仙茅提取物体外抗氧化活性研究

1、仙茅提取物体外抗氧化活性研究【关键词】仙茅；抗氧化才能；去除自由基；复原力仙茅为仙茅科仙茅属植物仙茅(uruligrhiidesGaertn.)的枯燥根茎，其性温，味苦，有小毒，用于肾阳缺乏、阳痿遗精、腰脊冷痛、尿频尿急、寒虚崩漏、带下、疮疡肿痛、痨虚内伤、筋骨疼痛等临床病症1。仙茅中含有皂苷类、酚类、木脂素类、黄酮类、桉烷类及甜味蛋白和多糖类成分2。现代药理研究发现，仙茅具有适应原样作用、抗炎、抗惊厥3、增强免疫功能4，5、抗衰老6、延缓生殖系统老化等生物活性2，7，8。为更好地开发利用仙茅药用资源，本实验运用体外抗氧化活性评价方法，对仙茅不同提取物抗氧化才能进展评价，为仙茅的进一步开发研究

2、提供实验根据。1材料与方法1.1材料与试剂仙茅购自贵州省贵阳市万东桥药材市常二苯代苦味基肼自由基DPPH购自百灵威公司；抗坏血酸V、无水乙醇、H22、水杨酸、硫酸亚铁、铁氰化钾、三氯化铁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、三氟乙酸均为国产分析纯试剂，乙醇为食用级。1.2仪器与设备1.3样品的制备仙茅枯燥根0.9kg，加80%乙醇回流提取6次，每次2h，提取液减压浓缩至无醇味，水浴上蒸干，得仙茅总醇提浸膏184g。取浸膏20g，用适量水混悬，分别用两倍体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取6次，各萃取物经真空枯燥得石油醚萃取物3g，氯仿萃取物2g，乙酸乙酯萃取物2g，正丁醇萃取物4g，避光贮存，备用。醇

3、提仙茅残渣挥去乙醇后，加蒸馏水回流提取6次，每次2h，合并水提液浓缩后，用乙醇沉淀多糖乙醇终浓度不小于80%，沉淀依次用95%乙醇、丙酮洗涤，真空枯燥得仙茅粗多糖186g。1.4抗氧化活性测定1.4.1去除羟基自由基H9采用Fentn反响，利用H22与Fe2+混合产生H，在该体系中参加水杨酸捕捉H并产生有色物质，该物质在510n处有最大吸收。取醇提局部萃取物各50g，用无水乙醇定容至25l；取粗多糖50g，用蒸馏水定容至25l，配制成质量浓度为2g/l，再以该质量浓度溶液配制成所需浓度。参加一定浓度样品4l，9l/LFeS40.5l，9l/L水杨酸0.5l，8.8l/LH220.5l，混匀，于

4、37水浴中加热30in，510n测定样品吸光度Ai。将体系中的样品改为参加4l蒸馏水，测定得空白对照吸光度A，向体系中参加0.5l蒸馏水代替8.8l/LH22，测定得样品本底吸光度Aj，其中样品吸光度Ai每个质量浓度做3个平行，取平均值，以V作阳性对照，按下式计算去除率：K(%)=A-(Ai-Aj)/A100。1.4.2去除DPPH101.4.3Fe3+复原力实验测定11取2.5l不同质量浓度的样品溶液，参加0.2l/L，pH6.6磷酸缓冲液2.5l及1%铁氰化钾2.5l，50水浴反响20in后急速冷却，参加10%三氟乙酸溶液2.5l混匀，0.2水相滤膜过滤，取上清液5l，参加0.02%三氯化

5、铁溶液5l，10in后立即于700n处测定吸光值。吸光值越大那么复原才能越大，以V作为对照。1.5统计学处理采用SPSS17.0统计分析软件，进展回归、Prbit分析，选取可信度为95%，计算I50。转贴于论文联盟.ll.2结果2.1对H的去除作用各提取物对H都表现出一定程度的去除才能图1，并在试验浓度范围内呈明显量效关系，但去除才能均弱于V。去除才能大小依次为：乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物粗多糖总醇提物，石油醚和氯仿萃取物由于样品本身干扰大，用该方法测定误差较大，未对其进展比拟分析。从去除才能大小可以看出醇提局部抗氧化活性物质主要分布在乙酸乙酯和正丁醇萃取相中。考虑到样品本底吸收的影响，本试验

6、样品最高浓度为1g/l，未测定更高浓度样品的去除作用。仙茅提取物对H的半去除率浓度I50大小顺序为：V乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物粗多糖总醇提物，I50值分别为0.062、0.247、0.358、0.796和0.871g/l。I50值越小说明去除才能越强，乙酸乙酯萃取物相对较好，但不如V的去除效果。2.2对DPPH的去除作用从图2可看出，各提取局部对DPPH都表现出较强的去除才能，在试验浓度范围内呈量效关系。其中乙酸乙酯萃取物对DPPH的去除才能最好，当质量浓度为0.05g/l时去除率到达80%，只略差于V。去除才能大小依次为：V乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物总醇提物氯仿萃取物石油醚萃取物粗多糖。可

7、以看出在醇提局部，除乙酸乙酯提取物外，随着萃取用溶剂极性的增大，所得萃取物对DPPH的去除才能越好；水提粗多糖去除才能相对最差，浓度为0.7g/l时对DPPH的去除才能仅为80%。仙茅提取物对DPPH的I50大小顺序为：V乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物总醇提物氯仿萃取物石油醚萃取物粗多糖，I50值分别为0.007、0.026、0.055、0.062、0.071、0.122和0.275g/l。乙酸乙酯萃取物局部I50远远小于其他各样品(P0.01)，但是不如V效果显著。图2去除DPPH作用2.3Fe3+复原力的测定复原力的测定，可检验化合物是否为良好的电子供给体，它所提供的电子可以使Fe3+复原为F

8、e2+，从而使体系溶液颜色改变，即反映出体系中氧化复原状态的改变。吸光值越大，复原力越强，抗氧化效果越佳。由图3可看出，在试验浓度范围内，各萃取物的复原力与其质量浓度成明显量效关系，各局部复原力大小依次为V乙酸乙酯萃取物正丁醇萃取物总醇提物氯仿萃取物石油醚萃取物粗多糖。从复原力测定的试验结果可知，在醇提局部，除乙酸乙酯提取物外，随着萃取用溶剂极性的增大，各萃取物对Fe3+复原力增强。粗多糖的复原力比醇溶性物质差。3讨论在实验所选的3种体外抗氧化活性评价方法中，乙酸乙酯萃取物对H和DPPH的去除以及对Fe3+复原力作用均显示出很好的效果，其次是正丁醇提取物，这可能与其化学成分主要是酚类及黄酮类大极性物质有关，据报道仙茅中的酚性成分具有抗氧化作用12，13。仙茅含有一定量的挥发油14，在本实验中，相对其他组分石油醚提取物抗氧化作用不明显，说明仙茅中挥发油成分抗氧化活性较弱。自由