乳酸菌测试方法

1、標準操作程序/S tandard Opera ting Procedure 酸測試方法文件、編碼SOP-QC-007-01修訂號00生效日期編寫人審核人批准人編寫日期月日審核日期月日批准日期月日食品微生物学检测 乳酸菌检测方法设备和材除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材如下：1.1恒温培养箱：36C1C1.2 冰箱：2C5C1 . 3均质器及无菌均值袋、均质杯或灭菌乳钵1.4天平：感 0.1g1.5 无菌试管：18mmx 180mm、15mmx 100mm1.6菌吸管：1mL （具0.01mL刻）、10mL （具0.01mL刻）或微移无液器及吸头1.7无菌锥形瓶： 500mL、 2

2、50mL1. 样品制备样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。2.2冻样品可先使其在 2C5C条件下解冻，时间超过 8h，也可在温超过45C的条件下解冻，时间超过 15min 2.3固体和半固体食品：以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生盐水的无菌均质杯内，于8000r/min10000r/min均质1min2min 制成 1:10 样品匀液；或置于225mL生盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1min2min制成1:10样品匀液。2.4液体样品：液体样品应先将其充分摇匀后以无菌吸管吸取样品25mL放標準操作程 序 /S tandard Opera ting Procedure

3、酸測試方法文件、編碼SOP-QC-007-01修訂號00生效日期編寫人審核人批准人編寫日期月日審核日期月日批准日期月日入装有225mL生盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数的无菌玻璃珠） 中，充分振摇，制成 1:10 的样品匀液。操作步骤3.1 用 1mL无菌吸管或微移液器吸取 1:10样品匀液ImL,沿管壁缓慢注于 装有9mL生盐水的无菌试管中（注意吸头尖端要触及稀释液），振摇试管或换用 1 支无菌试管反复吹打使其混合均匀，制成 1：100 的样品匀液。3.2另取1mL无菌吸管或微移液器吸头，按上述操作顺序，做 10倍递增 样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。2. 乳酸菌总

4、数： 根据待检样品活菌总数的估计，选择2个3个连续的适宜稀释，每个稀 释吸取 0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板，使用L形棒进表 面涂布。36C1C，厌氧培养48h2h后计数平板上所有菌数。从样品稀 释到平板涂布要求在 15min 内完成。3. 菌计数： 可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌计数器，记录稀释倍数和相应的菌 数。菌计数以菌形成单位（CFU）表示。5.1选取菌数在 30CFU300CFU之间、无蔓延菌成长的平板计数菌 总数0低于 30CFU的平板记录具体菌数，大于300CFU的可记录为多可 计。每个稀释的菌数应采用两个平板的平板均数。5.2其中一个平板有较大片状菌生长时，则宜

5、采用，而应以无片状菌標準操作程序/S tandard Opera ting Procedure 酸測試方法文件、編碼SOP-QC-007-01修訂號00生效日期編寫人審核人批准人編寫日期月日審核日期月日批准日期月日生长的平板作为该稀释的菌总数；片片状菌到平板的一半，而其余一半中菌分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌数。5.3 当平板上出现菌间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一 个菌计数。4. 结果的表述只有一个稀释平板上的菌数在适宜的计数范围内，计算两个平 板菌数的平均直，再将平均直乘以相应稀释倍数，作为每 g（mL）中菌 总数结果。有两个连续稀释的平板菌在适宜计数范

6、围内，按公式（1）计算：2 C/（n +O.ln h1 2式中：N样品中菌数-平板含适宜范围菌数的平板）菌数总和-平板含适宜范围菌数的平板）菌数总和1 第一稀释（低稀释倍数）平板个数2 第二稀释 （ 高稀释倍数）平板个数d稀释因子（第一稀释）6.3所有稀释的平板上菌数大于300CFU，则对稀释最高的平板进计数，其他平板可记录为多可计，结果按平均菌数乘以最高稀释倍数计算。標準操作程序/S tandard Opera ting Procedure 酸測試方法文件、編碼SOP-QC-007-01修訂號00生效日期編寫人審核人批准人編寫日期月日審核日期月日批准日期月日6.4所有稀释的平板上菌数大于30CFU，则应按稀释最低的平均菌数乘以稀释倍数计算。所有稀释（包括液体样品原液）平均均无菌生长，则以小于1乘以最低稀释倍计算。所有稀释的平板菌数均在30CFU300CFU 之间，其中一部分小于 30CFU 或大于 300CFU 时，则以最接近 30CFU 或大于 300CFU 的平均菌 数乘以稀释倍数计算。5. 结果与报告菌数小于 100CFU 时，按“四舍五入原则修约，以整数报告。菌数大于或等于 100CFU 时，第 3 位数字采用“