红景天多糖提取工艺的研究

1、红景天多糖提取工艺的研究【关键词】红景天；,多糖；,正交设计法；,提取摘要：目的选择红景天多糖的最正确提取工艺。方法采用正交设计法挑选红景天多糖最正确提取工艺，用苯酚-硫酸比色法测定其含量。结果红景天多糖的最正确提取工艺为，用10倍的水，提取3次，1h/次。测得红景天多糖的含量为5.0126%，平均回收率为99.39%，RSD为0.81%n=6。结论该方法简便，准确，灵敏度高，适用于红景天多糖的提取和纯化。关键词：红景天；多糖；正交设计法；提取StudyntheptiuExtratingethdfPlysaharidefrRhdilsideAbstrat：bjetiveTseletthepti

2、uextratingethdfplysaharidefrRhdilside.ethdsTselettheptiuextratingethdbyusingrthgnaldesignandthedeterinatinfplysaharideastakenbyphenl-sulfuriaidethd.ResultsTheptiuextratethdftheplysaharideasdeterinedbyrthgnaldesign:theslventasaterandtheaterialas101,extrated3ties,eahtieas1hur.Theplysaharidesntentbythe

3、ptiuextratingethdas5.0126%,theaveragereveryas99.39%(n=6),relativestandarddeviatinas0.81%.nlusinThisethdassiple,aurateandhadagdsensitivity,andassuitablefrtheextratinanddeterinatinfplysaharideRhdilasahalinensis.Keyrds:Rhdilasahalinensis;Plysaharide;rthgnaldesign;Extratin高山红景天RhdilasahalinensisA.Br.是景天

4、科红景天属的多年生草本植物，被载于?长白山植物药志?和?中国植物志?中，具有类似中医扶正固本的“适应原样作用。高山红景天中主要含有红景天苷(Rhdilside,14H27)和苷元1以及多糖、脂肪、蜡、甾醇、酚类化合物、黄酮、有机酸、水溶性挥发油、18种氨基酸以及铁、钙、镁、铜、铬、硒等35种无机元素2。现代药理研究说明红景天多糖对血糖具有双向调节作用，同时还具有调节免疫，抗肿瘤，抗衰老等成效3。为了有效地利用这一药用资源，本研究采用正交实验法对提取方法进展了挑选，并测定了红景天多糖的含量。1仪器与材料722分光光度计上海精细科学仪器；电子天平上海精科天平；循环水式多用真空泵郑州长城科工贸；旋转

5、蒸发器上海青浦沪西仪器厂；电动离心机金坛市恒丰仪器厂；电子恒温水浴锅中国深圳国华仪器厂；电热恒温枯燥箱上海精宏实验设备。高山红景天延边长白山红景天种植；其它化学试剂均为国产分析纯。2方法与结果2.1红景天多糖含量测定方法的建立462.1.1标准曲线的绘制精称葡萄糖标准品100.0g，加适量水溶解，转移至100l容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即为葡萄糖标准溶液。再将其浓度稀释100倍，制成对照品溶液。精细汲取葡萄糖标准溶液0.25，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0l定容至100l，得2.5，5.0，10，20，30，40g/L不同浓度的溶液。分别取0.5l，各参加苯酚试剂0.5l，加水2.5

6、l，迅速滴加浓硫酸3.5l。以随行试剂为空白液。在水浴中煮沸15in，取出，冷却15in后，于490n处测其吸光度值。以吸光度对葡萄糖浓度线性回归，得回归方程为Y0.016X+0.0543(r0.9989)。实验说明，葡萄糖在2.540g/L范围内呈现良好的线性关系。2.1.2精细度实验精细汲取葡萄糖对照品溶液0.5l，同2.1.1操作，测定吸收度，重复6次，RSD为1.38%，说明本方法精细度良好。2.1.3稳定性实验取葡萄糖对照品溶液0.5l4份，分别在0.5，1，2，3h测其吸光度值，RSD为0.752%，说明葡萄糖对照品溶液在3h内稳定。2.1.4加样回收率实验分别汲取葡萄糖对照品溶液

7、6份，置含量的供试品溶液中,按2.1.1条件测定。测得平均回收率为99.39%，RSD为0.81%。2.1.5换算因子测定准确称取精制红景天多糖10g，用水溶解，定容于100l容量瓶中，汲取0.5l，按2.1.1条件操作，求出多糖含量，重复6次，然后按下式计算换算因子f，f/(D)，：多糖重量g，：多糖液中葡萄糖的浓度g/L，D：多糖的稀释倍数。结果换算因子f平均为4.19，RSD为1.8%。2.2红景天多糖提取工艺的优化7，82.2.1提取方法的考察因素与程度据文献调研及预实验结果，采用水煮沸浸提，其中参加的溶剂量，提取时间，提取次数对实验结果有影响，因此本实验采用正交设计法L934表，以红

8、景天多糖含量为考察指标进展实验。表1正交设计程度略2.2.2红景天浸出液的制备将红景天粉碎，称取5.0g，浸泡12h，分别按L934表进展提取，将提取液过滤，浓缩至10l，参加80%乙醇使沉淀，静置12h，过滤。将沉淀物用30l水溶解，置50l容量瓶中，加水至刻度，得红景天多糖样品液。2.2.3样品中红景天多糖含量测定精细汲取红景天多糖样品液1l，放入50l容量瓶中，加水至刻度。用2.1.1条件进展测定,按下式计算红景天多糖的含量。结果见表2。多糖含量=Df/100%其中为样品液中葡萄糖的重量，D为稀释倍数，f为换算因子，为样品的生药量。实验结果说明，因素A对红景天多糖的提取有显著影响，其次为

9、因素，因素B对红景天多糖的提取没有影响。考虑到消费中的经济本钱问题，选择最正确方案为A2B13，即用10倍的水，提取3次，1h/次。按照此最正确工艺进展提取，测得含量为5.0126%。转贴于论文联盟.ll.2.3红景天多糖的精制工艺9，102.3.1醇沉法将红景天粉碎，称取4份，每份100g，按最正确提取工艺进展提取，过滤。将滤液浓缩至200l，分别参加不同量的乙醇，使乙醇浓度分别到达60%，70%，80%，90%，静置12h，然后过滤，沉淀在60枯燥，得红景天粗多糖。将粗多糖称重，然后用水溶解，用2.1.1条件测定多糖的含量。实验重复6次。实验结果说明，本实验用80%的乙醇进展醇沉，得到的粗

10、多糖较多，并且多糖含量高。结果见表34。表2正交实验结果略表3醇沉法所得红景天多糖重量略与60%乙醇醇沉结果比拟，*P0.05表4醇沉法所得红景天多糖含量略与60%乙醇醇沉结果比拟，*P0.052.3.2脱蛋白由于红景天多糖粗品中含有游离的蛋白质，为了进一步精制红景天多糖粗品，本实验采用Sevag法除去红景天多糖粗品中的蛋白质。取3份粗多糖，每份50g，分别用100l水充分溶解，参加不同体积量的Sevag试剂氯仿正丁醇=41，混匀，充分振荡30in后，用电动离心机1000r/in离心1in，别离水层和氯仿层，反复脱蛋白5次。将水层浓缩，在60枯燥，称重，然后用水溶解，用2.1.1条件测定多糖的

11、含量。重复做6次。实验结果说明，将样品和Sevag试剂11混合脱蛋白，多糖得率高，含量高。结果见表56。表5采用Sevag法纯化后所得红景天多糖的重量略与样品-试剂VV=(10.5的纯化结果比拟，*P0.05表6采用Sevag法纯化后所得红景天多糖的含量略*与样品-试剂VV=(10.5的纯化结果比拟，*P0.052.3.3脱脂将用最正确方法制得的红景天粗多糖用乙醚在45恒温水浴中用索氏提取器回流提取3次，1h/次，过滤。60恒温枯燥，得红景天多糖。3讨论3.1根据正交实验统计分析结果，红景天多糖的提取工艺各因素中溶剂量对粗多糖得率影响最大，其次是提取次数，提取时间对粗多糖得率无影响。考虑到消费

12、中的经济本钱问题，选择用10倍的水，提取3次，1h/次。用80%的乙醇进展醇沉12h，得到红景天多糖粗制品，将Sevag试剂氯仿正丁醇=41和多糖粗制品水溶液11混合，以除去蛋白质，并用乙醚脱脂，即可获得精制红景天多糖。3.2作者从高山红景天根茎中提取了红景天多糖，并对其做了含量测定。研究说明，在高山红景天根茎中红景天多糖含量约为5%，可以进一步开发和利用。多糖的纯度标准不能用普通化合物的标准来衡量，目前所说的多糖纯品本质上是指一定分子量范围的均一组分。而红景天多糖的构造组成和生理活性有待进一步研究。参考文献：1吉林省中医中药研究所.长白山植物药志，第1版.吉林：吉林人民出版社,1982：49

13、4.2董滟.红景天的药用价值与临床应用J.四川中医，1998，167：17.3周瑞平，庄剑青，王谷强.药用植物高山红景天的资源与开发J.中国中医药科技，1995，24：32.4董群，郑丽伊，方积年.改进的苯酚-硫酸法测定多糖和寡糖含量的研究J.中国药学杂志，1996，319：550.5刘晓河，梁惠花，郭春艳.桃红四物汤中多糖的提取和含量测定J.张家口医学院学报，2022，201：11.6王鲁石,王莉,鲁建江.红景天叶多糖的微波提取及含量测定J.石河子大学学报,2002,6(1):18.7林力，郑剑峰，王东.车前子多糖成分的提取工艺研究J.辽宁中医杂志,2002,29(4):232.8陈云龙，何国庆