临床免疫学检验-课件-第15章-免疫细胞标志和功能检测技术

1、第十五章 免疫细胞标志和功能检测技术第十五章 免疫细胞标志和功能检测技术免疫细胞免疫细胞:凡是参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞的统称为免疫细胞 。淋巴细胞T细胞、B细胞、NK细胞抗原提呈细胞单核巨噬细胞、树突状细胞等其他细胞中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞和肥大细胞等免疫细胞免疫细胞:凡是参与免疫应答或与免疫应答有关的细胞的统3免疫细胞的分离及检测检测：各类免疫细胞及其亚群的数量和功能测定方法：体外法为主目的：判断机体免疫状态意义：探讨疾病的发病机制、发展、预后、疗效免疫细胞的分离 是指将各种参与免疫反应的细胞从 血液或组织中分离出来 3免疫细胞的分离及检测检测：各类免疫细胞及其亚群的

2、数量和功细胞分离基本原理细胞密度不同细胞生物学特性不同细胞表面分化抗原不同第一节 免疫细胞的分离 外周血单个核细胞分离 淋巴细胞的分离 T、B细胞和T细胞亚群的分离细胞分离基本原理细胞密度不同第一节 免疫细胞的分离 外周血一、外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMC）包括淋巴细胞和单核细胞（monocyte）。 分离原理：根据比重不同进行分离 一、外周血单个核细胞分离 外周血单个核细胞（peripherPBMC血小板多核白细胞红细胞PBMC血小板多核白细胞红细胞对分离介质的要求：对细胞无毒；基本等渗；与血浆和分离细

3、胞不相溶；有特定的比重。不同动物的PBMC比重有差异：小鼠：1.085大鼠：1.087人：1.0751.090常用Ficoll分离液(1.0770.001)分离人的PMBC分离介质是关键对分离介质的要求：分离介质是关键 Ficoll分离液份6%聚蔗糖蒸馏水溶液份34%泛影葡胺生理盐水溶液(聚蔗糖-泛影葡胺）Ficoll外周血纯度达95%上层：血浆中层：分离液底层：红细胞和多核细胞白膜层 Ficoll分离液份6%聚蔗糖蒸馏水溶液份34%泛影葡二 、淋巴细胞分离贴壁粘附法 吸附柱过滤法 Percoll 分离液法 二 、淋巴细胞分离贴壁粘附法 利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将已制备的单个核细胞悬液

4、倾于玻璃或塑料平皿或扁平培养瓶，37温箱静置1 h，单核细胞将贴附于平皿壁上，而未贴壁的细胞几乎全为纯淋巴细胞。橡皮棒刮下贴壁的细胞，可得纯单核细胞。1.贴壁黏附法PBMC37 1 hour上清液单核单核淋巴细胞注意：B细胞也可粘附 利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将已制备的单个核细胞悬 利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将单个核细胞悬液注入装有玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex G10的层析柱中，凡有黏附能力的细胞绝大部分被吸附而黏滞在柱层中，从柱上洗脱下来的细胞主要是淋巴细胞。2. 吸附柱过滤法PBMC洗 脱 洗脱液淋巴细胞巨噬细胞或单核细胞 DC B细胞 T细胞=红细胞细胞的黏附能力：

5、利用单核细胞具有贴壁生长的特点，将单个核细胞悬液注入3. Percoll 分离液连续密度梯度离心法 是一种经聚乙烯吡咯烷酮(PVP)处理的硅胶颗粒，对细胞无毒性。高速离心后可形成连续的密度梯度，不同密度的细胞将悬浮于各自不同的密度区带，从而将密度不等的细胞分离纯化。 死细胞 血小板单核细胞淋巴细胞粒细胞红细胞操作流程长，繁琐，实际应用受限3. Percoll 分离液连续密度梯度离心法 是一种经聚乙红细胞低渗裂解法：在PBMC中加入蒸馏水，轻摇片刻使红细胞裂解，随后加入等量的1.8%氯化钠溶液恢复等渗。血小板胎牛血清梯度离心，利用PBMC与血小板比重的差异，离心后PBMC沉淀、血小板悬浮。其他成

6、分去除红细胞其他成分去除淋巴细胞T细胞：CD2、CD3、CD4、CD8、CD25等B细胞：CD19、CD20、CD21、CD22、CD23等分离方法阳性选择法：纯化所需的细胞阴性选择法：去除不要的细胞，留下所需细胞三、T、B细胞和T细胞亚群的分离淋巴细胞T细胞：CD2、CD3、CD4、CD8、CD25等BE花环沉淀法尼龙毛纤维分离法磁性微球分离法 荧光激活细胞分离仪分离法亲和板分离法三、T、B细胞和T细胞亚群的分离E花环沉淀法尼龙毛纤维分离法亲和板分离法磁性微球分离法 荧光激活细胞分离仪分离法E花环沉淀法三、T、B细胞和T细胞亚群的分离E花环沉淀法1. E花环沉淀法方法：淋巴细胞+SRBC悬液

7、加入分层液 T细胞形成E花环而沉于管底悬液 中为B细胞。成熟T细胞具有CD2分子能结合绵羊红细胞缺点：分离效率低，易受多种因素影响1. E花环沉淀法成熟T细胞具有CD2分子能结合绵羊红细胞缺方法：将所需的细胞对应的单克隆 抗体包被于小管内加入淋 巴细胞形成Ag-Ab复合物 洗去不反应的物质。2. 尼龙毛分离法(吸附能力差异)方法：淋巴细胞通过聚酰胺纤维管洗脱下来的是T细胞3. 亲合板结合分离法分离亚群方法：将所需的细胞对应的单克隆2. 尼龙毛分离法(吸附能力差4. 磁性微球分离法磁性微球：微球核心一般为金属小颗粒（Fe2O3, Fe3O4)，其表面包裹有高分子材料（聚苯乙烯，聚氯乙烯等），表面

8、有活性基团（氨基、羧基和羟基），可结合生物大分子物质（抗原，抗体，核酸等）。免疫磁珠：微球表面包被有免疫物质称免疫磁珠，有免疫配基和磁响应的性质。4. 磁性微球分离法磁性微球：微球核心一般为金属小颗粒（Fe正筛选细胞时，抗体可引起细胞凋亡或活化。细胞-抗体-磁珠复合物免疫磁珠法分离细胞原理正筛选细胞时，抗体可引起细胞凋亡或活化。细胞-抗体-磁珠复合临床免疫学检验-课件-第15章-免疫细胞标志和功能检测技术评价免疫磁珠分离细胞的重要指标：纯度和得率取决于：磁珠所连接单抗的特异性和磁珠大小比较项目大磁珠小磁珠对细胞的影响对细胞造成机械压力，影响其生物学活性，不利于分离后培养对细胞温和，不影响分离细

9、胞的后续培养对流式细胞仪的影响阻塞喷嘴，影响散射光可直接上流式细胞仪检测，不影响散射光分离条件要求技术简单，分离可在试管中完成需要很强的磁场来分离细胞收率得率高得率不高纯度纯度低纯度高分离时间分离速度快分离速度慢分离成本成本低需要很强的磁场，需要一次性的分离柱，不能在普通试管进行评价免疫磁珠分离细胞的重要指标：纯度和得率取决于：磁珠所连经典的流式细胞分析仪5 .荧光激活细胞分选仪分离法（FACS） 优点：可对单个细胞进行快速、准确和客观的检测，对特定群体加以分选缺点：不适用于细胞表面分子不清的细胞分离，试剂和 仪器昂贵经典的流式细胞分析仪5 .荧光激活细胞分选仪分离法（FACS什么是流式细胞仪

10、?流式细胞仪（flow cytometer）：是多学科交叉融合的产物，是集光学、化学、材料学、流体力学、自动化控制、光电测量、细胞生物学、生物化学、免疫学和计算机图像分析等技术于一体的现代化新型分析仪器。作为一种先进的微粒（细胞）定性和定量分析仪器。流式细胞仪特点：速度快，每秒可测量数万个微粒；精度高；准确性好；多参数测量，可以同时对同一个微粒作物理、化学和生物特性的多参数测量。什么是流式细胞仪?流式细胞仪（flow cytometer）经典流式细胞仪的结构（一）基本结构 经典分选型的流式细胞仪的结构组成液流系统：液流驱动系统、流动室、鞘液流和标本流 光学系统：光源、光束形成器（流动室前光学系

11、统）、流动室后光学系统 信号检测及光电转换系统：光电转换器、放大器和信号处理电路 分选系统：电荷加载系统、超声压电晶体、液流断点监控系统、偏转电极、细胞收集系统和气溶胶控制系统计算机分析系统 经典流式细胞仪的结构（一）基本结构 经典流式细胞仪的结构经典流式细胞仪的结构细胞悬液形成液流柱流动室振动液流断裂成液滴空白液滴含细胞的液滴弃去偏转落入收集器压电晶体产生机械振动不充电充电流式细胞仪分选原理细胞悬液形成液流柱流动室振动液流断裂成液滴空白液滴含细胞的液流式细胞术分选的原理流式细胞术分选的原理早期细胞物理属性细胞生物属性分辨率和灵敏度不高现在（根据细胞表面标志）免疫磁珠流式细胞仪分辨率和灵敏度高

12、四、不同细胞分离方法的综合评价早期细胞物理属性细胞生物属性分辨率和灵敏度不高现在（根据细胞1、细胞计数单位：细胞数/毫升。工具：血细胞计数板 方法：分离的免疫细胞悬液轻轻混匀后，取一定体积细胞悬液加等量的细胞稀释液混匀，吸取1滴滴入血细胞计数板中，计算4个大方格的细胞数。细胞数=4个大方格的细胞数4104 稀释倍数五、分离细胞的保存和活力检测1、细胞计数细胞数=4个大方格的细胞数4104 稀释倍数4个大方格，体积为0.1mm34个大方格，2、分离细胞的保存 对保存液的要求：等渗，具pH 缓冲作用，并对细胞无毒性（Hanks、Tc-199、RPMI 1640 ）。 短期保存，置4放置较好，可减低

13、细胞代谢活动。 需长期保存，应放入液氮罐中在深低温(-196)条件下保存细胞。2、分离细胞的保存3、细胞活力测定 细胞活力常用活细胞占总细胞的百分比表示，常用台盼蓝(trypan blue)染色法。死细胞着色，染成蓝色；活细胞拒染。 用血细胞计数器在显微镜下观察到着色和不着色的细胞，计数200 个细胞，以不着色细胞的百分率即代表细胞的活力。 3、细胞活力测定 用血细胞计数器在显微镜下观察到着色和一、T细胞表面标志及亚群二、B细胞表面标志三、自然杀伤细胞表面标志第二节 淋巴细胞表面标志的检测及亚群分类一、T细胞表面标志及亚群二、B细胞表面标志三、自然杀伤细胞表白细胞分化抗原：造血干细胞在分化为不

14、同谱系、各个细胞谱系分化不同阶段、及成熟细胞活化过程中表达的细胞表面分子；簇分化抗原（cluster of differentiation）：CD分子或分化群，通常鉴定的同一白细胞分化抗原归为同一分化群；淋巴细胞鉴定和计数常用的细胞表面标志：簇分化抗原(CD)；相关概念白细胞分化抗原：造血干细胞在分化为不同谱系、各个细胞谱系分化一、T细胞表面标志及其亚群 T细胞共同的标志抗原：CD3分子根据免疫效应功能和表面的CD分子分为：辅助性T细胞（help T cell,Th）： CD3+CD4+CD8- 细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell, Tc or CTL） ：CD3+CD4-CD8

15、+ 调节性T细胞（regulatory T cell,Tr or Treg）：CD4+CD25+Foxp3+一、T细胞表面标志及其亚群 T细胞共同的标志抗原：CD3分子（一）辅助性T细胞（help T cell,Th）典型标志：CD3+CD4+CD8- 主要包括Th1 、Th2、 Th3和Th17细胞 Th1和Th2相对特异的标志：CD3+CD4+CD30- （ Th1 ）CD3+CD4+CD30+（ Th2 ）一、T细胞表面标志及其亚群 分泌IL-2、IFN-、TNF-辅助细胞免疫分泌IL-4、5、6、10，辅助体液免疫（一）辅助性T细胞（help T cell,Th）一、T细胞（二）细胞毒

16、性T细胞（cytotoxic T cell,Tc or CTL）典型标志：CD3+CD4-CD8+ Tc1和Tc2相对特异的标志：CD3+CD8+CD30- （ Tc1 ）CD3+CD8+CD30+（ Tc2 ）一、T细胞表面标志及其亚群 （二）细胞毒性T细胞（cytotoxic T cell,Tc（三）调节性T细胞（regulatory T cell,Tr or Treg）分两类：自然调节性T细胞（natural Treg，nTreg）诱导性调节性T细胞（inducible Treg，iTreg）分子标记：转录因子Foxp3；nTreg的典型标志：CD4+CD25+Foxp3+iTreg的检

17、测要结合其他T细胞标志。 一、T细胞表面标志及其亚群 （三）调节性T细胞（regulatory T cell,Tr二、B细胞表面标志 mIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体、小鼠红细胞受体等，其中以mIg为B细胞所特有，是鉴定B细胞可靠的指标； 其他特异的分子有： CD19、CD20、CD21、CD22、CD23等；CD19/CD5分子：可将B细胞区分为B1细胞和B2细胞，B1细胞为CD19+CD5+ ，而B2细胞为CD19+CD5-。B2细胞为通常所指外周成熟的B细胞。 二、B细胞表面标志 mIg、Fc受体、补体受体、EB病毒受体B1与B2细胞的比较2B1与B2细胞的比较2CD19+CD5

18、-:B2细胞mIg：膜表面免疫球蛋白CD19（B细胞的标志）CD21 CD22 CD23CD32(FcR)CD35（C3b/C4b受体）CD40（成熟B细胞）CD80/86（活化的B细胞）CD19+CD5+:B1细胞二、B细胞表面标志 B细胞特有，鉴定B细胞可靠指标成熟B细胞共有Fc受体补体受体CD19+CD5-:B2细胞mIg：膜表面免疫球蛋白CD19三、NK细胞表面标志 人类NK细胞表面标志主要以CD16、CD56来认定，临床上将CD3-CD56+CD16+淋巴细胞认定为NK细胞。 三、NK细胞表面标志 人类NK细胞表面标志主要以抗原提呈细胞（antigen-presenting cell

19、，APC），分两类：专职提呈细胞：巨噬细胞、树突状细胞、B细胞，表达MHC II类分子；非专职提呈细胞：内皮细胞、上皮细胞等其他：表达MHC-类分子 能提呈内源性抗原的细胞第三节 抗原提呈细胞表面标志的检测抗原提呈细胞（antigen-presenting cell1、单核-吞噬细胞系统 主要表面标志：CD142、树突状细胞（DC）形态、表型和功能高度异质；共同特征：树突样形状，胞质存在Birbeck颗粒状结构、表达CD1a、MHC II类分子、吞噬功能低、诱导静息幼稚T细胞增殖 ；主要表面标志：CD1a、CD11c、CD83。第三节 抗原提呈细胞表面标志的检测1、单核-吞噬细胞系统第三节 抗

20、原提呈细胞表面标志的检测第四节 淋巴细胞功能检测第四节 淋巴细胞功能检测一、T淋巴细胞功能的检测T细胞功能： 对外来物质的应答功能 直接杀伤特异性靶细胞 辅助或抑制B细胞产生抗体 产生细胞因子功能一、T淋巴细胞功能的检测T细胞功能：分为体内实验和体外实验。体内实验：间接了解淋巴细胞对抗原、半抗原或有丝分裂原的应答反应，如迟发型超敏反应。体外实验：包括增殖反应、细胞毒性试验及淋巴细胞分泌产物的测定。一、T淋巴细胞功能的检测分为体内实验和体外实验。一、T淋巴细胞功能的检测（一）T淋巴细胞增殖试验（T细胞转化试验）T细胞外来物质细胞内大分子物质的合成增加T细胞形态变化丝裂原：非特异性刺激物 PHA、

21、ConA、PWM抗原性刺激物：PPD (purified protein derivative)同位素法形态法（一）T淋巴细胞增殖试验（T细胞转化试验）T细胞外来物质细胞1、同位素法(3H-TdR掺入法)外周血单个核细胞5%CO2 37 56h+收集培养细胞于滤膜上液体闪烁器计数cpm加入3H-TdRPHA无PHA37 16h1、同位素法(3H-TdR掺入法)外周血单个核细胞5%CO2计算刺激指数(stimulation index,SI)：SI =含PHA管cpm不含PHA管cpm方法评价：客观性较强，灵敏度高，重复性好所需仪器昂贵有同位素污染计算刺激指数(stimulation index

22、,SI)：S2、形态法标本：外周血或单个核细胞37 72h+取培养细胞涂片染色镜检观察细胞形态学改变PHA无PHA2、形态法标本：外周血或单个核细胞37 72h+取未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化细胞未转化淋巴细胞淋巴母细胞过度型细胞大小（直径m）1220121668核大小、染色质增大、疏松增大、疏松不增大、密集核仁清晰，14有或无无有丝分裂有或无无无胞浆、着色增多、嗜碱增多、嗜碱极少，天青色浆内空泡有或无有或无无伪足有或无有或无无未转化和转化淋巴细胞的形态特征转化细胞未转化淋巴细胞淋巴母细临床免疫学检验-课件-第15章-免疫细胞标志和功能检测技术转化率 =转化的淋巴细胞数转化的淋巴细胞数+

23、未转化的淋巴细胞数100%计数200个淋巴细胞，求转化率正常参考值：60%80%方法学评价：1) 简便易行2) 受主观影响因素较大、重复性差转化率 =转化的淋巴细胞数转化的淋巴细胞数+未转化的淋巴细3、MTT比色法 是一种检测细胞存活和生长的方法。琥珀酸脱氢酶还原不溶性蓝黑色结晶甲臜沉积酶标仪检测A570nm淋巴细胞丝裂原MTTDMSO或盐酸异丙醇溶解甲臜生成量与细胞增殖水平正相关3、MTT比色法 是一种检测细胞存活和生长的方法。琥计算刺激指数(stimulation index,SI)：淋巴细胞增值程度SI =试验孔A570nm均值 对照孔A570nm均值方法学评价：1) 简便易行，无放射性

24、污染2) 灵敏度相对较低计算刺激指数(stimulation index,SI)：淋（二）T淋巴细胞分泌功能测定细胞因子检测（二）T淋巴细胞分泌功能测定细胞因子检测（三）T淋巴细胞介导的细胞毒试验T细胞靶细胞靶细胞37靶细胞被杀灭(lymphocyte mediated cytotoxicity，LMC)1、形态学检查法镜检抑制率% =对照组平均残留肿瘤细胞数 实验组平均残留肿瘤细胞数对照组平均残留肿瘤细胞数100%（三）T淋巴细胞介导的细胞毒试验T细胞靶细胞靶细胞37靶细2、同位素法（51Cr释放法）靶细胞37靶细胞靶细胞T细胞51Cr透过细胞膜与胞浆蛋白质结合51Cr同位素释放靶细胞被杀灭

25、检测靶细胞的放射性强度51Cr2、同位素法（51Cr释放法）靶细胞37靶细胞靶细胞T细胞特异性抗原皮肤试验结核菌素皮肤试验：（四） 体内试验PHA皮肤试验敏感性高、安全可靠，临床常用于检测机体细胞免疫水平注射OT2448h根据硬结直径判断阳性特异性抗原皮肤试验（四） 体内试验PHA皮肤试验注射OT24二、 B淋巴细胞功能检测产生抗体功能对外来物质应答功能 (B细胞增殖能力)IgM诱导增殖试验LPS诱导增殖试验葡萄球菌诱导试验血清Ig的测定体内试验溶血空斑形成试验二、 B淋巴细胞功能检测产生抗体功能对外来物质应答功能 (B（一）体内试验适量抗原白喉类毒素、破伤风类毒素待检者检测待检者血清中相应抗

26、体的效价（一）体内试验适量抗原白喉类毒素、待检者检测待检者血清中相应 （二）溶血空斑形成试验 检测动物抗体形成细胞的功能SRBC取出脾细胞，加入SRBC及补体4天47 0.7%琼脂溶液37 3-5h 1、直接溶血空斑形成试验 溶血SRBC抗SRBC抗体补体复合物导致SRBC溶解形成溶血空斑 （二）溶血空斑形成试验 检测动物抗体形成细胞的功能SRBC一个溶血空斑表示一个抗体形成细胞 溶血空斑的大小表示抗体形成的量检测IgM生成细胞一个溶血空斑表示一个抗体形成细胞2、间接溶血空斑形成试验：检测IgG、 IgA生成细胞SRBC取出脾细胞，加入SRBC及补体4天47 0.7%琼脂溶液37加入抗鼠Ig抗

27、体SRBC抗SRBC抗体抗小鼠抗体补体复合物导致SRBC溶解形成溶血空斑2、间接溶血空斑形成试验：检测IgG、 IgA生成细胞SRB3、被动空斑形成试验 SRBC补体47 0.7%琼脂溶液37抗原 可检测人类抗体形成细胞的功能 待检血 单个核细胞如果用一定方法将SRBC与其他抗原连接，则可检查与该抗原相应的抗体形成细胞，这种非红细胞抗体性溶血空斑试验，称为被动空斑形成试验。 SRBC抗原与抗原相应的抗体补体复合物导致SRBC溶解形成溶血空斑吸附+3、被动空斑形成试验 SRBC补体47 0.7%琼脂溶液34、反向空斑形成试验如用抗IgG、IgA、IgM抗体包被SRBC，检测相应的免疫球蛋白产生的

28、细胞。抗IgG、IgA、IgM抗体SRBC抗抗体抗体补体复合物导致SRBC溶解形成溶血空斑 可检测人类抗体形成细胞的功能4、反向空斑形成试验抗IgG、IgA、IgM抗体SRBC溶血空斑形成试验应用：1、测定药物或其它因素对体液免疫功能的影响2、评价免疫治疗或免疫重建后机体产生抗体的功能溶血空斑形成试验应用： （三）酶联免疫斑点试验可测抗体分泌细胞，又可测抗体分泌量具有稳定、特异、抗原用量少；可同时检测不同抗原诱导的不同抗体分泌、可定量；可检测组织切片中分泌抗体的单个细胞 （三）酶联免疫斑点试验可测抗体分泌细胞，又可测抗体分泌量三、自然杀伤细胞活性检测NK细胞活性：既不依赖抗体，也不需抗原刺激和

29、致敏就能杀伤靶细胞。NK细胞表面存在识别靶细胞表面分子的受体结构，通过受体直接与靶细胞结合发挥杀伤作用。三、自然杀伤细胞活性检测NK细胞活性：既不依赖抗体，也不需抗方法及原理：靶细胞效应细胞靶细胞死亡可被台盼兰染色形态法释放胞内酶酶释法乳酸脱氢酶简便易于操作可较早反应NK活性受主观因素响大无法计数轻微损伤的细胞可定量检测简便本底高方法及原理：靶细胞效应细胞靶细胞死亡可被台形态法释放胞内酶酶同位素法靶细胞效应细胞靶细胞死亡同位素同位素释放检测靶细胞的放射性强度51Cr透过细胞膜与胞浆蛋白质结合51Cr3HTdR3HTdR参与细胞DNA合成同位素法靶细胞效应细胞靶细胞死亡同位素同位素释放检测靶细胞

30、的第五节 其他免疫细胞功能检测技术大吞噬细胞：单核巨噬细胞系统小吞噬细胞：中性粒细胞 吞噬细胞的吞噬活动大体分为趋化、吞噬和胞内杀灭作用三个阶段，据此建立相应的检测方法。第五节 其他免疫细胞功能检测技术大吞噬细胞：单核巨噬细胞系统一、中性粒细胞功能检测 细胞趋化功能的检测 吞噬和杀菌功能检测一、中性粒细胞功能检测 细胞趋化功能的检测(一) 细胞运动功能趋化功能检测1.原理： 趋化因子（微生物的代谢产物，补体片段C3a和C5a，细胞因子)作用下，中性粒细胞产生趋化运动，其强度反映中性粒细胞的功能。(一) 细胞运动功能趋化功能检测1.原理： 趋化因子2. 方法学：滤膜渗透法（Boyden 小室法）

31、2. 方法学：滤膜渗透法（Boyden 小室法）琼脂糖平板法 A：向左侧孔移动距离即趋向移动距离B：向右侧孔移动距离即自发移动距离趋化指数：A/B，判断移动距离趋化因子对照琼脂糖平板法 A：向左侧孔移动距离即趋向移动距离趋化因子对照(二)吞噬和杀菌功能测定 中性粒细胞可吞噬颗粒性物质（如金黄色葡萄球菌），根据吞噬率 (phagocytic rate) 和吞噬指数 (phagocytic index)可判断该细胞的吞噬功能，根据被吞噬的细菌是否着色测定杀菌率。(二)吞噬和杀菌功能测定 中性粒细胞可吞噬颗粒 1显微镜检查法： 原理：将白细胞与葡萄球菌或白色念珠菌悬液混合、温育后，涂片用碱性亚甲蓝液

32、染色。在油镜下计数吞噬细菌和未吞噬细菌的白细胞数 1显微镜检查法： 原理：将白细胞与葡萄球菌或临床免疫学检验-课件-第15章-免疫细胞标志和功能检测技术2. 溶菌法 原理：将白细胞悬液与经新鲜人血清调理过的细菌（大肠杆菌或金黄色葡萄球菌）按一定比例混合后，置37。每隔一定时间取定量培养物，稀释后接种固体平板培养基。37培养18h后，计数生长菌落数，以了解中性粒细胞的杀菌能力。2. 溶菌法 原理：将白细胞悬液与经新鲜人血清调理3硝基蓝四氮唑 (nitroblue tetrazolium，NBT) 还原试验 6-磷酸葡萄糖戊糖6-磷酸葡萄糖脱氢酶脱氢加入NBT吞噬或渗透到中性粒细胞胞质蓝黑色甲臜颗粒还原沉积于中性粒细胞胞质NBT阳性细胞NBT