脑出血微创术后自体骨髓间充质干细胞动员

1、脑出血微创术后自体骨髓间充质干细胞动员对神经功能恢复的影响胡 炜1，杨 枫11九江市第一人民医院神经外科，江西省九江市 332000。Impact of autologous bone marrow mesenchymal stem cell mobilization on neurological function recovery after minimally invasive surgery with cerebral hemorrhage胡炜，男，1971年生，河南省开封市人，汉族，博士，副主任医师，主要从事干细胞培养与移植及神经功能缺损修复方面的研究。 HYPERLINK mail

2、to: 。江西省科技计划项目：20112BBG70079摘要：目的：观察微创术后BMSCs动员对脑出血术后神经功能的影响。方法：脑出血患者35 例随机分为2 组。对照组15例，常规立体定向手术治疗，治疗组 20例，在术后35天行BMSCs动员。各组术前及术后1，3，6个月行NIHSS量表、FIM量表评分，各组术前、术后两周测定外周血CD133+、CD34+细胞数，术后1、6月各组行肝肾功能检查。结果：术后两组NIHSS、FIM分值均显著高于术前(P 0.05)，术后治疗组NIHSS、FIM分值均显著高于对照组(P 0.05)。术后2周，治疗组外周血CD133+、CD34+细胞在单核细胞（Mon

3、onuclear Cells，MNCs）中的比例明显高于对照组(P005)。术后1、6月各组肝肾功能检查指标正常。结论：脑出血微创术后尽早进行BMSCs动员，无不良反应，可促进神经功能恢复，提高患者生活能力和质量。关键词：细胞移植；干细胞动员；脑Summary：Objective: To observe the impact of autologous bone marrow mesenchymal stem cell mobilization on neurological function recovery after minimally invasive surgery with cer

4、ebral hemorrhage.Methods: 35 patients with cerebral hemorrhage divided into two groups randomly. 15 cases in control group progress stereotactic surgery; 20 cases in treated group, begain BMSCs mobilization 3 to 5 days postoperation. Preoperative and 1, 3, 6 months postoperative, NIHSS scale and FIM

5、 scale were performed. Preoperative and 2 weeks postoperative, CD133 +, CD34 + cell count was measured in peripheral blood, 1,6 months postoperative liver and renal function were performed in each group.Results: Postoperative NIHSS, FIM scores were significantly higher than preoperative (P 0.05) in

6、two groups, postoperative NIHSS scores and FIM scores in treated group were significantly higher (P 0.05) than control group. Two weeks postoperation, the proportion of CD133+, CD34 + cells in mononuclear cells in peripheral blood of treated group was significantly higher than control group (P 0.05)

7、. 1,6 months postoperative liver and renal function were normal.Conclusion: As early as possible after minimally invasive surgery of cerebral hemorrhage, BMSCs mobilization can performed without adverse reactions, and can promote the recovery of neurological function, improve the capacity and qualit

8、y of life.Keywords: cell transplantation; stem cell mobilization; brain高血压脑出血为常见病，病残、病死率高，严重威胁人类的健康。降低病死、病残率是学者们致力研究、解决的难题。美国卒中协会自发性脑出血治疗指南（2010年）指出：微创手术能够明显降低脑出血患者死亡率，但神经功能改善无显著性差异。如何进一步改善患者神经功能已经成为临床新的难题。神经科学的发展使人们对干细胞促进神经功能恢复寄予厚望，研究表明：骨髓间充质干细胞（BMSCs）可以在脑中成活并向受损部位迁移，增殖分化为神经细胞，l从而促进神经功能的恢复，不断有BMSCs

9、应用于临床。2 而动员自体BMSCs修复损伤神经的方法，以其无创伤性，不必体外分离、纯化、扩增等特点受到广泛关注。临床有关立体定向术后BMSCs动员治疗脑出血的报道较少。本研究主要针对基底节、丘脑高血压脑出血患者，在脑出血急性期立体定向血肿引流后行BMSCs动员，观察术后BMSCs动员对患者神经功能的影响。1 对象和方法1.1对象：选择本科收治的脑出血患者45例，男33例，女12例；按入院单双日分2组，治疗组25例，男19例，女6例，年龄3965岁，平均52.6210.70岁。血肿量2566ml，平均32.512.32ml。出血至手术时间，824 h 20例，2472 h 5例，平均30.15

10、11.45 h。对照组20例。男14例，女6例，年龄3461岁，平均54.349.35岁。血肿量3258ml，平均33.514.68ml。出血至手术时间：824 h 13例，2472 h 7例，平均27.159.82 h。诊断标准：脑出血的诊断符合全国第4次脑血管病学术会议通过的诊断标准3，并经过颅脑CT检查证实。纳入标准：经颅脑CT检查证实的脑出血患者。生命体征稳定者。入院时格拉斯哥评分（GCS）613分且血肿稳定。出血至手术时间：872 h。对治疗方案知情同意者。1.2 方法：所用患者均接受常规脱水降颅压、营养脑组织、预防肺部感染等药物治疗。对照组：行立体定向血肿腔置管引流手术。 治疗组：

11、在立体定向血肿腔置管引流手术的基础上，术后35天开始自体BMSCs动员。以重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-cSF)和重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-cSF)，2.5ugkg皮下注射，1次3天，交替使用，共7次。应用动员剂前查血常规和凝血功能，若白细胞数20109L，继续使用；若白细胞数20109L，暂停注射，隔日复查后根据情况应用，总注射次数不变。动员后第7、14、21天检测肝肾功能。1.3指标检测及疗效评定：以美国国立卫生院神经功能缺损评分量表(NIHSS)、功能独立性评定量表（FIM）评估患者神经功能恢复情况、生活能力。各组术前及术后1，3，6个月行NIHSS量表、FIM量表评

12、分并等对比分析。采用流式细胞仪测定各组术前及术后两周已知抗体标记的外周血CD133+、CD34+细胞数(即内皮祖细胞，EPCs)，通过检测其在外周血单核细胞(Mononuclear Cells，MNCs)中的比例来判断动员的BMSCs数量，评估干细胞动员效果。术后1、6月各组行生化全套检查。1.4统计学分析：采用SPSS 12.0软件完成统计学处理，数据资料以s表示，组间比较应用t 检验，P 0.05)，具有可比性。表1 两组患者年龄、NIHSS 及 格拉斯哥评分、出血量、手术时间等基线值比较（s）组别n年龄（岁）NIHSSGCS评分出血量（ml）手术时间（h）治疗组2552.6210.701

13、4.563.279.222.7532.512.3230.1511.45对照组2054.349.3513.873.518.823.1533.514.6827.159.82t0.220.581.110.350.28P0.570.34两组NIHSS评分、FIM评分比较两组术后1，3，6个月行NIHSS评分量表评分、功能独立性评定（FIM）等对比分析。见表2。表2 两组患者治疗前后NIHSS评分量表评分比较（s）指标治疗组（n=25）对照组（n=20）术前19.563.2718.873.51e术后1月13.212.5115.653.38a，3月9.731.0412.542.68a，6月7.260.72

14、a，11.871.04a，b注：与术前比较，aP 0.05,；与治疗组比较，bP 0.05, dP 0.05，术前组间比较。两组间手术前的NIHSS评分比较，差异无统计学意义（P 0.05）。各组术后1、3、6月NIHSS评分较术前均降低且差异有统计学意义（P 0.05）；术后1、3、6月治疗组NIHSS评分均低于对照组且差异有统计学意义（P 0.05），而治疗组NIHSS评分差异有统计学意义（P 0.05）。表3 功能独立性评定（FIM）比较（s）指标治疗组（n=25）对照组（n=20）术前33.8211.9331.2110.67术后1月52.1410.8349.3211.703月82.32

15、10.6968.7710.87a，6月93.7511.24a78.6011.37a，b注： aP 0.05, 与术前比较；bP 0.05, 术前组间比较；dP 0.05）。两组术后FIM分值均高于术前，术后1个月FIM分值均显著高于术前(P 0.05)，并且随着时间的延长差异性更为显著；组内比较，术后6个月FIM分值显著高于术后1个月(P 0.05)。治疗组术后1、3、6个月FIM分值显著高于对照组，术后3、6个月时的两组FIM分值差异有统计学意义(P 0.05)。2.3 两组术前及术后两周外周血CD133+、CD34+细胞计数两组术前及术后两周外周血CD133+、CD34+细胞计数情况见表4

16、。表4 各组不同时间点CD133+、CD34+细胞计数（%MNC，s）组别n术前术后2周治疗组250.150.09b2.110.29对照组200.170.060.240.18注： 与对照组比较，aP 0.05。两组患者术前外周血CD133+、CD34+细胞在MNCs中的比例无统计学差异(P0.05)，术后2周时，治疗组外周血CD133+、CD34+细胞在MNCs中的比例明显高于对照组(P0.05)，术后2周时，治疗组外周血CD133+、CD34+细胞在MNCs中的比例明显高于对照组(P 0.05）。各组术后1、3、6月NIHSS评分较术前均降低且差异有统计学意义（P 0.05）；术后1、3、6

17、月治疗组NIHSS评分均低于对照组且差异有统计学意义（P 0.05），而治疗组NIHSS评分差异有统计学意义（P 0.05）。术后1个月两组FIM分值均显著高于术前(P 0.05)，并且随着时间的延长差异性更为显著；组内比较，术后6个月FIM分值显著高于术后1个月(P 0.05)。治疗组术后1、3、6个月FIM分值显著高于对照组，术后3、6个月时的两组FIM分值差异有统计学意义(P 0.05)。说明随时间延长两组患者的生活能力均有逐渐的恢复，而治疗组患者的生活能力恢复明显优于对照组。干细胞移植治疗脑出血的最佳时机尚未明确，有学者认为在出血后急性期脑组织局部存在兴奋性神经递质、自由基以及炎性因子

18、等，这些因子有促进细胞增殖和趋化的作用，但是同时对移植物的存活不利9,10,11但是，如选择在发病数月再行干细胞移植或动员，则错过了神经组织早期修复时机。实验尽早进行立体定性引流手术并选择术后3-5天开始进行干细胞动员，即脑内血肿引流完毕后尽早开始干细胞动员，目的是尽可能避免了血红蛋白、凝血酶等神经毒性介质对动员的干细胞的影响，同时让干细胞尽早参与到神经组织修复过程中。实验中所有患者均完成治疗过程，并获得6个月随访。干细胞动员期间有3例患者感乏力及低热，发生率12，停用rhG-CSFrhGM-CSF后恢复正常。12例患者出现轻度凝血功能异常，主要为D-二聚体轻度升高，考虑和脑出血后病人处于高凝

19、状态并伴有纤溶功能亢进有关12。其余动员患者未见异常，且术后1、6月生化全套检查各项生化指标正常。表明rhG-CSFrhGM-CSF进行干细胞动员安全性可靠。综上所述，微创术后自体BMSCs动员的开展可望在明显降低患者死亡率的基础上，进一步有效改善高血压脑出血患者神经功能，提高患者生活能力和质量，值得进一步临床推广。参考文献1 步星耀, 张峰, 张圣旭, 等. 缺血性脑损伤的骨髓间质干细胞移植治疗研究. 河南医学研究, 2007,16(4): 302-306. 2 朱建新, 李忠民, 肖太武, 等. 自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑出血32例:是否安全、可行及有效. 中国组织工程研究与临床康复,

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