医学微生物学资料：细菌实习-4

1、CAMS/PUMC细菌学实习-抗菌素敏感试验及结果分析CAMS/PUMC实验目的掌握药敏试验（K-B纸片琼脂扩散 法）方法、原理及结果判读掌握药敏试验的结果判读及抗菌谱分析实验材料无菌棉棒0.85%生理盐水MH培养基比浊仪，标准比浊管药敏涂布仪纸片分配器药敏测量仪，游标卡尺CAMS/PUMCCAMS/PUMCSites of action of antibacterial drug classes CAMS/PUMCDrugs inhibits specific steps in bacterial cell wall synthesisfosfomycin磷霉素: early steps i

2、n peptidoglycan monomer synthesis; vancomycin万古霉素: binds to peptidoglycan intermediates, inhibiting their polymerization; penicillins: peptidoglycan cross-linking; ethambutol乙胺丁醇: Mycobacterium tuberculosis. CAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMC抗菌药物敏感试验(antimicrobial susceptibility testing in vitro )

3、抑菌试验杀菌实验联合药敏试验检测细菌所产生的抗生素灭活酶试验CAMS/PUMC抑菌试验（bacteriostatic test） 体外测定抗菌药物抑制细菌生长能力的试验纸片扩散法（disc diffusion test）稀释法（dilusion test）E试验法（E test）全自动微生物鉴定药敏分析仪CAMS/PUMCK-B纸片琼脂扩散法（Kirby-Bauer disc agar diffusion method）将含有定量抗菌药物的纸片贴在已接种测试菌的琼脂板上纸片中所含的药物吸收水分，溶解后向纸片周围区域扩散形成递减的梯度浓度在纸片周围抑菌浓度范围内测试菌的生长被抑制，从而形成透明的

4、抑菌圈抑菌圈的大小反映测试菌对测定药物的敏感程度，并与该药对测试菌的最低抑菌浓度（MIC）呈负相关CAMS/PUMCCAMS/PUMC红青链抑菌圈susceptibility test 药敏试验 CAMS/PUMC药敏试验用培养基水解酪蛋白（Mueller-Hinton，MH)琼脂pH7.27.490mm内径的平板需注入25ml培养基琼脂厚度4mm用前37培养箱放置30分钟使其表面干燥营养要求高的细菌需加入营养增补剂CAMS/PUMC药敏试验抗菌药物的选择熟悉并掌握常用抗菌药物的药理学特性及其临床适应症要结合本单位、本地区常用的抗菌药物、常见病原菌的耐药状况重点选择预测药物（该药物的药敏结果可

5、预测同类药物的敏感性）CAMS/PUMC菌液制备菌液制备待测菌平板上挑取4-5个相同菌落，接种置3-5ml水解酪蛋白肉汤中， 37培养箱培养置中等浊度 0.5麦氏标准浊度（Mc-Farland standard）直接从37 18-24培养的琼脂平板上挑取纯菌落制成肉汤或生理盐水悬液CAMS/PUMC抗菌药物纸片直径6.35mm吸水性能好（20ul）含有规定药物两面均清楚地印有药名代号、药量数字CAMS/PUMC结果判读用精确度为0,1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径记录结果CAMS/PUMC药物敏感性分级敏感（S）表示测试菌能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制或杀灭中介度（I）在敏

6、感与耐药之间建立缓冲带，以减少因各种实验条件失控对实验结果的影响耐药（R）表示测试菌不能被测定药物常规剂量给药后在体内达到的血药浓度所抑制CAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMC稀释法将被检菌株接种于一组含有不同稀释度抗菌药物的培养基内37 18-24小时后，抗菌药物能抑制被检菌肉眼可见生长的最低浓度（MIC）即该菌对该抗菌药物的敏感度MIC50 MIC90根据MIC和常用剂量时该药所能达到的血药浓度来划定细菌对各种药物的敏感度或耐药的界限（break point,折点)CAMS/PUMCCAMS/PUMCCAMS/PUMCE试验CAMS/PUMCE试验K-B纸片法操作步骤配制0

7、.5Mac浊度的细菌悬液棉棒沾菌液涂布MH平板纸片分配器贴纸片37孵育18-24小时游标卡尺测量抑菌环直径CAMS/PUMCCAMS/PUMC讨论题影响药敏试验结果的主要因素CAMS/PUMC课前准备葡萄球菌、不动杆菌的生物学特性、种类、如何鉴定、耐药状况，是否医院感染常见菌？若是？何种类别？发生葡萄球菌、鲍曼不动杆菌感染的原因即污染源是什么？（可查资料或根据病例分析）如何控制细菌感染、清除污染源？病例中如何做的？抗菌药品的使用如何？CAMS/PUMC临床感染病例诊治过程中：如何及时、正确送检微生物检测标本（如：送检时间、标本类型等）微生物检测的重要性CAMS/PUMCCAMS/PUMCNat

8、ional committee for clinical laboratory standard, NCCLSCAMS/PUMCThe MIC/MBC test of a moderately resistant bacteriostatic drug. Note that once the bacteria are removed from the drug they can grow on drug free medium at most concentrations.CAMS/PUMCThe MIC/MBC test of a moderately resistant bacterici

9、dal drug. The bacteria removed from the drug cannot grow on drug free medium. One tube difference is allowed in this test.CAMS/PUMCResistance in nosocomial （医院）infections Some organisms are resistant to all approved antibiotics and can only be treated with experimental and potentially toxic drugs (e.g. MRSA耐甲氧金葡, Pseudom