DB11-T 371-2006-鳄龟-（高清有效）

1、DBICS 67.120.30DBB 52备案号：19162-2006北京市地方标准DB11/T 3712006鳄龟American Snapping Turtle2006-07-25发布2006-10-01实施北京市质量技术监督局发布DB11/T 3712006前 言本标准的附录 A 为规范性附录。本标准由北京市农业局提出并归口。本标准起草单位：北京市水产技术推广站。本标准主要起草人：杨华莲、张黎、潘志、宣庭孝、高南、赵睿。IDB11/T 3712006鳄 龟范围本标准规定了鳄龟（Chelydra Serpentina）学特性、生化遗传学特性、分子遗传学特性，以及检测方法。本标准适用于鳄龟的

2、种质鉴定。规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单不包括勘误的内容GB/T5009.3-2003 食品中水分的测定GB/T5009.4-2003 食品中灰分的测定GB/T 5009.5-2003 食品中蛋白质的测定GB/T 5009.6-2003 食品中脂肪的测定GB 17718-1999 鳙GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分：抽样方法GB/T 18654.12-2002 养殖鱼类种质检验 第12部分：染色体组型分析名称与分类学名鳄龟（Chelydra Serpentina ）分类位置鳄龟科（Chelydri

3、da）鳄龟（Schweigge），鳄龟Chelydra Serpentina）。主要生物学特性外部形态特征外形2/313枚-15枚背甲组成，有3鳄龟正面图见图1，腹面图见图2。1DB11/T 3712006图1鳄龟正面图图2鳄龟腹面图(1)吻 颈 肢 背甲吻 颌 颈 肢 背缘盾(5)肢 爪尾肢 爪尾 (9)甲可数性状椎盾：5， 颈盾：2， 肋盾：8-10， 缘盾：22， 臀盾：2， 喉盾：2，肱盾：2，胸盾：2，腹盾：2， 股盾：2， 甲桥：6， 腋盾：2， 侉盾：2， 肛盾：1-2。可量性状不同年龄组的鳄龟背甲、腹甲长和宽的实测值见表1。表1 不同年龄组鳄龟背甲、腹甲长和宽的实测值（单位：c

4、m）项目组别1 龄2 龄3 龄4 龄背甲长13.440.4916.900.3520.100.8522.700.56背甲宽11.560.6516.800.6721.600.8422.700.73腹甲长10.650.5212.100.5313.800.7216.000.58腹甲宽10.580.6315.000.6417.700.6520.800.74内部构造特征脊柱骨颈椎8枚，胸椎10枚，荐椎2枚，尾椎20枚。消化道全口无齿，口裂有角质化硬鞘。食道细而长，胃较宽大，小肠盘曲位于十二指肠后。消化腺由肝、胰和胆等组成。肝深褐色且较大，分左右两叶，胆囊在肝叶中，胰腺乳黄色紧靠十二指肠。肺扁平长圆囊状，2

5、叶。鳄龟的内部结构图见图3。2DB11/T 3712006（1）气管（2）食道（1）气管（2）食道（3）心脏（4）肝脏（5）胃（6）胰脏（7）肺脏（8）胆囊（9）卵巢（10）小肠（11）膀胱（12）脾脏（13）输卵管（14）肾脏 （15）泄殖腔（16）副膀胱（17）泄殖腔孔图3鳄龟（雌性）内部结构图生长不同年龄组鳄龟的体重与体厚实测值见表2。表2 不同年龄组鳄龟的体重、体厚实测值项目组别1 龄2 龄3 龄4 龄体重（g）926.40100.421200120.521900145.382700210.45体厚（cm）6.890.407.30.539.80.4111.20.40繁殖性成熟年龄3龄-

6、4龄。繁殖季节4月-6月。年性成熟次数性成熟个体性腺每年成熟一次，一次产卵。产卵量每只性成熟雌龟每年产卵20枚-80枚。肌肉营养成分主要营养成分鳄龟肌肉蛋白质、粗脂肪、灰分、水分等营养含量指标见表3。3DB11/T 3712006表3 肌肉（后肢基部）主要营养成分检测项目营养指标（%）粗蛋白19.32粗脂肪0.40灰分0.88水分77.9氨基酸含量表4 肌肉（后肢基部）主要营养成分检测项目氨基酸含量（%）氨基酸（以鲜基计）总量17.68%天门冬氨酸1.65苏氨酸0.86丝氨酸0.83谷氨酸2.95甘氨酸1.00丙氨酸1.10胱氨酸0.20缬氨酸0.88蛋氨酸0.52异亮氨酸0.85亮氨酸1.4

7、5酪氨酸0.68苯丙氨酸0.71赖氨酸1.52组氨酸0.60精氨酸1.10脯氨酸0.78细胞遗传学特性22n=52核型公式12m+4sm+6st+2t+28cmNF=68染色体组型鳄龟染色体中期分裂相见图4 ，染色体组型见图5。4DB11/T 3712006图4染色中期分裂相图5 染色体组型生化遗传学特性肌肉的乳酸脱氢酶（LDH）同工酶有8条谱带；肝脏的酯酶（EST）同工酶有5个基因座位，有5条谱带。肌肉的乳酸脱氢酶（LDH）同工酶电泳图谱见图6。肝脏的酯酶（EST）同工酶电泳图谱见图7。OO图 6 肌肉的乳酸脱氢酶（LDH）同工酶电泳图谱Est-5Est-4 Est-3Est-2 Est-1

8、分子遗传学特性O图7肝脏的酯（EST）同工酶电泳图谱用20个RAPD（DNAPCR）引物对其基因组DNA进行分析，确认引 物S19的分析结果能够反应其基因组的多态性特征。引物S19序列：tgcccgtcgt见图8。5DB11/T 3712006图 8 基因组 DNA RAPD 图谱M：分子量标准C：对照样品G：鳄龟样品（4个样品）检测方法生物学性状测定参照GB 17718规定的方法测定。肌肉营养成分测定样品制备105GB/TGB/TGB/T 5009.5、GB/T 5009.6规定的方法进行。氨基酸105GB/TGB/TGB/T 5009.5、GB/T 5009.6规定的方法进行。细胞遗传学特

9、性检测根据GB/T 18654.12的相关规定进行。生化遗传学性状分析样品制备样品加3%辅酶I液匀浆，低温离心，至上清液澄清。整个制备过程均在低温下操作。电泳分析（Tris）值7.0。 将10，电泳0.2cmA。结果判定将测定结果对照图6、7谱带确定该种同工酶的编码座位数和多态座位的基因数。分子遗传学特性分析DNA6DB11/T 3712006（0.5molEDTA，PH值8.0；200g/mLProteinnseK；0.5% Snrcosyl） 于55消化去除RNA然后用2150mmol/LTris.HCl(pH10mmol8.0），透析至OD2700.05，检测DNARAPD 引物及扩增条

10、件用PE-9600PCRRAP扩增引物OPP及OP组计15RAPD10mmol/L Tris.HlpH 8.），50 mmol/L KC，2.0 mmol/L MgC，0.001%明胶；Dapt.dGT、Dctp，dTT各为0.1 mmol/L1，基因组DNA 20g1单位Tag93.5变性1min，36退火1min，72延伸2min，计45个循环，循环结束后延伸5min，扩增产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳检测。琼脂糖凝胶电泳凝胶浓度为1.5%的琼脂糖，胶中含0.5g/mL溴化乙锭。电泳缓冲液为TBE，电泳在室温下进行，电压为15V，电泳时间为16h。电泳毕在紫外灯下观察拍照。检测规则检测分类检测分为鉴定检测和质量一致性检测。检测项目取样样品龟的抽样按GB/T 18654.2规定执行。组批以同龄期的鳄龟为同一批。判定规定各项检验指标在标准范围内则判定为鳄龟良种。7DB11/T 3712006附 录 A（） 酯酶染色液配方A.1表A.1 酯酶染色液配方-乙酸萘酯（mg）坚牢蓝B盐（mg）三羟甲基氨基