大肠杆菌和沙门氏菌的分离鉴定

1、青岛农业大学兽医微生物学课程论文题目：大肠杆菌和沙门氏菌的别离鉴定姓 名：学院：动物科技学院班 级：马业科学1201班学 号：2012任课教师：温建新二0一四年四月大肠杆菌和沙门氏菌的别离鉴定马业科学1201任课教师温建新摘要：为了鉴别大肠杆菌和沙门氏菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。关键词：大肠杆菌沙门氏菌三糖铁糖发酵麦康凯琼脂引言：大肠杆菌是肠杆菌中埃希氏菌中的代表种。根据。H、K抗原的不同，可将大肠杆菌株分为不同的血清型。自然界中大肠杆菌的血清型可分为数万种，但致病性大肠杆菌的数量有限。沙门氏菌属是有一大群血

2、清学相关的革兰氏阴性、兼性厌氧的无芽抱杆菌组成，系肠杆菌科中重要的病原菌属之一，对任何动物均有致病性，可以欺人的伤寒、副伤寒、肠炎和食物中毒，对动物能致多 种临床表现的沙门氏菌病，亦能以继发菌出现在其他疾病中。大肠杆菌和沙门氏菌作为肠杆菌科的成员具有一些共同的特征，如形态、染色特性等。但一些培养特性和生化特性有差异，可作为鉴别诊断的依据，有时还需要依靠血清学方法。学习文档仅供参考摘 要 错误！未定义书签关键词 错误！未定义书签引言 错误！未定义书签 TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark5 o Current Document 1材料1菌种1培养基1生化试剂1沙门

3、氏菌诊断血清1器材12方法1增菌培养1直接别离培养1形态观察1培养特性观察1生化试验22蛋白月东水接种2葡萄糖蛋白月东水接种 2尿素琼脂接种2枸椽酸盐琼脂接种 2生化特性的观察2糖发酵实验2MR实验2VP实验2呻噪实验3枸椽酸盐利用实验3硫化氢实验3药物敏感试验-扩散法 3 HYPERLINK l bookmark7 o Current Document 3结果观察3大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况错误！未定义书签。细菌的染色、镜检4生化管的接种培养4呻噪、MR V-P实验 错误！未定义书签学习文档仅供参考3.5药物敏感试验 6学习文档仅供参考4 结论7参考文献7学习文档仅供参

4、考1材料菌种大肠杆菌、沙门氏菌、大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液培养基普通培养基：肉汤、普通琼脂、半固体培养基。鉴别培养基：SS琼脂、麦康凯琼脂、三糖铁琼脂。生化鉴别基：糖发酵管、蛋白陈水、葡萄糖蛋白陈水、尿素琼脂、醋酸铅琼脂。生化试剂MR式剂、VP试剂、呷咪试剂、乙醴、硝酸盐复原试剂等。沙门氏菌诊断血清AE群多价O血清及单因子血清。器材革兰氏染液、显微镜、吸管等。2方法增菌培养用无菌刻度吸管吸取大肠杆菌与沙门氏菌的混合菌液2ml,分别加入已有亚种酸盐量绿增菌液100ml的试管和四磺酸钠增菌液10ml的试管个1ml.接种后轻轻混匀，置37摄氏 度温箱内培养18-24h o直接别离培养形态观察以无菌

5、接种环分别挑取麦康凯琼脂平板或 SS琼脂平板上新鲜培养的大肠杆菌和沙门 氏菌单个菌落，在在载玻片上制成涂片，待自然干燥后，以火焰固定，进行革兰氏染色， 镜检。观察两种细菌的形态，大小与排列方式并做比较。这两种都是革兰氏阴性、两端钝 圆的球杆菌，菌体大多单个存在，大小差异不显著。培养特性观察将大肠杆菌和沙门氏菌的纯培养物分别接种肉汤、普通琼脂、三糖铁琼脂、SS琼脂和麦康凯琼脂。三糖铁琼脂接种时，先涂布斜面，后穿刺底层。置37摄氏度温箱内培养24h学习文档仅供参考后，取出观察两种细菌的培养特性并比较。生化试验生化实验前，须对菌种进行纯度检查，以保证不被污染杂菌。检查方法同一般培养物 的制片、染色、

6、镜检。镜检时要适当多看几个视野，每个视野中细菌形态也染色特性菌须 符合该种菌种的特性。凡污染杂菌者，此菌种不可用。每种菌纯培养物分别接种葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、甘露醇、卫矛醇微量生化反应管，每种唐一管，穿刺接种。后置于 37c温箱培养2-3do蛋白陈水接种每种菌纯培养物接种一管，培养后作呷咪实验。后置于37c温箱培养2-3do葡萄糖蛋白陈水接种每种菌纯培养物接种两管，培养后一管作 M也验，另一管作VP实验。后置于37c温 箱培养2-3d o尿素琼脂接种每种菌纯培养物接种一管，接种量要大。后置于37c温箱培养数小时。枸檬酸盐琼脂接种每种菌纯培养物接种一管，接种量要少。后置于37c温箱培养2-

7、3do生化特性的观察糖发酵实验取经2-3d培养后的两种细菌的糖发酵管一一观察，凡培养基变为黄色的，表示该菌 发酵此糖产酸气；凡凡培养基不变色的，表示该菌不发酵此糖。MR 实验取一支经2-3d培养后的葡萄糖蛋白陈水的糖发酵管，加入 MR式剂数滴，凡液体呈红 色者为阳性反应，呈黄色者为阴性反应，橙黄色者为可疑反应。VP 实验取另一支葡萄糖蛋白陈水的糖发酵管，加入VP试齐1J 3ml,再加入VP试剂乙液1ml,充分摇匀后静置与试管架上，在数分钟内出现红色者为阳性反应，不出现红色者应放在 37c继续观察1-2h,仍然不变色者判为阴性。呷咪实验学习文档仅供参考去蛋白陈水培养管先加乙醴少量，塞紧棉塞摇振试

8、管，是一米与培养基充分混匀，静置片刻，待乙醴浮于液面上层时，沿管壁加入呷咪试剂2-3滴。凡在乙醴层内出现玫瑰红色者为阳性反应，不变色者位阴性反应。枸檬酸盐利用实验观察经2-3d培养的枸檬酸盐琼脂管是否有细菌生长，并观察其颜色变化。凡有细菌生长，培养基变为天蓝色为该菌利用枸檬酸盐，否则为阴性反应。硫化氢实验观察经2-3d培养的醋酸铅琼脂管，凡沿穿刺线或其周围出现黑色沉淀者，为硫化氢 反应阳性，无黑色者为反应阴性。药物敏感试验-扩散法曲松纳、红霉素、硫酸链霉素、磷霉素、多面环素对大肠杆菌或沙门氏菌生长的影响。3结果观察大肠杆菌和沙门氏菌在三糖铁琼脂培养基上的生长状况大肠杆菌沙门氏菌H1S +斜面产碱（红色）底部产酸（黄包）产气 一学习文档仅供参考反应模式表示：K/A+(一)； +(-)细菌的染色、镜检生化管的接种培养接种培养前:学习文档仅供参考接种培养后:大肠杆菌荀乳麦甘it H2s尿批O 9 S /实图:3.4 呷咪、MR V-P实验实验结果；沙门氏菌大脑杆菌i* 3 3学习文档仅供参考3.5药物敏感试验学习文档仅供参考4结论大肠杆菌和沙门氏菌生化反应结果综合汇表运动力 枸檬酸盐利用 尿素酶 硫化氢 呷咪PV甲基红卫矛醇 蔗糖 甘露醇 乳糖 葡萄糖 硫化氢 底层 斜面菌 种A A A - 二v +-+-+-+B K A +/-+-