013-2022年版中国药典培训回答(第2部分：微生物限度1)

1、1、微生物方法验证，要求菌株回收率70%，是否有上限要求？如不100%110%。100%，由于加进去的菌量是一样的，100%可看成是操作上的误差。按微生物的特性，假设不超过太多，是可以承受的，但没有具体上限。本所把握在110%以内。2、在微生物方法验证时，霉菌、酵母菌计数验证只用黑曲霉及白色念的白色念珠菌的形态太小与养分琼脂上培育的细菌的某些形态大小相 种菌落形态相像？答：菌落形态相像不等于就是同一种菌。在验证时，养分琼脂的验证菌株为大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌，假设本底菌为0， 则养分琼脂上长的菌应当不是白色念珠菌。要推断是否为白色念珠菌， 定试验后才能进展推断。很多验证需对生孢

2、梭菌进展计数 7cm 以上1618 小时这个时间进展观看，计数，超过20 小时,由浇注后，置厌氧罐袋里，再置培育箱培育，计数。4、微生物限度检查法中所用的培育基要进展适用性检查试验，请问这些培育基还需要做无菌检查试验吗？答：微生物限度检查，药典上没有特别说明对培育基作无菌性检查，但污染，实际上也包括了培育基的无菌性检查。5EMB、Macl 等培育基其分装容器需要预先灭菌吗？答：不用。只要是干净的就行，由于分装后还要灭菌。6、具有抑菌性的供试品，细菌、霉菌、都是用薄膜过滤法来检查的，那么沙门菌可以用常规法来检查吗？就是可以不经过过滤直接接种到养分肉汤中吗？答：这要看你验证的结果。假设通过验证，你

3、的品种是对沙门菌有抑制作用，且用培育基稀释法不能消退其抑菌性，则就必需考虑用薄膜过滤法。7、微生物限度检查中，稀释剂比照组，是在稀释液中参加50100cfu 的菌，还是把稀释液50100cfu 的浓度呢？50100cfu/ml菌的浓度。在这里，我对上次讲课时关于稀释剂比照组操作的PPT 进展订正，对于离心薄膜过滤法的稀释剂比照组的操作应当是：含50100cfu/ml菌的稀释液 离心 取稀释液与试验组同样取上层液 过滤、冲洗 贴平板8、稀释级比照组:50100cfu/ml菌稀释液离心取供试液稀释液过滤、冲洗贴平板。这里需要加供试液吗？是否应为上述离心后的菌液？“上述离心后的菌液”。关于这一状况，

4、我在第7 题里已经作了说明。9、当要做稀释剂比照组时，是否就是从制备供试品时就同时做一份不含供试品而是含菌50100cfu 的样品？等于按同一个方法制备一个供试品，五个含菌稀释液比照组？答：是的。10、菌落计数是否需要将每天计数的数据登记在记录本上，是否可以只记录最终的数据？ 每天点计的数记录在培育皿上，发报告时只要最终菌落数就行了。11、假设样品中有不溶物如片剂中的辅料颗粒，经常会影响培育前期的结果，药典要求逐计数？9 题答复。或者是在养分琼脂中参加TTC 试剂100ml 0.1%12此表格仅含样品名称、批号及检查结果。之后再将检测结果移至具体记录中？答：原始记录应当只有1 份。假设你说的具

5、体记录是属于一般记录，是没有必要的，假设是指报告书，就应当没问题。这要看你自己订的SOP。13、直接接种法培育后的菌落报告：原液230cfu,10 倍后 40cfu,2022 版药典的菌落数报告规章如何报告菌落数？答：报告菌落数为 4010=400cfu。应以菌落数乘以稀释倍数后的最大值作为报告结果。14、05 5 分钟，而10 3 分钟，原来按5 分钟验证的产品是否需要重验证？答：是的。需要再确认一下。15、10 版药典附录微生物限度检查法中结果推断的菌落计数单位是以“cfu”表示，但正文品种项下是以“个”表示，最终应以哪位为准呢？答：应当是以cfu 为单位。正文是由于印刷时没统一修改正来，

6、关于这个问题，在增补本上修订过来。在增补本没出来之前，正文品种还是以个为单位1650-100cfu/ml。答：50-100cfu 在平板上比较好点计，菌落不简洁重叠。少于50，则试验误差会增大，重现100 则简洁造成菌落太密或重叠不好计数。17验证与记录时，是否要做增菌以后的步骤呢？答：要。不然你怎么知道检出来的菌是你加进去的试验菌呢？18、承受薄膜过滤法检验，阳性菌，计数是否也用此方法计数？ 答：是的。1910 35-3730-35按05 版药典检品是否需要重验证？是否有必要进展延长时间前后菌生长状况变化的验证试验？答：目前没有相关性规定，我们认为可按原来已阅历证的方法，用2022 年版的培

7、育时间和温度再确认一下，假设结果符合药典要求，则可用。假设不行行，则调整后再进展验证。20、假设无需都重验证，那么参照标准为05 版药典，又可以通过什么文件来更改为参照10版药典？答：请看上一题。21BL 增菌液。答：是的。请看附录“微生物限度检查法”中的表 2。22、10 版药典增加贴膏剂的检查，狗皮贴膏药属于贴膏剂吗？答：应当是的。请比照中国药典一部附录P8 进展确定。23不超过 45的稀释液？答：假设能够充分分散样品，可以的。24、请问假设承受薄膜过滤法进展验证，由于过滤难度大，是否可以每膜过滤相当于供试品0.1g10？ 可分几个膜。25、请问承受静置分层取上清液薄膜过滤，是否需要加稀释

8、剂比照组？ 答：个人观点可以不用,但未阅历证。2635 沉到底部？答：未阅历证。27、培育基适用性检查，抑制力量检查用菌种是哪些？,请看药典“微生物限度检查法”中表 “计数培育基的适用性检查”。28、投料中有神曲提取物，限度应界定为多少？答：不是药材原粉投料，标准均按“不含药材原粉的制剂”执行。29、微生物限度检查里有关阅历类的东西都必需经过验证才可以使用,那么验证的内容包括哪些数据应记录，是否也应当有文件与记录？答：参照药典，你是作什么样的检验，就作什么样的验证，有验证就应当有记录。3010 0，100 22022 年版药典应以低稀释1200个/答：按中国药典2022年版报告应为10个/g或

9、ml，2022年版报告200cfu/gml。31、计数方法的验证：执行版药典是否就延长培育时间做方法验证？ 答：是。32“每个稀释级每种培育基至少检验2ml 供试液”2ml 还是每皿注1ml0.5ml 0.2ml1ml?1ml2 个皿；培育基稀释法0.5ml 0.2ml时，供试2ml1ml 菌落数合计后，2ml 的菌落数再平均；本级就不需做 1ml 1ml/皿就行了。33、在细菌霉菌计数检查中，教师提到的每个稀释级每种培育基至少检验2ml 供试液，但2022 版药典上并没有要求要这样做，那应以哪个做法为准？“1ml90mm 1520ml 45的溶化的养分琼脂培育基或玫瑰红钠琼脂培育基或酵母浸出

10、粉胨葡萄糖琼脂培育基，混匀，凝固，倒置培育。每稀释级每种培育基至少制备2 个平板。”这里的描述是以常规平皿法进展描述的，所以“每稀释级每种培育基至少制备2 个平板”，也就是2ml的量。对于培育基稀释法，请看药典供试液的制备中3. (6) 。34、10 版药典要求检查沙门菌的供试品，其检验量应增加20g 20ml，10g 10ml用于阳性比照试验20g 20ml 10g 10ml 直接用于沙门菌把握检查，另10g 10ml pH7.0 100ml 1：10 的供试品溶液作为细菌，霉菌，酵母菌的20g都用于沙门菌检查？答：20g 都是用于沙门菌检查。沙门菌的检查法是：取3 200ml 养分肉汤，其

11、中2 份分别10g 10ml 1 10100cfu 3 10ml 稀释剂作阴性比照进展检查，所以。细菌，霉菌，酵母菌检验的样品不包括在这里。3510g 10ml20g 20ml？P13010g10ml10g10ml是用于阳性比照试验的。请看上一题目解释。36、承受薄膜过滤法时，滤膜承受何种方法灭菌最好？答：据我们阅历，最好承受一次性过滤器。假设用屡次使用的过滤器好，由于干热灭菌后，滤膜较脆，试验时不简洁保证滤膜完整。37、方法学验证时，承受平皿法稀释级计数，是否要做稀释级比照组？ 释级的本底菌是多少。假设是指稀释剂比照组，就不用，由于所用的稀释剂是药典规定的， 是无毒性的稀释剂。380.2ml

12、2 0.2ml50100cfu。答：不管每皿加的供试液的量是多少，每皿加菌液的量都是1ml ,即都是 50100cfu。39、平皿法稀释法计数验证时，取最低稀释供试液如0.5ml 50100cfu 试验菌，那50100cfu 50100cfu 50100cfu0.5ml1ml 0.5ml 的试验菌？答：平皿法稀释法计数验证时，每皿要加的菌液是50100cfu，一般我们配制的菌液浓 度是 50100cfu/ml1ml。假设你配制的菌液不是这个浓度，你可以折算，只要加50100cfu/皿就行了。40、细菌霉菌方法验证，同时做1ml，0.5ml，0.2ml 供试品组及供试品验证组时，菌液是否1ml，

13、0.5ml，0.2ml 1ml，0.5ml，0.2ml 供试品验证组中的菌数能否也50100cfu？答：验证时，不管是 1ml，0.5ml，0.2ml 的供试液，每皿的加菌量都是 50100cfu，即 1ml50100cfu/ml。410.2ml0.2ml0.2ml 的菌液计数是否在50100cfu0.2ml。答：请看上一题的解释。42、微生物限度检查霉菌、酵母菌要求不超过100 的状况下，这两种菌是不是要分开来检，用不同培育基检测？目前只用玫瑰红钠琼脂培育基检测这两种菌，有没有必要修改？答：按药典规定，一般品种是用玫瑰红钠琼脂培育基检测这两种菌；含蜂蜜、王浆的液体制剂，用玫瑰红钠琼脂培育基测

14、定霉菌数，用酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培育基测定酵母菌数， 合并计数。43、测外表微生物时，直接接触药品与间接接触药品的限度25全都，是否有不妥，假设100 的菌数也是取两位有效数字吗？答：“测外表微生物” 订部门反映，并提出你认为合理的解决方法。微生物的报告规章一般都是取两位有效数字。44、内包装材料PVC 硬片，铝箔等样品的微生物检验限度方法？答：是药包材的检验？应当有相应的检验方法吧！45、把握菌检查，大肠埃希菌IMViC 试验，结果显示未检出，有没有硬性规定必需要进一步鉴定？答：对于大肠埃希菌检查，IMViC 试验已经是鉴定试验了，假设IMViC 试验结果显示未检出，那么就可以报告未检出大

15、肠埃希菌。46364 3603703670 报告菌数应为多少？4 6 5 364 3603670 报告菌数370036503600。47 时已做过把握菌供试液，验证时供试液对把握菌无抑菌性，假设只是做把握菌不加供试液 则在培育基适用性时已证明培育基的质量 性比照试验怎么做？ 菌检查时必需同时从阳性比照和阴性比照，这应当是考虑到检验过程的检验系统的误差吧。 不尽一样，在检验过程中对被检微生物的干扰也不同。因此，药检所应每批都做。48、取样量药典要求“2 个以上最小包装单位中抽取供试品”2 个？答：包括。49做方法验证，是否需要到药检所备案或需要药检所审核？答：药厂自行做的微生物方法验证不需要经过

16、药检所的审核。同样，重验证后也不需要。 的方法进展确认，看方法是否可行。5090%，那么其次批培育基与第一批培育基比较回收率为80%，则折算为其次批培育基与比照培育基比较回收率为72%，之后购置的培育基与前一批比较，而不用每 次培育基适用性都与比照培育基比较，这样可不行行？质量确定有所下降。51 答：请看上一题的解释。52、培育时间有要求2448h，也有要求2472h的，像这种时间要求范围比较大的状况，假设在最短的时间内如：24h就已经长菌，但需进展后续试验推断该菌是否为把握菌，那么，是否需要培育到最长时间如：48h 72h再进展后续试验？答：长势好的话可以进展后续试验不用等到最长时间。53、

17、操作结果的RSD%的范围比较富有，是否可信？eg：黑曲霉假设20cfu皿时，菌落将集中至难以分别，所以回收率准确度较低 50100cfu。54、含药材细粉的胶囊如何制备供试液？答：按固体制剂供试液的制备方法制备，可用45水浴软化溶解胶囊壳。55、大肠菌群检查，需阳性比照吗？ 答：要的。阳性比照菌为大肠埃希菌。56、菌液涂布时，用接种棒还是涂布棒涂？答：用L型涂布棒，也可用玻棒自制。57 答：请看上一题。58、三部药典中有些产品细菌数、霉菌和酵母菌数用每g 多少cfu，但有些为每g 多少个，应怎样记录？答：应当是cfu 才对的，这些应当是在转版时没转过来吧，在增补本应当会转过来。但是在没转过来之

18、前，它还是法定的，必需按药典上的写法来执行。59、如样品的把握菌为大肠埃希菌没检出，但检出其它种菌，结果该怎样判定？ 答：假设是其他致病菌，请看微生物限度检查法的结果推断第一句。60让供试液沉淀后取其上清液呢？这样操作结果牢靠吗？液进展试验，但沉降时间尽可能短(3-5 分钟内)，这样做对结果会有肯定影响，但应当在可承受范围内。61出把握菌，此时，阳性比照试验还需连续做下去吗？答：只要能判定供试液增菌后无菌生长，阳性比照试验菌长出，就可发未检出把握菌。62、如何理解“菌落集中成片不以计数”10-1 1 10-2 级来计数？答：是的。63、如何避开菌落成片？答：1、培育基倾注时温度不宜过高，可削减

19、倾注后培育皿里的水蒸汽太多而造成菌落简洁漫延，或者加盖“陶瓦盖”吸取水蒸汽；2100ml 养分琼脂培育基中参加1%0.1ml，可使生成的菌落变红色，简洁点计，也可在肯定程度上抑制菌落漫延。64盖培育时间要不要延长？答：请看上一题的说明。如用陶瓦盖，培育时间不需要延长。65、请问假设细菌、酵母菌平均菌落数不在其宜选取的范围内，即大于300 100cfu 时，该如05 30300/30100，如果当菌落数大于 300 及 100如何报告？以对产品的生疏将稀释级调整到可报告的级别进展检验。66、请问对于抑菌性难以消退的粉末状样品，承受最好的消退抑菌性的方法是什么？答：假设能溶于水，目前来说，最好的除

20、菌方法是薄膜过滤法；其次是找到相应的中和剂。67、我们生产的产品为外用搽剂非无菌产品，需要对全部原辅料做微生物限度检查吗？ P88或二部附录P1167 就要把握，假设还要进一步提取等，则可通过把握中间产品的微生物限度来把握。68、原辅料是否要单独做方法验证？答：全部要检查微生物限度的品种固然包括原辅料，都要做方法验证。69、中药材的微生物限度如何检测？如超标应如何把握？答：1.中药材的微生物限度检查，参照固体制剂的供试液制备，并依据给药途径执行标准， 如用于直接投料至口服制剂的，还应检大肠菌群。2.如超标，具体问题具体分析。70、中间产品可否不做微生物检测？答：中间产品应当把握微生物限度，各企

21、业应内部质控相关的具体要求。7110-2 稀释级作验证，那我们药检所作检查时是否从10-2 稀释级开头做？答：是的。72家的把握菌验证没有做全例如漏了沙门菌没做，那省所怎么处理？答：1、假设是注册检验，厂家没有做验证，我们是不会接收样品的，也就是说，没做验证273、微生物限度检查时，只有细菌数不合格，那么复试是否可以只做细菌数检查就行了？ 答：可以。74、样品制备中，如羧甲淀粉钠等崩解剂遇水膨胀，经试验1g100ml 仍为胶体浆糊状，无微生物限度检查？剂的温度适当调低些。75法可以消退促进性以获得更准确结果？答：承受薄膜过滤法就是很好的消退影响的方法；药典上规定“供试液从制备到参加检验用培育基

22、不得超过 1 个小时”，就是考虑到样品对微生物存在促进或者抑制作用的影响。因此样品的特性有针对性的参加中和剂等。7MUG将培育液转接到这里的培育液是指MUG还是之前扩增的BL？答：药典上并没有“EMB”MUG 和靛基质试验结果不全都时，是这么规定的：“MUG 阳性、靛基质阴性，或MUG 阴性、靛基质阳性，则应取胆盐乳糖培育基的培育物划线接种于曙红亚甲蓝琼脂培育基或麦康凯琼脂培育基的平板上， 培育1824 小时。”77检沙门菌吗？答：是的。因含猪胆汁膏、毛鸡、猪胆粉。78、微生物检验时，匀浆机应把转速调到多少才不会对微生物有损伤？ 答：没有相关的规定，目前一般使用转速为3000-4000 转/分

23、钟。79、假设使用药典以外的培育基进展微生物限度检查比方TSA，怎么进展培育基适用性检查，是否有适宜的比照培育基？“药品微生物检验替代方法验证指导原则”是否有相应的比照培育基，要看中检所是否来得及研制。803 用不同批号的样品？3 个不同批号样品进展验证。81、每个独立的平行试验是否有必要用3 个不同批号的样品进展验证？3 个不同批号的样品进展验证，可以增加验证结果的重现性。82的培育基进展？3 “除药典附录另有规定外，在试验室中，假设承受已验证的配制和灭菌程序制备培育基且过程附录中进展选择，也可增加从生产环境及产品中常见的污染菌株。”83、能否举例说明哪些培育基是指示力量检查培育基？ 答：请看“微生物限度检查法”2。84、05 SOP 中有说阅历证后把握菌可以