上海交通大学微生物实验课件实验四培养基的使用特点和微生物接种方法

1、实验目的与要求 强调无菌操作概念，掌握无菌操作技术掌握微生物移植、纯化的基本方法了解不同微生物在同一培养基上的培养特征，及同一微生物在不同培养基上的培养特征掌握几种常用的鉴别、选择培养基的使用了解显微测微尺的构造；掌握应用显微测微尺测量微生物细胞大小的方法与技术 第一页，共二十四页。微生物培养Culture：在一定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体混合培养物：含有多种微生物的培养物；纯培养物： 只有一种微生物的培养物；Pure culture通常情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果纯培养技术是进行微生物学研究的基础！第二页，共二十四页。一、用固体培养基分离纯培养培养基：液体培养基；固体培养

2、基； 1.5%-2.5%半固体培养基； 0.2%-0.75%琼脂第三页，共二十四页。一、用固体培养基分离纯培养菌落（colony）： 单个（或聚集在一起的一团）微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度可以形成肉眼可见的、 有一定形态结构的子细胞生长群体众多菌落连成一片菌苔（lawn）第四页，共二十四页。无菌操作：火焰附近（酒精灯、煤气灯）进行第五页，共二十四页。 不同微生物在特定培养基上生长形成的菌落或菌苔一般都具有稳定的特征（形状、颜色等），可以成为对该微生物进行分类、鉴定的重要依据第六页，共二十四页。菌落的描述：形态、表面和边缘特征第七页，共二十四页。第八页，共二十四页。同一

3、细菌在不同的培养平板上形成不同的特征菌落第九页，共二十四页。一、用固体培养基分离纯培养使微生物在固体培养基平板上形成单个菌落的基本方法：1、稀释倒平板法2、涂布平板法3、平板划线法4、厌氧微生物的分离第十页，共二十四页。第十一页，共二十四页。一、用固体培养基分离纯培养1、稀释倒平板法2、涂布平板法操作较麻烦，对好氧菌、热敏感菌效果不好！使用较多的常规方法，但有时涂布不均匀！第十二页，共二十四页。利用L棒进行涂布第十三页，共二十四页。3、平板划线法第十四页，共二十四页。3、平板划线法第十五页，共二十四页。二、选择培养分离 抑制大多数其它微生物的生长； 使待分离的微生物生长更快；对微生物群落中数量

4、占少数的微生物的分离纯化没有一种培养基或一种培养条件能够满足自然界中一切生物 生长的要求，在一定程度上所有的培养基都是选择性的。第十六页，共二十四页。三、选择培养分离1. 利用选择平板进行直接分离待分离的微生物生长，其它微生物的生长被抑制 高温下培养：分离嗜热细菌； 培养基中不含N：分离固氮菌； 培养基加抗生素：分离抗性菌；第十七页，共二十四页。1. 利用选择平板进行直接分离 颜色反应：分离特定的菌株； 牛奶平板：分离蛋白酶产生菌；待分离的微生物的生长特征明显不同于其它微生物第十八页，共二十四页。常用的选择培养基沙门菌常用的培养基：亚硫酸铋琼脂平板(BS):含有煌绿、柠檬酸铋铵、亚硫酸钠、硫酸

5、亚铁，具有强选择性，分离沙门氏菌HE（Heetoen)：柠檬酸铁铵、去氧胆酸盐、硫代硫酸钠、麝香草酚蓝和复红，分离肠道致病菌第十九页，共二十四页。麦康凯培养基乳糖、胆盐，弱选择性，中性红,分离肠道致病菌中性红指示剂pH感应范围6.8（红色）到8.0（黄色）分解乳糖产酸，菌落颜色呈红色沙门氏菌、志贺氏菌不分解乳糖，菌落颜色与培养基相同胆盐有助于沙门氏菌的生长，抑制其他细菌大肠杆菌？沙门氏菌？常用的选择培养基第二十页，共二十四页。克氏双糖铁 蛋白胨； 牛肉膏 ； 酵母膏 ；乳糖 ； 葡萄糖； 氯化钠 ； 柠檬酸铁铵 ；硫代硫酸钠 ； 琼脂 ；酚红为指示剂，黄色为产酸，红色为产碱观察克氏双糖接种后斜

6、面、底层产酸、产气、产H2S的情况，大肠杆菌斜面？沙门氏菌斜面？第二十一页，共二十四页。接种划线菌种：大肠杆菌、沙门菌、青霉采用无菌操作进行移植学会分区划线所有平皿和试管必须有标记1824小时（真菌下周观察）观察试验结果，描述固体培养和液体培养的细菌培养特征第二十二页，共二十四页。步骤两个人为一组，一个接种大肠杆菌，一个接种沙门菌LB液体移植普通琼脂：分区划线麦康凯：分区划线LB半固体培养基：穿刺接种克氏双糖：先穿刺后接种斜面真菌（青霉）接种沙保劳氏培养基第二十三页，共二十四页。微生物大小测量原理微生物细胞的大小是其形态特征之一，也是鉴定的依据之一。在研究工作中有时要测定显微镜下微生物细胞的大小，使用工具为显微测微尺。显微测微尺有镜台测微尺和目镜测微尺。目镜测微尺是一块可放在目镜内的园形玻片。在玻片中央把5mm长度，刻成100等分的小格，其目镜测微尺经过镜筒光学系统后，其每格尺寸随镜筒长度变化而变化，也随放大倍数而变化，因此必须选定显微镜及放大倍数。然后用已知长度的镜台测微尺来校准，计算