蛋白质分离纯化检测分析技术及其应用课件

1、【范文泽】制作湘雅医学院医学信息专业1202班蛋白质技术及其应用分离纯化，检测分析ProteinSeparation and purification detection and analysisThe technology and application Separation and purification分离纯化蛋白质理化性质detection and analysis检测分析Separation and purification分离纯化沉淀透析层析电泳离心分离蛋白质分子大小的差异蛋白质的溶解度差异蛋白质的电荷差异生物分子专一性结合的特性蛋白质颗粒沉降行为不同沉淀 盐析 丙酮沉淀 免疫沉

2、淀盐析原理等电点沉淀pH控制salt precipitation硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 r不同蛋白质具有不同的等电点，而蛋白质在等电点时溶解度最低，由此可把蛋白质混合物分开。这样沉淀出的蛋白质保持着天然构象，能重新溶解于适当的pH和一定浓度的盐溶液中。 Principle 丙酮、甲醇、乙醇等沉淀: 此类有机溶剂能使蛋白质在水溶液中的溶解度降低。低温（零下40-60度）进行，丙酮用量一般10倍于蛋白质溶液体积。蛋白质被丙酮沉淀后，应立即分离。 免疫沉淀：由于蛋白质具有抗原性，利用特异性的抗体识别相应的抗原蛋白，并形成抗原抗

3、体复合物的性质，从蛋白质混合溶液中获得相应的抗原蛋白。透析原理Principle材料passiveTargeting利用蛋白质分子不能通过半透膜而将其与小分子物质分开玻璃纸或纤维素材料按照分子大小进行分离，分离取决于透析袋截留的分子量。只用来除盐类和小分子杂质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳原理蛋白质并非线形的，它存在二级结构、三级结构及四级结构蛋白质分子所带的电荷不同SDS分子覆盖所有蛋白质颗粒表面消除蛋白质分子形状的影响掩盖不同类蛋白质分子原有的电荷差别蛋白质分子与带负电荷较多的SDS分子结合蛋白质分子的电泳迁移率与分子量成线形关系层析原理Principle分类Classificationchr

4、omatography离子交换层析、凝胶层析和吸附层析等。待分离蛋白质溶液在流动相的带动下经过一个固态物质（固定相）时，根据溶液中待分离的蛋白质颗粒大小、电荷多少及亲和力等，使待分离的蛋白质组分在两相中反复分配，并以不同速度流经固定相而达到分离蛋白质的目的 。凝胶层析离子交换层析 凝胶层析亦称凝胶过滤、排阻色谱或分子筛层析等。其机理是分子筛效应，主要根据蛋白质分子的大小进行分离和纯化。层析柱中的填料是某些惰性的多孔网状结构物质，多是交联的聚糖(如葡聚糖或琼脂糖)类物质，凝胶颗粒在合适的溶剂中浸泡合物后，再以同一溶剂洗脱。因此，混合样品如同“过筛”一样，因分子大小的不同得以彼此分开。Protein蛋白质色谱电泳纯结晶纯结晶与结构分析活性及功能测定氨基酸组成及顺序分析分子质量与等电点的测定纯度鉴定鉴定目标蛋白质蛋白质纯度的鉴定鉴定方法色谱纯：在层析图谱中只有一个洗脱峰电泳纯：在电泳图谱中只有一条电泳条带结晶纯：能够获得蛋白质晶体相互验证：在某一种鉴定方法下表现为均一的蛋白质在另一种方法可能表现为不均一，因此需要互相验证。色谱纯电泳纯结晶纯蛋白质鉴定分子质量测定（SDS)氨基酸组成及顺序分析结晶及结构分析免疫印迹（w