青霉素钠中致使鲎试验阳性的非内毒素物质的鉴别

1、青霉素钠中致使鲎试验阳性的非内毒素物质的区分陈瑜韦群冯聚锦梁丹郭贵芳曹艳玲【摘要】通过对数批青霉素钠作细菌内毒素阐发，实行效果证明某些青霉素钠中含的致使鲎试验阳性的物质不是内毒素。本文重要先容对存在青霉素钠中致使鲎试验阳性的非内毒素物质的区分。【关键词】青霉素钠；细菌内毒素；鲎试验非内毒素反响物(TAL-R)ABSTRATBaterialendtxintestfrseveralbathesfpeniillinsdiuprdutsshedthatseaterialsleadingtpsitiveTALreatinerenn-endtxins.Thispaperainlyintrduedhtdif

2、ferentiatenn-endtxinTAL-reativeaterialsexistinginpeniillinsdiu,hihausedthepsitiveTALtestresults.KEYRDSPeniillinsdiu;Baterialendtxin;TAL-reativeaterials(TAL-R)青霉素钠是中国药典收载用细菌内毒素查抄法1(BET)查抄的品种。在对青霉素钠产物做BET查抄时创造，有几批产物利用差异批号的鲎试剂或差异厂家的鲎试剂查抄有差异的效果。为此我们对数批青霉素钠样品作了如下的实行阐发。1质料1.1样品(S)青霉素钠，内毒素限值(L)0.01EU/100U，

3、含量96%，1670U/g。样品编号1#、2#、3#、4#、5#、6#、7#和8#。1.2细菌内毒素国度尺度品(RSE)批号981，9000EU/支，中国生物成品检定所。1.3鲎试剂(TAL)(1)批号0508150和0509060，0.125EU/l，规格为0.1l/支；批号060217SB(除G因子TAL)，0.25EU/l，规格为0.5l/支，均为湛江安度斯生物(以下简称为A公司)产物。(2)批号H450L，0.125EU/l，规格为5.2l/瓶，HARLESRIVEREndsafe公司(以下简称为B公司)产物。(3)批号0511020，0.125EU/l，规格为0.1l/支，为另一TA

4、L厂家(以下简称为公司)产物。1.4抗增液(KS)批号0307250，规格为0.6l/支，A公司产物。1.5(1-3)-D葡聚糖尺度品(-Gluan)批号L84562，规格为1g/l，B公司产物。2要领与效果以下全部实行均按中国药典2022版细菌内毒素查抄法要求操纵。所用5批TAL敏捷度复核的效果均切合BET法要求。2.1实行一青霉素钠样品对差异厂家TAL的反响比力。样品检测浓度为1.2g/l。查抄效果见表1(PP为尺度内毒素)。表1效果表现，青霉素钠样品确实存在着对差异TAL反响差异的征象。特殊是2#样品，差异批号以及差异厂家的TAL反响有差异的效果，这类样品中所含的能使鲎试验阳性的物质是内

5、毒素照旧鲎试剂非内毒素反响物(TAL-R)？我们对此举行了一系列的阐发区分试验。2.2实行二对实行一查抄效果呈阳性的样品(2#和3#)用KS(G因子旁路按捺剂)复溶TAL再查抄，举行-葡聚糖类物质区分。样品编号2#和3#的检测浓度为1.25g/l。用BET水稀释-D葡聚糖尺度品至0.1g/l。制备0.25EU/l的尺度内毒素溶液(E0.25)，查抄效果见表2。表2效果表现，用BET水复溶的TAL对-葡聚糖反响阳性；用KS复溶的TAL对-葡聚糖不反响，也不影响对内毒素(E0.25)的反响。2#样品对用BET水或KS复溶的TAL全部反响呈阳性，表白2#样品所含的鲎试验反响物不是-葡聚糖，大概是内毒

6、素或是别的的TAL-R。3#样品对用BET水复溶的TAL个体厂产物有反响，对用KS复溶的TAL不反响(阴性)，表白3#样品所含的鲎试验反响物是-葡聚糖。2.3实行三表3效果表现，除G因子TAL只对内毒素反响，不与2#、3#及-葡聚糖反响，提示2#、3#样品所含的鲎试验反响物不是内毒素。2.4实行四样品对TAL的反响性与时间的干系见表4。样品编号2#；检测浓度为1.56g/l；TAL批号0508150。实行要领(1)把样品制备成1.56g/l溶液，室温(20)安排0.5h或5h，然后举行BET。(2)把样品制备成含2(0.25EU/l)尺度内毒素的1.56g/l浓度溶液(PP)，室温(20)安排

7、0.5及5h，然后举行BET。(3)制备0.25EU/l的尺度内毒素溶液(E0.25)，室温(20)安排0.5h及5h，然后举行BET。表4效果表现，2#样品溶液的鲎试验反响本领会随安排时间衰减，反响效果由阳性变为阴性；而尺度内毒素(PP及E0.25)没有这种征象。此实行效果进一步验证了2#样品所含的鲎试验反响物不是内毒素。3讨论平凡的鲎试剂有两条凝集反响途径：途径一：内毒素-因子-B因子-凝固酶-凝胶途径二：TAL-R-G因子-凝固酶-凝胶研究已证明(1-3)和(1-4)-D葡聚糖是TAL-R，固然另有别的的TAL-R。利用安度斯公司的抗增液(KS)复溶TAL，能使TAL具有抗(1-3)-D-葡聚糖滋扰的本领，极明显地进步TAL对内毒素反响的特异性。研究表白2大多数的BET假阳性是由这种TAL-R引起的。但KS对别的的TAL-R无效。因此，只有无G因子TAL或除G因子TAL才是真正意义上的BET特异性鲎试剂。另一方面必要指出的是，鲎试剂的差异是一个客不雅终究。鲎试剂是一种生物试剂，临时岂论鲎试剂的制备技能及制备工艺差异能导致鲎试剂产物的性能或质量差异，仅是鲎试剂质料的差异如今人们就难以消除。鲎试剂的质料都是来自十几只乃至几十只鲎的阿米巴细胞混淆液，每只鲎的体质差异就有大概导致终极鲎试剂产物的差异。我们以为，应尽快对鲎试剂质量尺度、鲎试验效果的假阳性区分等方