内标法研究甘遂及其炮制品的指纹图谱

1、内标法研究甘遂及其炮制品的指纹图谱【关键词】甘遂高效液相色谱法指纹图谱内标法甘遂为大戟科大戟属植物甘遂EuphrbiakansuiT.N.LiuexT.P.ang的枯燥块根1，主产于陕西、山西等地，本品苦寒有毒，具有泻水逐饮、破积通便之功，常用于水肿、腹水、大小便不利等症2。甘遂炮制后能降低毒性，缓和峻泻作用，因此研究出甘遂炮制前后其化学成分的变化情况，为其炮制机理研究和临床合理应用提供科学根据，同时寻找一种全面质量控制标准显得尤为重要。本试验以胡薄荷酮pulegne作为内标参照物，采用高效液相色谱法，对不同产地甘遂的生品及醋制品进展了指纹图谱研究。1仪器与试药aters515高效液相色谱仪，

2、aters2487双波长紫外检测器，illenniu32数据处理系统；Krasil18(4.6200，5)色谱分析柱大连化学物理研究所。胡薄荷酮对照品纯度98%，批号：1052990，购自AldrihEheialpany,In；乙腈色谱醇，美国Tedia公司；自制重蒸去离子水。生甘遂饮片十批(陕西产编号0l,02,03，04批；山西产编号05,06批；河南产编号07,08批；市场统货09，10批)，醋甘遂饮片陕西产编号l,02,03，04批；山西产编号05,06批；河南产编号07,08批；市场统货09，10批)，炮制品09、10批直接购自市场，其余均按炮制标准化的标准工艺炮制。药材经本院中药鉴

3、定教研室吴启南教授鉴定为大戟科大戟属植物甘遂EuphrbiakansuiT.N.LiuexT.P.ang的块根。甘遂药材分别购自安徽省亳州市药材总公司、无锡山禾集团靖江医药、南京中医药大学百草堂、国医堂门诊部。2方法与结果2.1色谱条件Krasil18(4.6200，5)为色谱柱。以水为流动相A，乙腈为流动相B，进展二元梯度洗脱：013in,5%25%B；1320in,25%55%B；2030in,55%60%B；3045in,60%100%B；4585in,100%B。流速：1.0Lin-1，检测波长：235n，进样量：10L，柱温：30。2.2供试品溶液的制备分别称取甘遂、醋甘遂粉末(过2

4、4目筛)约20g，加体积分数为95%的乙醇100L回流提取，3次，每次2h，滤液浓缩，真空枯燥，所得浸膏用甲醇溶于25L容量瓶中至刻度，生品、醋制品分别参加2.5L、2L浓度为1gL-1的胡薄荷酮作为内标参照物，所得混合液用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。HPL分析前用0.45微孔滤膜过滤。2.3指纹图谱的方法学验证2.3.1稳定性试验取01号甘遂按“2.2项方法制备溶液，分别于0、2、4、8、16、24h依法进展检测，获取指纹图谱。结果说明，各共有峰相对保存时间及相对峰面积RSD均3%。说明24h内供试品溶液的成分稳定。转贴于论文联盟.ll.2.3.2精细度试验取01号甘遂按“2.2项方法制备溶

5、液，依法连续进样5次，对主要色谱峰的相对保存时间及相对峰面积进展比拟，RSD均3%。2.3.3重现性试验取批号为01的样品，按“2.2项方法制备溶液5份，同法检测，以胡薄荷酮为对照，各共有峰相对保存时间及相对峰面积RSD均3%。2.4结果2.4.1甘遂指纹图谱按供试品溶液制备方法，制备4个产地生品、醋制甘遂各10批的样品溶液。按“2.1项下条件测定，记录色谱图并进展分析，结果17个峰是所有样品共有的峰，确定其为指纹峰，生品、醋制甘遂各10批样品的指纹图谱见图1、图2，HPL参照指纹图见图3。2.4.2相似度评价采用国家药典委员会?中药指纹图谱相似度评价系统2022A版?对上述年终批次药材的指纹

6、图谱进展了相似度的分析，以相关系数中位数代表其相似度，得10批生品的相似度分别为：0.982、0.986、0.996、0.995、0.997、0.981、0.989、0.990、0.991、0.981。10批醋制品的相似度分别为：0.991、0.975、0.984、0.990、0.991、0.989、0.991、0.987、0.994、0.986。结果生品及醋制品的相似度均在97%以上。3讨论图110批甘遂生品饮片指纹图谱略Fig.1Fingerprintsf10bathesfEuphriaKansui图210批醋制甘遂饮片指纹图谱略Fig.2Fingerprintsf10bathedEuph

7、riaKansuipressedbyvinegar图3甘遂药材参照指纹图谱略Fig.3FingerprintsfEuphriaKansuifrntrl3.2选择内标物时，比拟了pulegne、AlislA、B，leanli等几种萜类物质，结果发现pulegne既和甘遂各成分能到达较好别离，且与甘遂两者供试液混合后均无化学成分变化。3.3实验结果说明，10个批次的甘遂饮片指纹图谱中主要峰群的整体图貌根本一致，但各成分含量的相比照值有所不同，炮制前后指纹图谱有所变化，各成分含量升降不一，其中炮制后2种成分含量增加约40%左右，1种成分含量减少达70%，但成分的定性尚待进一步研究。3.4本文采用HPL色谱法，初步建立了甘遂及醋甘遂的醇提液指纹图谱分析方法