生物产品分析实验课件

1、生物产品分析实验 实验一 荧光法测定药物中核黄素含量生物产品分析实验 实验一 一 实验目的了解荧光法测定药物中VB2的原理；学会荧光仪的使用。一 实验目的了解荧光法测定药物中VB2的原理；二 实验原理核黄素（Vit B2）在pH49的条件下，用450nm波长的光激发，可发出波长为520nm的荧光。在核黄素的含量为0.110g范围内，荧光的强度，与核黄素浓度成正比，硫代硫酸钠可消除核黄素的荧光性。二 实验原理核黄素（Vit B2）在pH49的条件下，三 试剂、材料和仪器1试剂与材料1.0g/ml标准核黄素溶液： 精称5mg标准核黄素, 用蒸馏水定容至100ml, 再从中取2ml定容至100ml。

2、三 试剂、材料和仪器1试剂与材料含核黄素0.011g/ml样品液（VB2）： 精称2mg左右的 VB2药片，用蒸馏水 定容至100ml, 从中取5ml再定容至100ml。 5g/ml荧光红溶液：称500g荧光红，定容至100ml。荧光消光剂：0.2g硫代硫酸钠, 加水溶解至10ml。0.1mol/L HCI：量取0.94ml浓盐酸, 用水稀释至100ml。精密pH5.0试纸。含核黄素0.011g/ml样品液（VB2）：2仪器（1）RF-540荧光光度计：1台。（2）1ml微量进样器：1个 （枪头若干）； （3）容量瓶：100ml6个； 10ml4个；（4）感量1/10000g电子天平：1台；2

3、仪器四 操作步骤1扫描激发波长EX在样品室内放入荧光红溶液，首先调整荧光发射波长到520nm，然后对激发波长进行扫描，谱图峰值处即为荧光激发波长EX。2扫描发射波长EM将EX固定，再对发射波长EM进行扫描，谱图峰值处即为荧光发射波长EM。四 操作步骤1扫描激发波长EX3 标准核黄素荧光强度的测定 吸取样品液10ml于25ml比色管中，加入标准核黄素溶液1ml，用0.1mol/L盐酸调至pH5.0，测定荧光强度A。4样品荧光强度的测定 吸取10ml样品液于2支25ml比色管中，分别加入1ml蒸馏水和1ml消光剂溶液。用0.1mol/L盐酸调至pH5.0，于荧光光度计中测定各自的荧光强度。加水者为

4、B，加消光剂者为C。3 标准核黄素荧光强度的测定五计算五计算六注意事项1.开机后，扳动氙灯开关到“ON”处数秒后，待灯亮后松手；2.核黄素对光敏感，样品配制应再暗处进行；3.核黄素可被低亚硫酸钠还原成无荧光型，但摇动后很快就被空气氧化成有荧光物质，所以要立即测定。六注意事项1.开机后，扳动氙灯开关到“ON”处数秒后，待灯七思考题1荧光法测定VB2含量的基本原理。2荧光法测定VB2时应注意哪些问题？七思考题1荧光法测定VB2含量的基本原理。实验二 味精成品纯度的测定生物产品分析实验课件一.实验目的1. 掌握旋光法测定味精成品纯度的测定方法；2. 了解旋光法测定味精成品纯度的基本原理。一.实验目的

5、1. 掌握旋光法测定味精成品纯度的测定方法；二原理食用味精为L谷氨酸单钠盐。L谷氨酸分子中具有不对称碳原子，故有旋光性。在水溶液中比旋光度为aD20=+12.1在2N盐酸溶液中为+32。L谷氨酸在盐酸溶液中的比旋光度在一定盐酸浓度范围内随酸度增加而增加。在测定味精纯度时加入盐酸使其浓度为2N，此时谷氨酸钠以谷氨酸的形式存在。二原理食用味精为L谷氨酸单钠盐。L谷氨酸分子中具有不对在一定的温度下测定其比旋光度，并与该温度下纯L谷氨酸的比旋光度比较，即可求得味精中谷氨酸钠的百分含量，即味精纯度。结晶味精其纯度可达99%以上。在一定的温度下测定其比旋光度，并与该温度下纯L谷氨酸的比旋三仪器与试剂WZZ

6、-2B自动旋光仪；99%红梅味素、80%味精、次品味素；6N HCl；1dm或2dm长旋光管。三仪器与试剂WZZ-2B自动旋光仪；四测定步骤准确称取味精样品10.00g，加2025ml蒸馏水,搅拌下加入6N盐酸32ml,使其全部溶解，冷却至室温，用蒸馏水定容至100ml。旋光计零点校正：有三种校正法，一种为蒸馏水调零法，即将蒸馏水装入旋光管于旋光仪中调零；一种为空白溶液校正法，即取32毫升6N HCl置入100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，于旋光仪中调零；另一种为空气法，即不用溶液和旋光管，空着仪器调零。四测定步骤准确称取味精样品10.00g，加2025ml蒸用少量样品溶液洗涤旋光管三次，

7、然后注满一管，将玻璃盖片从管的侧面水平地推进盖好，适当拧紧螺丝盖，用干布擦干盖片。打开旋光仪光源，稳定后校正零点。放入装好样品的旋光管，记录旋光仪的读数，并记录测定时的温度。用少量样品溶液洗涤旋光管三次，然后注满一管，将玻璃盖片从管的五计算当温度为t时旋光物质的比旋光度为：式中：a测得旋光度； L旋光管长度（dm）； C100ml样品溶液中含旋光物质的克数。五计算当温度为t时旋光物质的比旋光度为：因测定时溶液中是L谷氨酸，故需将味精样品的重量W换算成L谷氨酸的重量C：式中：147.13L谷氨酸的分子量；18713味精的分子量(含1分子结晶水的L谷氨酸单钠盐)。 因测定时溶液中是L谷氨酸，故需将

8、味精样品的重量W换算成L纯L谷氨酸20时比旋光度为+32，校正为t时比旋光度为：纯L谷氨酸20时比旋光度为+32，校正为t时比旋光度式中：a测得的旋光度； t测量时温度（）； L旋光管长度（dm）； W味精样品重量（g）。 生物产品分析实验课件六思考题1配制样品时为何要加32ml 6N NCl？2旋光法测定样品的纯度，零点校正的方法有几种？怎样校正？六思考题1配制样品时为何要加32ml 6N NCl？实验三 电位滴定法测定总酸测定 (设计性)生物产品分析实验课件一. 实验目的学会用酸度计测pH值和总酸度；任选两种方法或两种样品做实验；进一步熟悉滴定操作；实验结束后，从实验中总结出3个问题进行讨

9、论。 一. 实验目的学会用酸度计测pH值和总酸度； 二. 实验原理采用酸碱中和容量分析法。pH9.0为中和反应时酚酞指示剂发生颜色突变时的pH值。电位滴定法控制pH终点，消除了目视比色法对有色试样的感官误差，有操作简便、结果准确等优点。 二. 实验原理采用酸碱中和容量分析法。pH9.0为中和反应 三. 实验仪器与试剂pHS-3型酸度计；磁力搅拌器；0.1N标准NaOH溶液；20、50ml移液管；100ml烧杯；除CO2蒸馏水的制备：将蒸馏水煮沸15min后，冷却至室温。样品随意在市场采购。 三. 实验仪器与试剂pHS-3型酸度计；四.酸度计的校正与定位四.酸度计的校正与定位把选择开关钮调到pH

10、档；调节温度补偿旋钮，使旋钮白线对准溶液温度值；把斜率调节旋钮顺时针旋到底；把清洗过的电极插入pH=6.86的缓冲溶液中；调解定位调节旋钮，使仪器显示读数与该缓冲溶液当时温度下的pH值相一致；用蒸馏水清洗电极，再插入pH9.18的标准缓冲溶液中，调节斜率旋钮使仪器显示读数与该缓冲溶液中当时温度下的pH值一致；重复以上操作2-3次。把选择开关钮调到pH档； 测定乳酸菌饮料总酸度生物产品分析实验课件一.测定步骤吸取20ml乳酸菌饮料于100ml烧杯中，加入40ml蒸馏水（除CO2），放入一搅拌指，置于磁力搅拌器上，将玻璃电极和甘汞电极插入试样中，开动搅拌器，按下酸度计读数开关，用0.1N标准NaO

11、H滴定试样，随时观察试样pH值变化，到接近pH9.0时应每加半滴停一停，直至pH9.0时为滴定终点。记录消耗0.1 N标准 NaOH的毫升数。一.测定步骤吸取20ml乳酸菌饮料于100ml烧杯中，加入4二. 计算式中： T100ml样品所需0.1 N NaOH溶液的毫升数；V滴定试样时消耗0.1 N 标准NaOH的毫升数。注：酸度（QB）：2580T二. 计算 啤酒总酸度的测定 生物产品分析实验课件一.测定步骤吸取50ml除气啤酒于100ml烧杯中，放入一搅拌指，置于磁力搅拌器上，将玻璃电极和甘汞电极插入试样中，开动搅拌器，按下酸度计读数开关，用0.1N标准NaOH滴定试样，随时观察试样pH值

12、变化，到接近pH9.0时应每加半滴停一停，直至pH9.0时为滴定终点。记录消耗0.1 N标准 NaOH的毫升数。一.测定步骤吸取50ml除气啤酒于100ml烧杯中，放入一搅二.计算式中：N、V标准NaOH溶液的当量浓度与消耗体积（ml）;50吸取酒样体积（ml）;100换算成100ml酒样中酸量。二.计算 白酒中总酸含量的测定生物产品分析实验课件一.测定步骤吸取50ml白酒于250ml三角瓶中，加100ml蒸馏水（除CO2），2滴0.5%酚酞指示剂，用0.1N标准NaOH滴定试样至微红色，记录消耗0.1 N标准 NaOH的毫升数。一.测定步骤吸取50ml白酒于250ml三角瓶中，加100m二.

13、计算式中：N、V标准NaOH溶液的当量浓度与消耗体积（ml）;50吸取酒样体积（ml）;100换算成100ml酒样中酸量；0.06006乙酸的毫克当量（g）.二.计算实验四 紫外分光光度法测定 样品中蛋白质含量 生物产品分析实验课件一 实验目的掌握样品中蛋白质提取的基本方法；学会紫外分光光度计的使用。 一 实验目的掌握样品中蛋白质提取的基本方法；二. 实验原理 蛋白质及其降解产物（胨、肽和氨基酸）的芳 R 香环残基NHCHCO在紫外区内对一定波长的光具有选择吸收作用。在此波长（280nm）下，光吸收程度与蛋白质浓度（38mg/ml）成线性关系,故可做定量测定。核苷酸分子中的碱基含有共轭双键，在

14、紫外光区（260nm）也有吸收，可通过校正加以清除。本法操作简便迅速，故常用于生化领域研究工作中。二. 实验原理 三. 仪器与试剂1UV755B-分光光度计；三. 仪器与试剂1UV755B-分光光度计；20.1mol/L pH7.0磷酸缓冲液0.1M磷酸氢二钠溶液：称取Na2HPO4.12H2O 8.995g定容至250ml。0.1M磷酸二氢钠溶液：称取NaH2PO4.2H2O 3.90g定容至250ml。量取0.1M磷酸氢二钠溶液244ml和0.1M磷酸二氢钠溶液156ml混合均匀。3打浆机；4高速离心机。20.1mol/L pH7.0磷酸缓冲液四.UV755B-分光光度计的使用开机，仪器显

15、示F755B，开盖, 预热520min；调整测定波长；将参比试样(空白)装入比色皿，放入比色槽后，调零；调零时开盖，按“MODE”键，使仪器显示“T 0.0”, 按“0%”键；然后闭盖，按“100%”键，使仪器显示“T100”， 反复调节数次，使之稳定；放入待测样，按“MODE”键，仪器显示“A”，读数记录；再按“MODE”键，仪器显示“T”后，开盖；测定完毕后关机。 四.UV755B-分光光度计的使用开机，仪器显示F755B，五. 操作步骤1样品处理准确称取约10g左右的大豆，洗净，用蒸馏水浸泡，加0.1mol/L pH7.0磷酸缓冲液至100ml打浆，过滤，然后用0.1mol/L pH7.

16、0磷酸缓冲液将浆液定容至250ml。4000r/min离心15min，上清液即为蛋白质提取液。五. 操作步骤1样品处理2样品中蛋白质含量的测定取适量的样品提取液，根据蛋白质浓度，用0.1mol/L pH7.0磷酸缓冲液适当稀释（取1ml提取液定容至50ml）后，用紫外分光光度计，10mm厚的石英比色皿分别在280nm和260nm波长下读取吸光值，以0.1mol/L pH7.0磷酸缓冲液为空白调零。2样品中蛋白质含量的测定六结果计算式中：A280蛋白质溶液在280nm处的吸光值：A260蛋白质溶液在260nm处的吸光值；1.45和0.74校正值；n稀释倍数；W样品重（mg）。六结果计算七.思考题

17、1.石英比色皿与玻璃比色皿的区别？2.使用高速离心机应注意的事项。七.思考题1.石英比色皿与玻璃比色皿的区别？实验五 气相色谱法分离分析酒中杂醇油生物产品分析实验课件一. 实验目的. 了解气相色谱仪及色谱工作站的使用；. 了解气相色谱仪的基本分析原理。一. 实验目的. 了解气相色谱仪及色谱工作站的使用；二. 实验原理气相色谱分析是采用气体作为流动相的一种层析方法。由于流动相为气体，物质在气相中传递速度快，气态样品中各组分与固定相相互作用（吸附或分配）次数多，因而混合物通过气相色谱可以得到良好的分离，再通过适当的检测仪器进行鉴定，即可给出定性或定量的结果。二. 实验原理气相色谱分析是采用气体作为

18、流动相的一种层析方法酒除了乙醇和水外，还含有数百种微量香味成分。酒中的香味成分以醇类、酯类、酸类为主。酒中的醇类除乙醇外，还含有甲醇、正丙醇、异丁醇、正丁醇、2-戊醇、异戊醇、正戊醇、正己醇等。用常规的化学分析方法测出的是这类物质的总量，如杂醇油是以异丁醇和异戊醇计，这样不足以反映各种成分的本来面目。利用气相色谱仪可以准确迅速地检测出酒中所含的各种醇类物质。酒除了乙醇和水外，还含有数百种微量香味成分。酒中的香味成分以三仪器GC122气相色谱仪，配有氢火焰离子化检测器。微量注射器10ul。三仪器GC122气相色谱仪，配有氢火焰离子化检测器。微量注四色谱操作条件色谱柱：FFAP毛细管柱。柱温：40

19、恒温6min后，以4/min程序升温至220，继续恒温16min；汽化室温度：230；检测器温度：240。载气：高纯氮，柱头压：20psi；柱流量：1.36ml/min；尾吹气：39ml/min；空气：400ml/min；氢气：30ml/min；进样量：0.4ul。四色谱操作条件色谱柱：FFAP毛细管柱。五定性方法标准物保留时间的确定 分别取甲醇、正丙醇、正丁醇、异丁醇、异戊醇各0.2ul（试剂都用色谱纯试剂）注入色谱仪，调节衰减控制器，使信号在量程范围内，分别记录各物质的保留时间。样品中各组分保留时间的测定 将样品溶液注入色谱仪，测定各色谱峰的保留时间，与标准物保留时间对照初步定性。五定性方

20、法标准物保留时间的确定六思考题什么叫程序升温？程序升温的目的？杂醇油的概念。六思考题什么叫程序升温？程序升温的目的？实验六 高效液相色谱法分离分析葡萄酒中的有机酸生物产品分析实验课件一. 实验目的了解高效液相色谱仪分离分析有机酸的基本原理；学会恒流洗脱的基本方法。一. 实验目的了解高效液相色谱仪分离分析有机酸的基本原理；二. 实验原理利用混合物中各组分的化学、物理性质差异，使各组分以不同程度分布在两相中。当流动相流过含有样品的固定相时，各组分以不同速度移动，从而达到互相分离的目的。二. 实验原理利用混合物中各组分的化学、物理性质差异，使各三. 试剂色谱纯甲醇，超声波除气；0.01 mol/L磷酸二氢钾；20%磷酸溶液；pH值为4.9的0.01mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液（用20%磷酸调节），经孔径为0.45m滤膜过滤，超声波除气；三. 试剂色谱纯甲醇，超声波除气；酒石酸、苹果酸、柠檬酸、琥珀酸，分析纯，经孔径为0.45m滤膜过滤，超声波除气。葡萄酒样品经0.