地震后危重多发伤伴混合感染病例分析

1、题名页地震后危重多发发伤伴混合感感染病例分析析张山，李思，王王文武微生物与感染编编辑部，上海海2000332基金项目：国家家高新技术研研究发展计划划（863）（20099ZZ06）第一作者：张山山，详细联系系方式（电话话、E-maail）通信作者：王文文武，详细联联系方式（电电话、E-mmail）必须提供必须提供地震后危重多发发伤伴混合感感染病例分析析拟20字以内拟20字以内张山姓与单名之间不空格，李思，王王文武姓与单名之间不空格微生物与感染编编辑部, 上海 2000332摘要：以非结构式(勿用“目的、方法、结果、结论”4要素形式)撰写，且应能独立反映文章的内容。为证实乙乙型肝炎病毒毒（hep

2、aatitiss B virus，HBV）3022nnt-17887nt缺失失突变体编码码蛋白TSX（源于DNAA聚合酶读码码框架，T代表TP区，S为部分缺失失的spacerr区，X为截短的X蛋白）具有抗干扰素（IFFN-）作用用并确定其功功能区域，首首先以聚合酶酶链反应（PCR）扩增获得TSSX全长长及片段TSS（含TP区及部分分缺失的spacerr区），并克克隆于pcDDNA3.11/HisCC载体。重组组载体以FuuGENE66转染Huh77肝细胞，488 h后裂解细细胞，通过融融合表达的多多肽表位抗体体，以蛋白质质印迹法（WWesterrn bloot）证实目的蛋蛋白可在Huuh7肝细

3、胞胞中表达。重组载载体及空载体体pcDNAA3.1/HHisC分别与IFNN-反应报告告载体p6-16CATT按分子数5:1、10:1、15:1、30:1 共转染Huhh7肝细胞，转染染后48 h给予终浓浓度为1000 IU/mll 的IFN-2aa刺激，作用用24 h后裂解细胞，酶联免免疫吸附试验验（ELISSA）检测胞内氯氯霉素乙酰基基转移酶（CAT）含量。结果显示，与与空白载体相相比，随着TTSX及及TS重组表表达载体转染染量的递增，Huh7胞内CAT值逐渐降低（n6，P0.05)。本研究证实 HBV 3022nt-1787nt缺失突变体编码的TSX蛋白可抑制Huh7细胞对IFN-的反应

4、性，其活性与其N端以非结构式(勿用“目的、方法、结果、结论”4要素形式)撰写，且应能独立反映文章的内容。关键词：38个，之间用分号隔开。海分枝枝杆菌；转座座子突变；斑斑马鱼；肉芽芽肿38个，之间用分号隔开。请使用页尾(点击“视图请使用页尾(点击“视图”，进入“页眉和页尾”，点击“页面设置”，选择“首页不同”，点击“确定”后再填写)。如有基金项目，请写上；没有，则不用写。通信作者将全权负责该文的一切。基金项目：国家家高新技术研研究发展计划划（863）（20099ZZ06）通信作者：王文文武Corresppondinng auttor. WANGG Wen-Wu, E-maail: HYPERLI

5、NK mailto: Cases aanalyssis off seveere muultiplle traauma wwith mmixed infecctionss amonng earrthquaake viictimssZHANG SShan, LI Si, WANGG Wen-Wu姓名用正体，其中，姓：用大写字母；名：首字母用大写，后面用小写，双名之间用-连接。姓名用正体，其中，姓：用大写字母；名：首字母用大写，后面用小写，双名之间用-连接。Journall of MMicrobbes annd Inffectioon, Shangghai 2000332, Chinna单位用斜体。

6、单位用斜体。Abstracct：以非结构式(勿用“目的、方法、结果、结论”4要素形式)撰写，且应能独立反映文章的内容。篇幅为500个实词左右。 The ppurposse of the ccurrennt stuudy iss to inveestigaate thhe antti-IFNN- effeccts annd to deterrmine the ffunctiional regioon of the nnovel proteein TSSX eencodeed by the 33022ntt-17877nt deeletioon muttant oof heppatitiis B

7、vvirus (HBV). Regionns codding ffor TSSX (in frrame wwith tthe oppeningg readding fframe of DNNA pollymeraase, iin whiich T standds forr termminal proteein, SS forr parttiallyy deleeted sspacerr regiion, aand X for trunccated X prootein) and TTS (N-teerminaal of TSX conttaininng terrminall prottein

8、aand paartiallly deeletedd spaccer reegion) weree ampllifiedd by mmeans of PCCR andd clonned innto thhe pcDDNA3.11/HisCC vecttor seeparattely. The rrecombbinantt vecttor waas traansfeccted iinto HHuh7 hhepatoocytess indiividuaally bby FuGGENE6 transsfectiion reeagentt, andd the expreessionn of tthe

9、fuusion proteein waas verrifiedd by WWesterrn bloot anaalysiss. Thee recoombinaant orr emptty vecctor wwas coo-trannsfectted too Huh77 hepaatocyttes wiith IFFN- reesponsse repporterr plassmid pp6-16CCAT att the molarr ratiio of 5:1, 10:1, 15:11 and 30:1, cellls werre treeated with IFN-22a 48 hours p

10、post-transsfectiion. AAfter 24 hours of stiimulattion, tthe ceells wwere llysed and tthe inntraceellulaar CATT valuue wass calcculateed by ELISAA assay. The resullts deemonsttratedd thatt, as compaared tto thee emptty vecctor, the iintraccellullar CAAT vallues wwere ggraduaally rreduceed as parallle

11、ledd withh an increeasingg amouunt off TSXX or TS rrecombbinantt (n6，p0.005), whille no signiificannt diffferennces wwere oobservved beetweenn themm (n6，p0.005). It wwas cooncludded thhat thhe novvel prroteinn TSXX enccoded by thhe 30222nt-11787ntt deleetion mutannt of HBV ssuppreessed the rresponns

12、e off Huh77 hepaatocyttes too IFN-，and tthe N- termminal regioon wass a fuunctioonal ddomainn for its aanti-以非结构式(勿用“目的、方法、结果、结论”4要素形式)撰写，且应能独立反映文章的内容。篇幅为500个实词左右。 Key worrds：英文关键词尽可能用全称而不用缩写。Mycobbacterrium mmarinuum; Trranspooson; Zebraafish; Grannulomaa英文关键词尽可能用全称而不用缩写。长久以来，分枝枝杆菌的细胞胞壁被认为是是其致病性中中的

13、重要部分分，他不仅可可以帮助结核核菌抵抗多种种恶劣的理化化及宿主体内内环境，有利利于结核菌抵抵抗大多数常常用的抗生素素，而且已证证实多种细胞胞壁成分与其其毒力密切相相关1,22正文中文献角码用方括号及上标，文献序号和内容应与章末文献一致。此外，多多种的抗结核核药物，如异异烟肼和乙胺胺丁醇，作用用的靶位点位位于细胞壁的的代谢通路3。因此研究究分枝杆菌细细胞壁中与毒毒力相关的成成分有可能为为开发新的抗抗结核药提供供新靶点，为为发展新的预预防结核病的的疫苗提供新新线索。正文中文献角码用方括号及上标，文献序号和内容应与章末文献一致。本研究利用噬菌菌体MycooMarT77转座子系统统建立了海分分枝杆菌

14、的随随机突变库，以以菌落形态及及索状结构的的改变为筛选选标志获得了了3个mas同源基基因的插入突突变株，并探探讨了其致病病性。流行性乙型脑炎炎（epideemic eencephhalitiis typpe B）是由乙型脑脑炎病毒引起起的以脑实质质炎症为主要要病变的中枢枢神经系统急急性传染病，又称日本乙乙型脑炎11。临床上上多以急性起起病、高热、意识识障碍、抽搐搐、呼吸衰竭竭、脑膜刺激征征为主要表现现。为提高临临床医师对该该疾病的认识识，我们对本本院20052008年收收治住院的330例乙型脑脑炎患者流行行病学及临床床特征进行回回顾性分析。1 临床材料料1.1 病例例患者，男性，778岁，农民

15、民。间断性咳咳嗽、咳痰44年，加重1个个月，于20008年10月13日入住甘肃省省兰州市肺科科医院。痰标标本编号：8866。患者者自述4年前开始每每遇天气转凉凉即出现咳嗽嗽，咳白色黏黏液性痰，并并伴气短，多多次于外院就诊，诊诊断为“慢性支气管管炎，肺心病病”。给予抗炎利利痰对症治疗疗后，症状缓缓解。否认服用抗抗结核药。入入院前1个月上述症症状逐渐加重重，对症治疗疗，疗效欠佳佳。入院时查体：腋腋下体温366 ， 心率80次/min，血压压 155/95 mmHg。神神志清，精神神欠佳，体形形正常，扶入入病房。咽部部无充血，扁扁桃体无肿大大，双侧呼吸吸动度减弱，叩叩诊过清音，双双肺呼吸音粗粗，肺底

16、可闻闻及细湿罗音音。腹平软，无无压痛反跳痛痛，肝脾不大大。血常规检检查：白细胞胞2.91109/L，淋巴细细胞绝对值00.81009/L，红细胞胞6.551012/L,血红蛋蛋白含量2008 g/L，平均红细胞胞血红蛋白含含量31.77 pg。生化检检查：谷丙转转氨酶57 u/L，谷草转转氨酶41 u/L，谷草转转氨酶/谷丙转氨酶酶0.7，载脂脂蛋白A 0.944 g/L，载脂蛋蛋白B 1.188 g/L，乳酸脱氢酶酶260 u/L，腺苷脱胺酶酶31 u/L，转铁蛋白6.08 g/L，2-微球蛋白3.3 mg/L。胸胸水生化显示示总蛋白 52 g/L，腺苷脱胺酶酶64 g/L，转铁蛋白1.26

17、 g/L。胸水涂涂片见大量散散在的淋巴细细胞。胸水中中甲胎蛋白00.83 ng/mll、癌胚抗原原0.58 ng/mll、肿瘤相关关因子18.78 u/ml。入院后常规规痰检示痰涂涂片抗酸杆菌菌阴性。胸部部计算机断层层扫描（coomputeed tommograpphy，CT）显示：双肺肺间质纹理增增重，肺内散散布片絮状高高密度灶，伴伴双侧胸腔积积液，纵隔可见钙化的的淋巴结，左左心室增大。入院诊断为肺心心病。肺部有有炎症，给予左氧氟氟沙星0.44 g/d，静脉点滴滴1周；头孢他啶啶 2 g/d，静脉点滴滴1 d；诊断性抗抗痨治疗（对对氨基水杨酸酸异烟肼片 0.3 g，每天1次；利福平0.445

18、 g，每天1次；乙胺丁醇0.75 g，每天1次）和对症支支持治疗，115 d后症状好转出出院。1.2 材料料和方法1.2.1 主要试剂 Middllebroook 7H99（8X071131）、Midddlebroook MGGIT-9660液体培养养基购于美国国BD公司，小小牛血清组分分v（A80200）和过氧化化氢酶（C88070）购购于瑞士罗氏氏制药公司，基基因组提取试试剂盒（N99021）购购于东盛生物物有限公司，DNA STAR 聚合酶和胶回收试剂盒购于TaKaRa，Taq DNA聚合酶为美国Fermentas公司产品，鸡蛋为正大鲜鸡蛋。1.2.2 显微镜镜检检 取患者晨起漱口口后咳

19、出深部部的痰做检查。抗酸酸染色：将痰涂片，加热热固定，碱性性石炭酸复红红初染，3%盐酸酒精脱脱色，亚甲基基蓝复染，干干燥后光学显显微镜下镜检检 ADDIN EN.CITE 卢润生2000412299112291122917卢润生, 蒋绍双 李定越 郑德福 邓大志 陈秋 扬均结核核菌-L型培养基基的改进四川川医学Scyxx四川医学SScyx四川川医学Sccyx07结核菌-l型培培养基改进20041004-050151-11144/RRCjfdd8。革革兰染色：将将痰涂片，自然然干燥，结晶晶紫初染，碘碘液媒染，995%乙醇脱脱色，稀释复复红复染，干干燥后光学显显微镜下镜检检 ADDIN EN.CI

20、TE 卢润生2000412299112291122917卢润生, 蒋绍双 李定越 郑德福 邓大志 陈秋 扬均结核菌-L型培养基基的改进四川川医学Scyxx四川医学SScyx四川川医学Sccyx07结核菌-l型培培养基改进20041004-050151-11144/RRCjfdd8。1.2.3 痰标本的细细菌培养 取患者晨起漱口口后咳出深部部的痰做标本，经消消化、离心、弃上清液后后加入适量磷磷酸缓冲液（phospphate-buffeered ssalinee，PBS），重悬、沉淀，取3000 l分别接种于于Middllebroook MGIIT 7H99液体、含蔗糖糖的7H9（7H9-LL）半

21、固体、不含蔗糖的的Middllebroook 7H9（7H9-BB）半固体、含氯氯化钠的922-3TB（92-3 TB-L）液体和不含氯化钠的的92-3TTB（92-3 TB-B）液体培养基基 ADDIN EN.CITE 中国防痨协协会.1999612899112891128917中国防痨协协会. 结核病诊诊断细菌学检检验规程中国防痨杂杂志,中国防防痨杂志,:28-31118 199969及罗氏氏（Lownnsteinn-Jensson，L-J）培养养基中，377 静置培养。 1.2.4 细菌回复实实验 将该菌株株培养至呈煎蛋样生生长的L型细菌，接种于罗氏氏培养基或77H9-B半半固体培养基基

22、，观察细菌生生长状况及形形态改变。1.2.5 扫描电镜观观察 刮取培养养的菌落置于1.5 ml的Eppenndorf管管中，加入33%磷酸戊二二醛固定过夜夜，在兰州大大学医学实验验中心电镜室室处理并扫描电镜观观察。2 结果痰标本经培养，在92-3 TB-L液液体培养基出出现浑浊，表明有细菌生生长。在7H9-LL半固体含蔗蔗糖培养基中中有油煎蛋样样的菌落出现现。抗酸染色色可见抗酸染染色阴性、大大小不等、圆圆形或短杆状状的细菌。在在罗氏培养基基和7H9-B中传代培培养2代后，可见见有少量细菌菌回复为抗酸酸染色弱阳性性杆状菌（图图1）。革兰染染色可见紫红红色杆状菌（图图2D）。扫描描电子显微镜下可见

23、传代培培养后菌落呈呈团块状生长长，菌体呈杆杆状。PCRR产物扩增166S rRNA DNA的测序结果与与支气管戈登登菌DSM 432477相似性1000%（图2），可见从从该患者痰液液中分离培养养出支气管戈戈登菌的L型细菌。药药敏实验显示示，该细菌对利利福平、利福福喷丁、阿莫莫西林、左氧氧氟沙星和克克拉霉素敏感感，对异烟肼肼、吡嗪酰胺胺、乙胺丁醇醇、对氨基水水杨酸、甲硝硝唑和呋喃唑唑酮耐药（图图3、表1）。3 讨论在结核分枝杆菌菌中，ppss位点（包括括fadD226至fadD228的全部基基因，见图33）45kb的大大片段与PDDIM的合成成密切相关。3.1 流行行病学特征 目前全世界乙型型

24、脑炎每年发发病约50 000例，其中约1/33死亡，存活者20%30%有神经经麻痹和心理理改变等严重重后遗症。乙乙型脑炎主要要经蚊虫叮咬咬及吸血传播播，传播媒介介是生活在水水稻田、沼泽泽地里的雌性性蚊虫（国内内的主要传播播媒介为三带带喙库蚊），故故乙型脑炎一一般夏、秋季季多发，集中中在79月份，占占全年病例的的90%以上3。3.2 临床床特点 乙型脑炎临床表表现主要有急急性起病，中中高热，头痛痛，呕吐，意意识障碍，肌肌力、肌张力力异常，脑膜刺激征征、病理征阳阳性。重型或极重重型可并发肺肺炎、呼吸循循环衰竭、上上消化道出血血而死亡。3.3 治疗疗和预防 对于乙型脑炎目目前尚无特效效抗病毒药物物，

25、对症及营营养支持治疗疗是决定抢救救成功的关键键。高热可予予以物理降温温，如温水或或酒精擦浴。惊惊厥或抽搐时时应及时吸痰痰，保持呼吸吸道通畅；并并进行脱水，降降低颅内压力力。一旦发生生呼吸衰竭，应应及时给予呼呼吸兴奋剂，必必要时应用呼呼吸机进行人人工辅助呼吸吸。本研究中10例例患者未进行行过预防接种种，15例既往是是否接种乙型型脑炎疫苗情情况不详，提提示人群对接接种乙型脑炎炎疫苗意识不不强，故疾病病控制部门应在流流行季节来临临前加强宣传传教育，提高高预防接种率率。参考文献请将每条参考文献的首页以电子文稿形式(做1个文档，放在附件中)发送给编辑部。参考文献格式如下请将每条参考文献的首页以电子文稿形

26、式(做1个文档，放在附件中)发送给编辑部。参考文献格式如下。连续出版物中的文献：序号文献主要责任者.文献题名J. 连续出版物名，年份,卷（期）：起页-止页专著中的文献：序号文献主要责任者.文献题名M.专著主要责任者.专著题名.版本.出版地：出版者,出版年份：起页-止页1请用方括号。 Daaff M, Ettiennee G. TThe caapsulee of MMycobaacteriium tuubercuulosiss and its iimpliccationns forr pathhogeniicity J. Tubeer Lunng Diss, 19999, 799(3): 153

27、-169.请用方括号。2 Sttamm LLM英文作者书写如下姓：需全写，首字母大写，其后为小写；名：需缩写，用大写字母表示。, Brrown EEJ. Myycobaccteriuum marrinum: the generralizaation and sspeciaalizattion oof a ppathoggenic mycobbacterrium J. Miicrobees Inffect, 2004, 6(155): 1418-1428英文作者书写如下姓：需全写，首字母大写，其后为小写；名：需缩写，用大写字母表示。3 罗云云安全科学学理论体系的的发展及趋势势探讨M见：白春春华，

28、何学秋秋，吴宗之21世纪安全全科学与技术术的发展趋势势北京：科科学出版社，2000：1-5.4 Gllickmaan MS, Cox JS, JJacobss WR JJr. A novell mycoolic aacid ccycloppropanne synnthetaase iss requuired for ccordinng, peersisttence, and virullence of Myycobaccteriuum tubbercullosis J. MMol Ceell, 22000, 5(4): 717-727.5 Jaacobs WR Jrr, Barrlettaa

29、RG, Udanii R, CChan JJ, Kallkut GG, Sossne G, Kiesser T, Sarkkis GJJ, Hattfull GF, BBloom BR.请列出所有作者。 Rapiid asssessmeent off drugg suscceptibbilitiies off Mycoobacteerium tuberrculossis byy meanns of lucifferasee repoorter phagees J. SSciencce, 19993, 2260(51109)请勿遗漏期号。: 819-822.请列出所有作者。请勿遗漏期号。所有显微

30、放大图，要在图片右下角直接插入标尺所有显微放大图，要在图片右下角直接插入标尺（scale bar），不要标放大倍数。Coloniaal morrpholoogy off the wild22type straiin, whille B iis thee coloonial morphhologyy of tthe trranspooson iinsertting mmutantt 02C10 ( Imaage taaken wwith aa Canoon EOFF100).图1 海分枝杆杆菌在固体培培养基上的菌菌落形态Fig. 1 The ccoloniial moorphollogy oof

31、 M. marinnum on soolid mmediumm文章中的图文章中的图，除标题应有中英文对照外，其余（包括图中的内容、对图的注解等）均用英文表示。BABAA、B等应标在图片的左上角。应在图中直接插入标尺（scale bar），不要标放大倍数。A: fliGG muttant; B: Wllid type straiin.图2 空肠弯弯曲菌fliiG突变株株小鼠空肠定定植能力改变变Fig.2 Changge of colonnizatiion abbilityy on mmouse jejunnum inn C. jeejuni fliG mutanntGrowth of M. marinum in J774A.1 cell cultures1.Growth of