大肠杆菌的培养和分离

1、实用精品文献资料分享大肠杆菌的培养和分离辅导教案导学诱思DAOXUEYOUSI一、大肠杆菌1 .大肠杆菌属于革兰氏性菌，为型的肠道杆菌。2 .结构：属于生物。3 .用途：是在技术中被广泛采用的工具。4.与人类的关系：它生活在人类的I中，一般对人(“有”还是“无”)害。有一些菌株 对人体能产生危害，因为它们可以侵蚀 并产生。任何大肠杆菌如果进入人的 系统，都会对人体产生危害。答案：1.阴 兼性厌氧2 .原核3 .基因工程4 .肠道 无 肠黏膜 毒 素 泌尿 二、细菌的培养和分离1 .细菌的培养：(1)细菌的繁殖： 细菌以 的方式繁殖，分裂速度很快，约 分裂一次。(2)培养细菌的方法：培养细菌，需

2、要将转移到中，一般用来转移带菌的培养物。(3)用不同培养基培养细菌的差别： 接种后，培养细菌的培养基类型 接种方法 接种后培养的时间(单位： 小时)培养结果 液体培养基 接种环直接接种 培养8h后 每毫升培 养基中有 个细菌固体培养基用接种环在培养基上用的方式接种(该法还可以用于 )培养1020 h 一个细菌细胞会繁殖成许多个细菌细胞，这些细胞_ 2,细菌的分离：(1)分离的方法与特点：分离细菌有 和2种。前者方法简单，后者操作复杂，但是(2) 是在:培养基上进行细菌的 。答案：1.(1)分裂 20 min (2)已有细菌的培养物新的培养基接种环(3)几亿划线 分离细菌紧紧聚集在一起菌落2.(

3、1)划线分离法涂布分离法实用精品文献资料分享单菌落（2）划线分离固体平面划线培养 三、灭菌操作1 .灭菌操作的原因：为了获得 的培养物，其关键是防止外来 的入侵污染。因此，在培养微生物时必须进行操作。2 .无菌操作的条件：（1）首要条件是必须是无菌的；（2）必须是无菌的；（3）的过程必 须是无菌的等。答案：1.纯净 杂菌 无菌2 . （1）各种器皿 （2）各种培养基 （3）菌转移操作四、大肠杆菌的培养和分离实验1 .实 验目的：（1）进行大肠杆菌的 ,利用 培养基进行细菌培养的操作；（2）进行大肠杆菌的 ,用培养基进行细菌的培养；（3）说明大肠杆菌培养的条件和操作要求的原理。2.实验步骤（1）

4、灭菌：用在压力下对LB液体培养基、LB固体培养基和培养皿进行灭菌 min。（2）自 向 中转移并分装固体培养基：待冷却至 左 右，将三角锥形瓶中的 培养基，在上分装至几个中，制成培养基。（3）将大肠杆菌自 我移到中的:培养基中培养： 将大肠杆菌用 在无菌操作下 接种至三角锥形瓶中的 培养基中，在 摇床振荡培养,完成大肠杆菌的培养。（4）将菌液在培养基上进行分离:从前一步培养得到的菌液中获取菌种，用以法接种至第二步所制得的 培养基中，在C恒温箱中培养 h后观察菌落。（5）菌种保存：在 无菌操作下将 用取出，再用法接种在上，培养后，冰箱保存。3 .分 离实验的结果及相应结论：观察中若看到在 的末端

5、出现,则表明菌已被分离了。4.大肠杆菌分离的用途： 的通用方法，也是用于 的最简便方法之一。答案：1.（1）扩增液体（2）分离固体平面划线2 . （1）高压锅1 kg 15 三角瓶培养皿 60 C固体超净台培养皿固体平面 （3） 斜面 三角瓶 液体 接种环 液体 37 C 12 h （4）固体平面 划线接种环划线固体平面 37 1224 （5）单菌落接种环 划线 斜面 37 C 24 h 4 C 3.划线 不连续的单个菌落4 .消实用精品文献资料分享除污染杂菌筛选高表达量菌株核心解读HEXINJIEDU1.微生物、细菌与大肠杆菌之间有怎样的关系？（1）概念内涵：其关系图解见下（2）结构上：三者

6、都是结构简单，形体微小的生物，但 是从细胞角度看其结构是不同的，具体如下：2.培养大肠杆菌的LB培养基中有各种物质，为什么选择这些物质，这些物质有什么作 用呢？ （1）人们按照微生物对营养物质的不同需求， 配制出了供其生 长繁殖的营养基质一一培养基。虽然各种培养基的具体配方不同，但 一般都含有五大营养要素，即水、无机盐、碳源（提供碳元素）、氮源 （提供氮元素）和生长因子（不同的细菌需要的各不相同，有物种差异， 它主要补充自身不能合成的或合成能力较弱的，但却是生长繁殖必需的物质）。见下表：微生物的营养要素 定义 功能 类型 化合物类型 常用物质 碳源 凡 可构成微生物细胞和代谢产物中碳架来源的营

7、养物质称为碳源构成细胞物质，供给微生物生长发育所需要的能量 无机碳（自养型微生物 用）无机物CO2、NaHCO3 CaCO等 有机碳（异养型微生物用）蛋白 质、核酸类 牛肉膏、蛋白月东、花生粉饼、明胶、氨基酸等 糖类脂质 等葡萄糖、蔗糖、淀粉等 氮源凡是构成微生物的细胞物质或代谢 产物中氮素来源的营养物质称为氮源主要是提供合成原生质和细胞 其他结构的原料，一般不作能源 无机氮 镂盐NH3、（NH4）2SO4硝酸 盐KNO3N2空气 有机氮 牛肉膏、蛋白月东、醇母膏、尿素、明胶等 生 长因子一类对微生物正常代谢必不可少且又不能从简单的碳、氮源 自行合成的所需极微量的有机物 一般是酶和核酸的组成成

8、分 酵母 膏、玉米浆、黄豆饼粉、动植物组织液、麦芽汁等，复合维生素水作 用：组成成分；反应介质；物质运输媒体；热的良导体 无机盐 作用： 维持渗透压、pH等（2）大肠杆菌的LB培养基微生物的营养要素 本实验中大肠杆菌LB培养基配方 培养基配方与 微生物营养要素的对应关系LB液体培养基LB固体培养基氮源、 碳源、无机盐、生长因子、水琼脂1 g蛋白月东0.5 g主要提供大肠杆菌的氮源、碳源需求 酵母提取物0.25实用精品文献资料分享g主要提供生长因子NaCl 0.5 g提供无机盐水50 mL提供水 （3）此外配方中还要注意pH等。3 .该实验中这些操作的原因（1） 三角锥形瓶中的LB固体培养基灭菌

9、后，需要冷却到 60 C左右时， 才用来转移和分装，制成固体平面培养基，为什么？你用什么简易方 法快速估计该温度？因为三角锥形瓶中的LB固体培养基中有琼脂，它在98 C以上熔化，在44 C以下凝固，当冷却到60 C左右时， 不会因温度过高烫手而不易操作；也不会因为温度过低而使三角锥形 瓶中的培养基凝固，最终无法转移分装制成新的平面培养基。简易估计温度的方法：可以用手触摸灭菌后的三角锥形瓶，感觉锥形瓶由 烫手转为刚刚不烫手时，则说明已经冷却到 60 C左右了。（2）进行 恒温培养时，为什么要将培养皿倒置？恒温培养时，培养基中的水分会以水蒸气的形式蒸发，倒放培养皿则会使水蒸气凝结成水滴留在 盖子上

10、；如果正放培养皿，则水分形成的水滴会落入培养基表面并且 扩散开。如果培养皿中已形成菌落，则菌落中的菌会随水扩散，菌落 间相互影响，很难再分成单菌落，达不到分离的目的，培养皿中的菌 落还有可能被盖子上掉落的水给污染。（3）将大肠杆菌用接种环自斜 面转移到液体培养基中培养时，为什么接种环必须先深入到斜面冷却 后，才能再取斜面上的菌体？接种环在取菌体前曾在酒精灯火焰上灼烧灭菌，一直灼烧至红，温度很高，若不冷却就直接用其取斜面上 的菌体，菌体可能因为接触高温接种环而死亡， 导致大肠杆菌的转移 培养失败。（4）用划线法分离大肠杆菌中，第一次和随后的几次划线 前都要灼烧接种环，它们的原因一样吗？在划线结束

11、后仍然要灼烧接 种环这又是为什么呢？虽然每次灼烧都是为了灭菌，但所灭的菌种和原因却不一样。灼烧接种环的时间 消灭的菌体 原因 第一次划线前 其他杂菌 防止 其他杂菌的侵入而造成污染 随后的几次划线前 上次划线结束后残 留在接种环上的实验菌（本实验为：大肠杆菌）为了使下一次划线时， 接种环上的菌来自上次划线的末端， 从而通过划线次数的增加，使每 次划线时菌种的数目逐渐减少，最终获得单个菌落，实现菌的分离 最 后一次划线结束后为了防止实验菌残留于接种环而污染环境和感染 实验人员实用精品文献资料分享 用划线法分离大肠杆菌时，每次的划线是怎么样的？对随后的划 线的起点有什么要求？为什么这样要求呢？每一

12、次的划线 依次的2次划线之间的关系 各次划线的分布 图形辅 助理解划线的要求不能出现线条的重叠第二次以及随后的划线操作，总是 从上一次划线的末端开始不要将最后一区的划线与第一区相连这 样要求的原因使线条末端细菌的数目比线条起始处要少因为划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到有单个细菌繁殖而来的单菌落若相连，则可能最后一次划线末端处 的细菌与第一次的叠加，细菌的数目不是最少的，不能使细菌的数目 随着划线次数的增加而逐渐减少，最终将很难获得单菌落 4.消毒与灭菌一样吗？概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理

13、或化学方法 仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物 （不包括芽抱和抱 子）煮沸消毒法：在100 C煮沸56 min 一般物品 巴氏消毒法： 7075 c煮30 min或在80 C煮15 min对于一些不耐高温的液体， 如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物 （包括芽抱和抱 子）灼烧灭菌：酒精灯火焰 接种工具的灭菌 干热灭菌：160170 C 下灭菌12 h玻璃器皿、金属工具的灭菌 高压蒸汽灭菌：121c 条件下，灭菌1530 min培养基及容器的灭菌5.本实验中还需要 了解哪些基础知识才更便于掌握和理解呢？（1）牛肉膏蛋白月

14、东的知识 牛肉膏和蛋白月东来源于动物原料，含有糖、维生素和有机氮等营 养物质。1 000 mL牛肉膏蛋白月东培养基的营养构成培养基组分 提供的主要营养 牛肉膏 5 g碳源、磷酸盐和维生素 蛋白月东10 g氮源和维生素NaCl 5 g无机盐H2O 定容至1 000 mL氢元素、氧元素（2）巴氏消毒法的知识 巴氏消毒法也称做低温消毒法。日常生活中经常用到煮沸消毒法。在100 C煮沸56 min 可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽抱。对于一些不耐高温的液体， 如牛奶，则使用巴氏消毒法，在 7075 C煮30 min或在80 C煮实用精品文献资料分享15 min,可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营

15、养成分不被破坏。题例领悟TILILINGWU【例题11下列操作属于灭菌的是（）A .用酒精擦拭实验人员的双手B.用氯气处理水源C.将接种环在酒精灯火焰上灼烧至红 D.杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物解析：此题考查对微生物实验中灭菌的理解。对微生物培养来说，灭菌操作十分重要， 其目的就是为了获得纯净的培养物，其关键是防止外来一切杂菌的入 侵，不仅仅是对人体有害的微生物。灭菌操作一般使用强烈的物化因 素（如：灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌等）。而不是使用较为温和的物化方 法。答案：C消毒与灭菌是不同的。两者除了在物化手段上是否强烈外， 所消灭的 微生物内容也是不同的。灭菌是消除一切杂菌，而消毒仅

16、仅杀死对人 体有害的微生物。消毒往往无法消灭微生物的芽抱和抱子。【例题2】 下列关于平板划线的操作及叙述，正确的是（）A.灼烧接种环之后，为避免其他杂菌的干扰，应立即伸入菌液取菌种B.划线结束后，为避免实验菌污染环境和感染操作者， 所以必须再次灼烧 接种环C.在第一次划线前灼烧接种环和每次划线前灼烧接种环的目 的相同D.划线时最后一区域一定要与第一区域相连， 达到首尾相接 解析：此题考查对划线法分离大肠杆菌的掌握。 这是本实验的一大重 点和难点。A的操作是错误的，灼烧接种环之后，要冷却后方能取菌 种，以免温度太高杀死菌种。B的操作完全正确。C的叙述是错误的， 它们的灼烧目的完全不同，第一次划线

17、前的灼烧是为了杀死其他杂菌， 保证实验菌的纯净，而随后的灼烧却是为了杀死残留于接种环上的实 验菌，保证实验菌随划线次数的增加而减少， 每次划线的菌种来自上 一次划线的末端。D的操作也是不正确的，不应该相连，这样才能使 最后一次划线不受第一次划线的干扰。答案：B大肠杆菌的分离所采用的就是划线分离法。这一方法十分重要。我们不仅要知其每一步具体的操作，还要知其所以然，还要关注注意事项， 避免踏入误区。随堂训I练 SUITANGXUNLIAN1细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同实用精品文献资料分享的处理，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌 （）A .接种针、手、培养基B.身压锅、手、接种针C.培养基、手、接种针D.接种针、手、高压锅 答案：C解析：灭菌是微生物培