂（中和剂的验证试验见

6、附录A）的灭菌容器内，盖好，标记并记录。检测消毒前后样品检测舍内物体表面用力震荡采样试管 10 15 次或用漩涡混合器混匀样品，使样品中的细菌洗入灭菌生理盐水中， 用灭菌吸管或加样器吸取 0.5 mL，加入装有 4.5 mL 灭菌生理盐水的试管中，10 倍系列倍比稀释，每个稀释度分别取 0.5 mL 混合液于灭菌平皿，用倾注法倒入培养基，36 1 培养 48 h 进行细菌计数。每个稀释度均需作平行样，计算样品平均菌落数。细菌计数采用平板计数法，按 GB 4789.2 的规定操作。舍内空气将采样平皿置 36 1 培养 48h 进行细菌计数，按 GB/T 18204.32013 计算舍内空气平均菌

7、落数。场区道路硬路按4.1.1检测。土路2DB11/T 14292017无菌称取混合后土样 10 g，放入 100 mL 灭菌生理盐水中，用力震荡，混匀，静置片刻，待泥沙下沉后，取上清液作 10 倍系列倍比稀释。根据土壤中含菌情况，选择 3 个适宜稀释度，每个稀释度分别取 0.5 mL 混合液于灭菌平皿，用倾注法倒入培养基，36 1 培养 48 h 进行细菌计数。每个稀释度均需作平行样，计算样品平均菌落数。对照试验空白对照将未用的同批培养基置 36 1 培养 48 h，若有菌生长，说明所用培养基有污染，试验无效，更换后重新进行。阴性对照取 0.5 mL 稀释液（即灭菌生理盐水）放入灭菌平皿中，

8、用倾注法倒入培养基，36 1 培养 48 h，若有菌生长，说明所用稀释液有污染，试验无效，更换后重新进行。阳性对照标准菌检测使用标准菌为金黄色葡萄球菌（ATCC6583）和大肠杆菌（ATCC25922）。方法取过夜培养的标准菌悬液，10-7 稀释后取 0.5 mL 稀释液放入灭菌平皿中，用倾注法倒入培养基，36 1 培养 48 h，细菌计数约为 50 cfu/皿，表明标准菌状态良好，所用培养基适用性好。检测数据处理杀菌率的计算平板计数方法见GB 4789.2，以全部采样点的平均菌落数作为样品平均菌落数，根据消毒前后样品平均菌落数计算杀菌率，见公式(1)，以杀菌率评价消毒效果。因现场试验环境条件

9、变化较多，难以统一，无法测定准确的自然沉降率，故不考虑自然衰亡因素。式中：R杀菌率；N0消毒前样品平均菌落数； N1消毒后样品平均菌落数。R N0 N1 100%N 0(1)示例：某鸡舍，消毒前采样，舍内墙壁上的平均菌落数为 99 cfu/100m2。用某消毒剂喷雾消毒 30 min 后采样，菌落数减至10 cfu/100m2。则该消毒剂处理 30 min 后，舍内墙壁上自然菌的杀菌率可按下法计算：R 99 10 100% 89.9% 993DB11/T 14292017数据选择范围按 GB 4789.2 规定进行。6检测结果判定动物养殖场依据平均杀菌率判定消毒效果的方法见表1。表1动物养殖场

10、消毒效果评价表评价等级平均杀菌率（%）舍内物体舍内空气厂区道路优90.090.090.0良85.090.085.090.085.090.0合格80.084.080.084.080.084.0不合格80.080.080.0注：表内为有动物舍的判定标准；除特殊要求外，无动物舍的判定标准，舍内空气平均杀菌率90.0%为合格。4DB11/T 14292017附录A（资料性附录）中和剂验证试验中和剂验证试验方法通过设定下列实验来确定所选的中和剂是否合适（见表A.1）。表A.1中和剂验证试验方法试验组别说明问题1. （消毒剂+菌液）+中和剂证明中和剂能否中和残留消毒剂的抑菌作用2. 中和剂+菌液证明中和剂有无抑菌作用3. （消毒剂+中和剂）+菌液证明消毒剂与