蛇床子二氧化碳超临界萃取物中有效成分的含量测定

1、蛇床子二氧化碳超临界萃取物中有效成分的含量测定【摘要】目的测定蛇床子超临界二氧化碳2萃取物中蛇床子素和总香豆素的含量。方法采用HPL法和UV法对蛇床子中蛇床子素和总香豆素的含量进展测定。结果蛇床子素在0.2752.20g范围内线性关系良好(r=0.9998)；加样回收率为100.02%，RSD为1.05%。总香豆素在2.2011.00gl-1范围内线性关系良好(r=0.9997)；加样回收率为99.65%，RSD为1.91%。结论该方法准确、灵敏、专属性强，可作为该萃取物的质量控制方法。【关键词】蛇床子萃取物蛇床子素总香豆素高效液相色谱法；紫外-可见分光光度法蛇床子2超临界萃取物为伞形科植物蛇

2、床nidiunnieri(L.)uss.的枯燥成熟果实经2超临界萃取所得到的液体，萃取物中主要含香豆素类及挥发油类成分，其中蛇床子素是香豆素类主要活性成分之一，具有抑制血小板聚集、抗病毒、抗突变、抗变态反响以及抑制血小板聚集等多种药理活性1。最新药理研究2说明蛇床子总香豆素对骨质疏松有明显的防治作用。其有效成分含量上下对其药用成效有重要影响。本实验采用HPL法、UV法测定蛇床子素、总香豆素的含量，对蛇床子2超临界萃取物进展质量控制研究，为该样品的使用提供一个可行的质控方法，同时为抗骨质疏松新药的研究提供实验数据。1仪器与试药岛津L-20A型高效液相色谱仪，紫外检测器；UV-1800P型紫外-可

3、见分光光度计上海美谱达仪器；SB-2200型超声波清洗机(上海必能信超声)。对照品：蛇床子素纯度98%，中国药品生物制品检定所提供，蛇床子2超临界萃取物广州市美晨药业提供；甲醇色谱纯，二次重蒸馏水；0.45微孔滤膜。2方法与结果2.1蛇床子素含量的测定2.1.1色谱条件及系统适用性试验色谱柱为VP-DS柱4.6150,0.5，色谱预柱4.610,0.5；流动相为甲醇-水(7030)；检测波长322n；柱温25；流速1lin-1。精细汲取供试品和对照品溶液各20l，注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定，蛇床子素出峰时间约为8.65in，对照品、样品色谱图见图12。由图12可知，蛇床子素峰到达基

4、线别离，理论塔板数为2500，与其相邻色谱峰的别离度大于2.0。2.1.2对照品溶液的制备精细称取蛇床子素对照品适量置于棕色的容量瓶中，加甲醇配制成0.11gl-1的对照品溶液，冷藏，备用。2.1.3供试品溶液的制备精细称取2超临界萃取物100g，置于100l锥形瓶中，参加甲醇50l，密塞，超声提取30in，放冷，过滤并定容于50l量瓶中，摇匀，经0.45的微孔滤膜，取续滤液作为供试品溶液。2.1.4线性范围精细汲取对照品溶液0，2.5，5，10，15，20l进样，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标，蛇床子素的进样量(X，g)为横坐标，进展线性回归，得蛇床子素回归方程为Y=330

5、1906.3193X+960666.2022，r=0.9998。说明蛇床子素在0.2752.20g范围内具有良好的线性关系。2.1.5精细度实验精细吸劝2.1.2中制备的对照品溶液20l，按“2.1.1色谱条件，重复进样6次，记录蛇床子素峰面积，其RSD为0.89%，说明精细度良好。图1蛇床子素对照品高效液相色谱图图2蛇床子素样品高效液相色谱图2.1.6重复性实验精细称取同一批超临界萃取物5份，按“2.1.3项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1项下方法测定并计算蛇床子素含量，其RSD为1.30。2.1.7回收率实验精细称取含量超临界萃取物5份，分别参加蛇床子素对照品溶液3l，按“2.1.3项

6、下方法制备供试品溶液，按“2.1.1项下方法测定并计算蛇床子素含量，求得蛇床子素的平均回收率为100.02%，RSD为1.05%n=5。2.1.8稳定性实验精细称取超临界萃取物，按“2.1.3项下方法制备供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24h测定蛇床子素，记录相应峰面积，其RSD为1.93，说明供试品溶液在24h内根本保持稳定。2.1.9样品测定按“2.1.3项下方法制备供试品溶液，按“2.1.1项下方法测定，用外标法计算蛇床子素含量为29.97%，RSD=1.93n=32.2总香豆素含量测定2.2.1线性范围精细吸劝2.1.2中制备的蛇床子素对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，

7、1.0l分别置于10l棕色的容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在322n波长处测定吸收度，并以浓度(gl-1)为横坐标，吸收度A为纵坐标，进展线性回归，得线性方程为Y=0.0638X+0.0094，r=0.9997。说明总香豆素在2.2011.00gl-1范围内具有良好的线性关系。2.2.2精细度实验精细量劝2.1.2中制备的蛇床子素对照品溶液6份，置于50l容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按含量测定项下操作，测定吸收度，其RSD为0.97%，说明精细度良好。2.2.3回收率实验精细吸劝2.1.7项下供试品溶液0.3l，置50l容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，在322n波长处测定吸收度，根

8、据标准曲线计算总香豆素的含量，得总香豆素的回收率分别为99.65，RSD为1.91%n=5。2.2.4样品测定精细量劝2.1.9供试品溶液0.3l，置50l容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，照分光光度法3，在322n波长处测定吸收度，根据标准曲线计算总香豆素的含量，样品的含量为38.45%，RSD为2.34%n=3。3讨论曾选用乙腈-水6535、甲醇-水-乙酸85151、甲醇-水8020、甲醇-水7525、甲醇-水7030作为流动相进展样品分析，结果说明，甲醇水7030作为流动相使样品峰形对称、别离度好，同时出峰时间较短，节省了分析时间。在制备供试品时，比拟了用95%乙醇和甲醇提取，测试结果虽

9、根本一致，但由于超临界萃取物中含有较多的脂溶性成分，用甲醇提取时发现有局部脂溶性成分浮在液面上不溶解，所以选用甲醇作溶剂进展提取，采用过滤的方法除去一局部脂溶性成分。文献曾报道4先采用柱层析对超临界萃取物进展预处理，除去脂溶性成分，该方法操作比拟繁琐，本实验采用在分析柱前增加预柱以保护分析柱，不断更换预柱的方法，可防止前处理引起较大的误差。从图1超临界样品的色谱图看到，保存时间在8.65in的色谱峰是蛇床子素，样品中蛇床子素的相对面积可到达73以上，同时，笔者对超临界萃取后渣进展了分析，发现渣中蛇床子素含量很低，这说明采用超临界萃取法可以将蛇床子中蛇床子素根本提取完全。由结果说明，本法操作简便，结果准确，重复性好，可作为该提取物的质量控制的方法。【参考文献】1陈艳，张国刚，余仲平.蛇床子的化学成分及药理作用的研究进展J.沈阳药科大学学报，2022，234：256.2鲍君杰，谢