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文档简介

1、克隆表达与引物设计动物医学院专题讨论Clone,Expression,and Prime Design克隆表达的路线目的DNA片段和载体的连接目的DNA片段和载体的制备连接产物的转化重组子筛选 目的蛋白的诱导表达目的蛋白的纯化表达的目的载体的选择引物的设计是关键什么是克隆？目的基因的克隆及其原核表达技术路线RNA ExtractionVectorTVectorTPCR ProductAApET -HEHEHEVRT-PCR转化DE3HE蛋白ITPG诱导大肠杆菌1. 明确实验的目的，根据实验目的设计引物。2. 选择表达载体，根据载体的酶切位点，在引物的5端加入酶切位点。3. 分析所要扩增的基因片

2、段，对其保守性，抗原优势位点等进行分析。4. 利用软件，参照引物设计的原则，进行引物的设计。实验目的与引物设计PCR引物设计的目的： 找到一对合适的核苷酸片段，使其能够有效的扩增模板DNA。引物设计目的和PCR扩增引物常用PCR扩增的体系（25L）和条件程序：95 变性5min；94 变性30s，52 退火30s，72延伸40s，30 个循环；72延伸10min ddH2O17L10buffer2.5LdNTP1L上游引物1L下游引物1L模板2LTaq 酶0.5L3355Sense primerAntisense primer引物设计的原则1. 引物应用核酸系列保守区内设计并具有特异性。2. 产物不能形成二级结构；避开产物的二级结构区。自由能G58.6l kJ/mol。3. 引物长度一般在1530碱基之间。4. G+C含量在40%60%之间。5. 碱基要随机分布。6. 引物自身不能有连续4个碱基的互补；引物之间不能有连续4个碱基的互补。 7

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