《微生物与免疫学》医学免疫学实验-第一次实验

1、微生物与免疫学医学免疫学实验-第一次实验微生物与免疫学医学免疫学实验-第一次实验BEA Confidential. | 2 实 验 室 规 则1 . 进入实验室后穿上白大衣，离室时脱下反叠带走。 只带必要的用具，并放在远离操作的位置。2 . 保持安静，遵守纪律，不得在实验室做与实验无 关的事情。3 . 注意安全，若出现问题，应立即报告带课教师。 保护环境，废物要放在指定地点。4 . 注意节约，爱护设备和仪器。5 . 实验完毕，应清理桌面，洗手后方可离开实验室。 值日同学负责湿性打扫卫生，并关好水电门窗。BEA Confidential. | 4 BEA Confidential. | 3 【实

2、验内容】 1. 直接玻片凝集反应（ABO血型、细菌鉴定） 2.直接试管凝集反应BEA Confidential. | 5 BEA Confidential. | 4 将颗粒性Ag如细菌、RBC或表面结合可溶性Ag的乳胶颗粒等与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集现象。 1.直接凝集试验 玻片法（定性）：细菌鉴定、血型鉴定等 试管法（半定量）：肥达试验等 2.间接凝集试验 3.间接凝集抑制试验 4.协同凝集试验BEA Confidential. | 6 BEA Confidential. | 5BEA Confidential. | 7BEA Confidential. | 6BEA C

3、onfidential. | 8BEA Confidential. | 7【目的】 掌握凝集试验的操作方法与结果判定。BEA Confidential. | 9【目的】BEA Confidential. | 8一玻片凝集试验BEA Confidential. | 10一玻片凝集试BEA Confidential. | 9【原理】 玻片凝集试验是在玻片上将天然颗粒性抗原（如红细胞、细菌）与相应抗体混合，在适当条件下，如两者对应便发生特异性结合，形成肉眼可见的凝集物，为阳性；如两者不对应，便无凝集物出现，为阴性。BEA Confidential. | 11【原理】BEA Confidential.

4、 | 10（一）玻片凝集反应鉴定血型BEA Confidential. | 12BEA Confidential. | 11血型：指红细胞膜上特异抗原的类型。 凝集原：红细胞膜上的一些特异蛋白质、糖蛋白、 糖脂，它们在凝集反应中起抗原的作用。 凝集素：能与红细胞膜上的凝集原起反应的特异 抗体。ABO血型：是根据红细胞膜上是否存在凝集原A与 凝集原B而将血液分为4种血型。不同血型的人血清 中含有不同的凝集素，但不含有对抗自身红细胞凝 集原的凝集素。BEA Confidential. | 13血型：指红细BEA Confidential. | 12BEA Confidential. | 14BEA

5、 Confidential. | 13【材料】1.抗体：抗A单克隆抗体、抗B单克隆抗体2.器材：三棱针、玻片、棉签、牙签3.消毒剂：2.5%碘酒、75%酒精BEA Confidential. | 15【材料】BEA Confidential. | 14【方法】1. 做标记 取干净的玻片一张，用蜡笔划分为二，并在玻片的 上角标明“抗A”及“抗B”。2.采指血 用碘酒、酒精消毒被检者的无名指末端，用三棱针 刺血12滴于上述玻片，并用棉签止血。3.加抗体 取抗A、抗B单克隆抗体于相应区域的血标本中，然 后用牙签两端分别搅拌均匀。4.观结果 将玻片平持手中，前后左右转动使之混匀，置室温 大约10分钟，

6、观察有无凝集现象。抗A 抗B BEA Confidential. | 16【方法】抗ABEA Confidential. | 15抗A抗B结果A型血B型血AB型血O型血 代表阳性结果； 代表阴性结果；【结果】BEA Confidential. | 17抗A抗B结果BEA Confidential. | 16【注意事项】 1.载玻片必须清洁，做好记号。 2.用牙签两端分别搅拌。BEA Confidential. | 18【注意事项】BEA Confidential. | 17（二）玻片凝集反应鉴定细菌BEA Confidential. | 19BEA Confidential. | 18【材料】

7、1.试剂：大肠杆菌诊断血清， 大肠杆菌、变形杆菌24小时琼脂培养物， 生理盐水。2.器材：记号笔，载玻片等。BEA Confidential. | 20【材料】BEA Confidential. | 19【方法】.取清洁玻片一张，用蜡笔划为三格，并注明号码。 无菌操作下，用接种环于 第三格加12滴生理盐 水 ，第一、二格内加 大肠杆菌诊断血清12滴。123BEA Confidential. | 21【方法】12BEA Confidential. | 20.无菌操作下，用接种环取大肠杆菌培养物少许， 混于第三格中，再混于第一格中，将细菌与盐水 或血清混合均匀使呈乳状液（取菌量不可过多）， 使悬液

8、呈轻度乳浊即可。123BEA Confidential. | 22.无菌操作BEA Confidential. | 21.同法取变形杆菌培养物少许，于第二格内混匀。123BEA Confidential. | 23.同法取变BEA Confidential. | 22.轻轻摇动玻片，经12分钟后肉眼观察，出现乳 白色凝集块者，即为阳性反应；仍为乳浊液者， 即为阴性反应。123BEA Confidential. | 24.轻轻摇动BEA Confidential. | 23移液器的使用BEA Confidential. | 25BEA Confidential. | 24BEA Confiden

9、tial. | 26BEA Confidential. | 25【方法】1.选择适当的移液器: 不同型号的微量移液器，各有其吸取体积范围。2.设定体积： 设定体积时，由低旋转至高值，须先超越所欲设定值 至少三分之一转后，再反转至设定值；由高旋转至低 值，则直接转至设定值即可。 勿超过最低或最高的使用范围。BEA Confidential. | 27【方法】BEA Confidential. | 263.吸取溶液： 套上微量移液器头，将按钮压至第一档，尽可能保持 微量移液器垂直，将微量移液器头尖端浸入溶液，再 缓慢释放按钮 。释放按钮不可太快，以免溶液冲入吸 管柱内而腐蚀活塞。4.释放溶液： 将

10、微量移液器头 与容器壁接触，慢慢压下按钮至第一 档，停一两秒再压至第二档，把溶液完全压出。BEA Confidential. | 283.吸取溶液BEA Confidential. | 27A. 保持微量移液器垂直，将按钮压至第一档；B.微量移液器头尖端浸入溶液，缓慢释放按钮；C.保持微量移液器垂直，将微量移液器头与容器壁接触，慢慢压下按钮至第一档；D. 压至第二档把溶液完全释放出；E.释放按钮回原状。BEA Confidential. | 29A. 保持微BEA Confidential. | 28【注意事项】1 ） 勿将微量移液器本体浸入溶液中。2） 吸取黏度高之试液，先将微量移液器头尖端

11、以刀片 或剪刀将出口切大，并先行预润后再吸取。3） 吸取酸液或具腐蚀性溶液后，将微量移液器拆解开， 各部位零件以蒸馏水冲洗干净，擦干后再正确组合 回复原状。4） 微量移液器的任何部份切勿用火烧烤，亦不可吸取 温度高于70的溶液，避免蒸气侵入腐蚀活塞。BEA Confidential. | 30【注意事项】BEA Confidential. | 295）套有微量移液器头的微量移液器，无论微量移液器 头中是否有溶液，均不可平放，需直立架好。6）P5000 必须使用过滤头，过滤头潮湿即需更换。7）若不小心使溶液进入吸管柱内时，应予以拆解，将 活塞组件、吸管柱、O-ring、铁氟龙垫等各部位以 清水冲

12、洗干净后，再以酒精擦拭，擦干后再正确组 合回复原状。8）定期自行以天平检查准确度，若有任何问题请送厂 维修。BEA Confidential. | 315）套有微量BEA Confidential. | 30二试管凝集试验BEA Confidential. | 32二试管凝集试BEA Confidential. | 31【原理】 用已知的颗粒性抗原悬液与经连续倍比稀释的待检血清混合，在适当条件下反应，观察有无凝集现象对血清抗体的存在做出判断；并结合凝集程度与血清稀释度判定血清抗体的效价，此法属于半定量试验。BEA Confidential. | 33【原理】BEA Confidential.

13、| 32【材料】1.诊断菌液：伤寒沙门菌菌液2.待检血清：伤寒沙门菌免疫血清3.生理盐水4.U型反应板、移液器、水浴箱等BEA Confidential. | 34【材料】BEA Confidential. | 33【方法】1.编号： 取一块U型反应板，选8个连续的孔，依次编号。2.加生理盐水： 用移液器吸取生理盐水，第一孔加0.9ml，其余每 孔各加0.5ml；3.加血清： 用移液器吸取伤寒免疫血清0.1ml，加入1号孔，并 吹吸3次，使血清与生理盐水充分混合。BEA Confidential. | 35【方法】BEA Confidential. | 344.倍比稀释： 从1号孔中吸取0.5

14、ml注入2号孔并混匀，以此类推 直至7号孔，再从7号孔中吸取0.5ml弃去。5.加抗原： 移液器换吸头，吸取伤寒沙门氏菌菌液，从生理盐 水孔开始，每孔各加入0.5ml伤寒菌液。6.孵育： 摇匀，置于37水浴箱中18-24h后观察结果。BEA Confidential. | 364.倍比稀释BEA Confidential. | 351：201：401：801：1601：3201：6401：12800.9ml0.1ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5mlBEA Confidentia

15、l. | 371：201：BEA Confidential. | 36【结果观察】.观察之前切勿摇动，以免凝集块分散。.先观察对照孔，此孔应无凝集现象，孔内液体仍 成混浊状态。但如放置时间较长，细菌堆于孔底 成小圆点状，为阴性反应。BEA Confidential. | 38【结果观察】BEA Confidential. | 37.试验孔应自第孔观察起，如有凝集时则于孔底 有不同大小的圆片状边缘不整齐的凝集物，上液 则澄清透明或不同程度混浊。 “” 管内上液完全澄清，完全沉于孔底； “” 孔内上液不完全澄清，稍浑浊， 凝集物大部分沉于孔底； “” 上液体较浑浊，孔底仍有明显凝集； “” 孔内液体混浊，仅少量凝集块沉于孔底； “” 孔内液体和对照孔同样混浊，无凝集块。BEA Confidential. | 39.试验孔应BEA Confidential. | 384.记录观察的结果并判定凝集效价，通常以能产生 明显凝集（）的血清最大稀释倍数作为该血 清的凝集效价。 如血清的最低稀释度（即第1管120）仍无凝集， 应报该血清效价低于 120 。 如血清的最高稀释度（即第7管11280）仍显完 全凝集现象，应报该血清效价高于11280。BEA Confidential