复方川乌止痛贴剂中酯型生物碱及总生物碱的含量测定

1、复方川乌止痛贴剂中酯型生物碱及总生物碱的含量测定【摘要】目的制定复方川乌止痛贴剂中酯型生物碱及总生物碱的含量测定方法。方法分别采用改进异羟肟酸铁高氯酸铁法及酸性染料比色法测定制剂中的酯型生物碱及乌头类总生物碱的含量。结果酯型生物碱在6.464g/l间有良好的线性关系；平均加样回收率为99.7%，RSD为2.25%n5。乌头总生物碱在1.9415.52g/l间有良好的线性关系；平均加样回收率为99.47%，RSD为2.07%n5。结论结果准确，重复性好，可用于该制剂中酯型生物碱及总生物碱的质量控制。【关键词】复方川乌止痛贴酯型生物碱总生物碱Abstrat:bjetiveTestablishthe

2、assayfester-seriesalkalidandttalalkalidinplexPresriptinnkshdPlaster.ethdsFerriHydrxaiaidFerriPerhlriaidethdasusedtdeterinethententfester-seriesalkalid,andaiddyelrietryasusedtdeterinethententfttalalkalidinplexPresriptinnkshdplaster.ResultsAgdlinearityfrester-seriesalkalidasrangedfr6.4t64g/l；theaverag

3、ereveryas99.47%ithRSD2.07%(n=5).Ttalalkalidalsshedagdlinearrrelatinintherangef1.9415.52g/l.Theaveragereveryas102.06%andRSDas1.31%(n=5).nlusinTheresultisaurateandthereprduibilityisgd.Theseethdsanbeusedfrqualityntrlfester-seriesalkalidandttalalkalid.Keyrds:plexPresriptinnkshdPlaster；Ester-seriesalkali

4、d；Ttalalkalid川乌是毛茛科植物乌头AnituarihaeliDebx.的枯燥母根1，其炮制品制川乌是复方川乌止痛贴剂中的主要组成药物，功能祛风除湿，温经止痛。制川乌用于制剂中，既要检查酯型生物碱的含量，以保证临床用药的平安性，同时又要测定乌头类总生物碱的含量2，以保证其有效性。本实验对复方川乌止痛贴剂中的酯型生物碱及总生物碱均进展了研究。1仪器与试剂日本岛津UV-2401紫外分光光度计。制川乌产地：四川购自江西中药饮片厂，经南京中医药大学生药学教授陈建伟进展品种鉴定。乌头碱对照品购自中国药品生物检定所，供含量测定用，批号：110720-202209。3批中试产品由某制药厂提供。所有

5、试剂均为分析纯。2方法与结果2.1酯型生物碱的含量测定2.1.1检测波长的选择精细称取乌头碱对照品10g，用无水乙醇定容于10l量瓶中，精细量取标准溶液1l，置于25l量瓶中，加无水乙醇使成2.5l，精细参加碱性盐酸羟胺试液1.5l，摇匀，在6065水浴中保温10in，放冷，加高氯酸铁试液13l，摇匀，放置5in，精细参加高氯酸试液8l，用高氯酸铁试液稀释至刻度，摇匀，放置15in后，经紫外分光光度计在200800n对其进展扫描，确定最大吸收波长为510n。见图1。图1改进异羟肟酸铁-高氯酸铁-乌头碱离子对溶液全波长紫外扫描图略2.1.2对照品溶液的制备精细汲取乌头碱对照品10g，置10l量瓶

6、中，用无水乙醇溶解并稀释至刻度。2.1.3供试品溶液的制备本品去除被衬后，粉碎，精细称定10g，精细转移入具塞锥形瓶，参加pH34的无水乙醇150l，浸渍1h后，超声30in，离心。取上清液，回收乙醇后，用10l0.6l/L的Hl分次转移入分液漏斗中，乙醚萃取3次20,10,10l，取酸水层，加氨试液调pH值至9，氯仿提取3次10,10,10l，合并氯仿层，蒸干。残渣加无水乙醇适量使溶解，转入5l量瓶中，用无水乙醇分次洗涤容器，洗涤液并入量瓶中，再加无水乙醇至刻度，摇匀。精细量取上述溶液及无水乙醇各2.5l，置25l量瓶中，各精细参加碱性盐酸羟胺试液1.5l，摇匀，在6065水浴中保温10in

7、，放冷，加高氯酸铁试液13l，摇匀，放置5in，精细参加高氯酸试液8l，用高氯酸铁试液稀释至刻度，摇匀，即得。2.1.4线性关系考察精细量取浓度为1.024g/l的对照品溶液0，0.25，0.50，1.0，1.5，2.0，2.5l，分别置于25l量瓶中，均加无水乙醇使成2.5l，各精细参加碱性盐酸羟胺试液1.5l，摇匀，在6065水浴中保温10in，放冷，加高氯酸铁试液13l，摇匀，放置5in，精细参加高氯酸试液8l，用高氯酸铁试液稀释至刻度，摇匀，放置15in，照分光光度法附录B在520n的波长处测定吸收度，以浓度为纵坐标，吸收度为横坐标，绘制标准曲线=8.824A-3.746r=0.999

8、8。结果说明本品溶液在浓度6.464g/l范围内吸收度A与浓度呈良好的线性关系。2.1.5精细度考察取浓度为1.024g/l的对照品供试液，在520n的波长处，每次间隔约30in，连续6次测定吸收度，计算其RSD0.28%。2.1.6重复性考察取去除被衬后的同一批号样品适量，精细称定5份，按供试品溶液的制备方法制得供试液。分别测定吸收度，测得酯型生物碱的平均含量为0.1151g/g，RSD=2.60%。2.1.7稳定性考察取去除被衬后的同一批号样品适量，精细称定5份，按供试品溶液的制备方法制得供试液。每间隔1h，测定吸收度，连续考察7次，测得RSD0.4%n7。2.1.8加样回收率考察取去除被

9、衬后的同一批号样品适量，精细称定5g，计5份，精细转移入具塞锥形瓶，各精细参加浓度1.024g/l的对照品溶液0.5l，放置10in，用与“供试品溶液制备项下一样方法制得供试液。按“样品含量测定项下方法测定，并按下式计算加样回收率。结果见表1。加样回收率%=测得量-原有量/参加量100%表1加样回收率实验结果略2.1.9样品含量测定取3个批号的样品，去除被衬后，精细称定10g，各3份，加10%的微粉硅胶，粉碎，精细转移入具塞锥形瓶，用与“供试品溶液制备项下一样方法制得供试液。采用“随行外标二点法，求得随行标准曲线。将已制备供试品溶液于波长520n处，依次测定吸收度，从该标准曲线上读出浓度，计算

10、，即得。结果见表2。表2样品的酯型生物碱含量测定结果略2.2总生物碱的含量测定2.2.1检测波长的选择精细汲取乌头碱对照品4g，置50l量瓶中，用氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，精细汲取1l，置分液漏斗中，精细参加氯仿至10l，再精细参加pH3.0醋酸盐缓冲液10l和0.1%溴甲酚绿溶液2l，强力振摇5in，静置20in，分取氯仿层，剩余溶液再用氯仿萃取两次10，5l，合并氯仿层，于枯燥滤纸滤过，滤液用氯仿定容至25l。经紫外分光光度计在200800n对其进展扫描，确定最大吸收波长为413n。见图2。图2溴甲酚绿溶液-氯仿-乌头碱离子对溶液全波长紫外扫描图略2.2.2对照品溶液的制备精细汲取乌头碱

11、对照品4g，置50l量瓶中，用氯仿溶解并稀释至刻度，摇匀，制得对照品溶液=0.0776g/l。2.2.3供试品溶液的制备本品去除被衬后，精细称定5g，精细转移入具塞锥形瓶，参加pH值34的无水乙醇150l，浸渍1h后，超声30in，离心。取上清液，回收乙醇后，用10l0.6l/LHl转移入分液漏斗中，乙醚萃取3次20,10,10l，取酸水层，加氨试液调pH值至9，氯仿提取3次10,10,10l，合并氯仿层，蒸干。105放置30in，取出，放冷，残渣加氯仿适量使溶解，转入10l量瓶中，用氯仿分次洗涤容器，洗涤液并入量瓶中，再加氯仿至刻度，摇匀。再将其精细转入分液漏斗中，按标准曲线制备项下的方法，

12、精细参加pH3.0醋酸盐缓冲液10l和0.1%溴甲酚绿溶液10l，强力振摇5in，静置20in，分取氯仿层，剩余溶液再用氯仿萃取两次10，5l，合并氯仿层，于枯燥滤纸滤过，滤液用氯仿定容至25l，制得供试品溶液。2.2.4线性关系考察精细汲取对照品溶液0，1，2，4，6，8l，分别置分液漏斗中，依次精细参加氯仿至10l，按供试品溶液的制备项下自“精细参加pH3.0醋酸盐缓冲液10l起，至“滤液用氯仿定容至25l，摇匀。照紫外分光光度法，分别在413n的波长处测定吸收度。再以浓度为纵坐标，以吸收度为横坐标，绘制标准曲线=0.5153A-0.00872r=0.9997。结果说明乌头总生物碱在1.9

13、415.52g/l间有良好的线性关系。结果见表3。表3线性关系考察结果略2.2.5精细度考察取浓度为0.1552g/l的对照品供试液，在413n的波长处，每次间隔约30in，连续6次测定吸收度，计算其RSD0.53%。2.2.6重复性考察取去除被衬后的同一批号样品适量，精细称定5份，按供试品溶液的制备方法制得供试液。分别测定吸收度，测得总生物碱的平均含量为0.1053g/g，RSD=1.06%。2.2.7稳定性考察取去除被衬后的同一批号样品适量，精细称定5份，按供试品溶液的制备方法制得供试液。每间隔1h，测定吸收度，连续考察7次，测得RSD0.33%n7。2.2.8加样回收率考察取去除被衬后的

14、同一批号样品适量，精细称定5g，计5份，精细转移入具塞锥形瓶，各精细参加浓度0.0776g/l的对照品溶液3l，放置10in，用与“供试品溶液制备项下一样方法制得供试液。按“样品含量测定项下方法测定，并按下式计算加样回收率。结果见表4。加样回收率%=测得量-原有量/参加量100%表4加样回收率实验结果略2.2.9样品含量测定取3个批号的样品，去除被衬后，精细称定10g，各3份，加10%的微粉硅胶，粉碎，精细转移入具塞锥形瓶，用与“供试品溶液制备项下一样方法制得供试液。采用“随行外标二点法，求得随行标准曲线。将已制备供试品溶液于波长413n处，依次测定吸收度，从该标准曲线上读出浓度，计算，即得。结果见表5。表5样品的乌头类总生物碱含量测定结果略3结论由以上实验结果可知，本文所用的改进异羟肟酸铁-高氯酸铁法及酸性染料比色法，精细度、重复性和加样回收率等均较好，符合定量要求。其中