论临床医学检验中的流式细胞技术

1、论临床医学检验中的流式细胞技术论临床医学检验中的流式细胞技术【摘要】本文详细的阐述了临床医学检验中的流式细胞技术,并详尽的分析流式细胞技术的分析系统和分析方法。【关键词】流式细胞技术临床医学检验【中图分类号】R782.4【文献标识码】A【文章编号】1674-0742(2022)04()-0186-011流式细胞技术概述流式细胞技术又可称为流式细胞分析(flytetry),主要是依靠流式细胞仪来测量悬浮细胞,并通过激光、计算机、电子、流体力学和多种生物科学技术来分析细胞的特性与功能。在临床医学检验中流式细胞技术被应用于细胞生物检验、血液检验、肿瘤检验等医学检验。2流式细胞技术的分析系统流式细胞技

2、术的分析系统主要由3大局部组成,其中包括液流系统、电子系统和光学系统。2.1光学系统光学系统(ptialsyste)主要由激光和搜集光学的元件组成,包括各种激光器和多组透镜。各种不同功率的激光器可以提供单波长、高强度及稳定性高的不同波长激光,结合透镜的作用使激光束整形和聚焦,以此来检验细胞的特性。2.2液流系统液流系统(fluidissyste)主要是将被测的细胞通过液体流传递至流动室,经过液流聚焦形成单细胞流,并使其通过检测区,完成检验。不同的仪器流动室也不尽一样,一般供单细胞流过的流动室都具有良好的光学特性,流速也较慢,细胞受照时间也较长,可搜集的细胞信号光通量较大,配上搜集透镜可获得很高

3、的检测灵敏度和精细度。2.3电子系统流式细胞电子系统的主要作用是将各种光信号成比例的转换为电信号,并进展数字化处理后传入电子计算机。在光信号转换过程中光电倍增管具有较高的灵敏度,常用于搜集细胞和微球与激光束互相作用产生的较微弱的侧向散射光或荧光信号。3流式细胞技术的分析方法3.1流式细胞免疫表型分析方法采用荧光素标记的单克隆抗体作为分子探针,流式细胞仪检测细胞上的特异性抗原分子,这种方法被称为流式细胞免疫表型分析。流式免疫表型分析可以简便、快速的分析出细胞的种类、亚类、功能等特性,通过间接免疫荧光染色、直接免疫荧光染色、多色免疫荧光染色等方法进展检验,流式细胞仪可同时鉴别单个细胞上的多种抗原,

4、而且在极短的时间内能分析大量的细胞,使流式细胞技术成为了当前较为先进的细胞分析技术,在临床应用上也较为广泛,例如:血液淋巴细胞免疫表型、白血病细胞免疫表型、血小板免疫表型等。3.2血液淋巴细胞免疫表型分析方法血液淋巴细胞的免疫表型分析方法有2种,首先是双色荧光分析血液淋巴细胞免疫表型,其主要是通过2种荧光色素标记的2种单克隆抗体与全血中的淋巴细胞膜特异性抗原结合,在溶解红细胞后,洗涤去红细胞碎片和未结合的抗体,固定细胞,在流式细胞仪上计数各种淋巴细胞亚群的百分率;其次是多色荧光分析血液淋巴细胞免疫表型,其主要采用3种荧光素标记的单克隆抗体同时进展免疫荧光染色,以D45/SS设门分析血液中淋巴细

5、胞免疫表型,比双色分析更为准确地鉴别淋巴细胞亚群,防止细胞碎片,溶血剂不能破坏的红细胞。3.3流式细胞内或细胞核内抗原分析流式细胞内或细胞核内抗原分析主要是以多色流式细胞免疫表型分析为主,其主要应用于白血病和淋巴瘤分型、微量残留白血病或淋巴瘤细胞的检测,白血病与淋巴瘤细胞内或核内抗原标志物一般与细胞膜外表抗原同时检测,通过多色免疫荧光染色后进展多参数分析。细胞内或核内抗原与外表抗原检测主要区别在于对细胞膜和核膜进展穿透处理,使细胞膜和核膜上出现可以让荧光素标记的单克隆抗体自由通过的微孔,但又不能使细胞的构造完全破坏,并保持靶抗原的抗原性不变和细胞的光散特点不变。详细步骤可以概括为:膜外表抗原免

6、疫荧光染色、溶解红细胞、固定与透膜处理、细胞内或核内免疫荧光染色、多色流式细胞分析。4临床医学检验中流式细胞技术的应用4.1基于流式细胞技术的血小板分析论文联盟.Ll.流式细胞技术的血小板分析是对单个血小板或血小板亚群进展分析,其根本原理是用不同的荧光色素标记的单克隆体或能与所测成分发生特异性结合并能发射荧光的物质与全血或别离的血小板反响,去除未反响的单克隆抗体或荧光物质后,在流式细胞仪上特异检测500010000个以上血小板的光散射与荧光信号,获娶储存、分析和统计数据,并根据光散射和荧光的强弱,特异地分析血小板,计算出阳性血小板的百分率或所测成分的含量,例如:每个血小板上各种糖蛋白的分子数。4.2细菌耐药异质性细菌异质性是抗生素试验体外敏感、体内耐药的重要原因,流式细胞技术能通过不同的细菌亚群对抗生素的敏感性不同,直观地表现细菌的异质性,从而有助于诊断不同细菌亚群引起的混合感染,以便提供更好的治疗方案,结合流式细胞技术可以更直观的反映出金黄色葡萄球菌在PAE阶段细菌群体的异质性,利用RFLP与流式细胞技术结合对病原菌进展DNA指纹图谱分析是快速开展新菌和诊断病原异质性的另一个新途径。综上所述,临床医学流式细胞技术具有速度快,精度高,准确性好等特点,其在血液学、肿瘤学、细胞生物学、细胞遗传学等临床医学检验和根底医学中将会得到更大的开展和进步