高效液相色谱法测定妇康阴道泡腾片中没食子酸和盐酸小檗碱的含量

1、高效液相色谱法测定妇康阴道泡腾片中没食子酸和盐酸小檗碱的含量【关键词】高效液相色谱法摘要:目的:建立妇康阴道泡腾片中没食子酸和盐酸小檗碱的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，色谱柱为岛津ShapakVPDS柱，测定没食子酸的流动相为0.2%甲醇的乙腈溶液-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸水溶液397，检测波长为270n;测定盐酸小檗碱的流动相为乙腈-含0.1%三乙胺的0.05lL-1磷酸二氢钾水溶液2575，混合后用磷酸调pH=3，检测波长为345n。结果:没食子酸在0.026040.20832g范围内呈良好的线性关系，r=0.9996，平均回收率为97.89%，RSD=1.27%n=6。盐

2、酸小檗碱在0.019560.1956g范围内呈良好的线性关系，r=0.9998，平均回收率为98.98%，RSD=1.39%n=6。结论:该法简单、快速、专属性强、重现性好，可以较好地控制产品的质量。关键词:高效液相色谱法;没食子酸;盐酸小檗碱;妇康阴道泡腾片DeterinatinfgalliaidandberberinehydrhlridEinHuihunvaginaleffervesenttabletsbyHPLAbstrat:bjetive:TestablishtheethdsfrthedeterinatinfgalliaidandberberinehydrhlrideinHuihunv

3、aginaleffervesenttablets.ethds:TheseparatinasperfrednShiadzuSha-pakVPS1504.6，5lun.Thebilephasefgalliaidasaetnitrileith0.2%ethnal-0.1%phasphriaidith0.1%triehylaine397.Thebilephasefberberinehydrhlrideasaetnitrile-0.05lL-1ptassiudihydrgenphsphateith0.1%triehylaine2575，ixtureandadjustpHt3.0ithphasphriai

4、d.Thelunteperaturefgalliaidas35as25fberberinehydrhlride.Thedetetinavelengthfgalliaidasat270n，andasat345nfberberinehydrhlride.Results:Thelinearfgalliniaidasintherangef0.026040.20832g，r=0.9996.Theaveragereveryas97.89%andRSDas1.27%n=6.Thelinearfberberinehydrhlrideasintherangef0.019560.1956g，r=0.9998.Th

5、eaveragereveryas98.98%andRSDas1.39%n=6.nlusin:Thethedisnvient，rapid，relibleandaurate.ItanbeusedfrqualityntrlfHuihunvaginaleffervesenttablets.Keyrds:Huihunvaginaleffervesenttablets;Galliaid;Berberinehydrhlride妇康阴道泡腾片是由没食子、黄连、菝葜、石榴皮等药材经粉碎后制成的泡腾片，对多种类型的阴道炎均有效。处方中黄连的主要成分为盐酸小檗碱，有多味药材中含有没食子酸。为更好地控制其质量，本研究

6、采用HPL法测定了本品中没食子酸和盐酸小檗碱的含量，为本品的定量分析提供了新的方法。1仪器与试药ShiadzuL-10ATVP高效液相色谱仪，ShiadzuSPD-6AV检测器，ShapakVPDS色谱柱。乙腈为色谱纯，甲醇、三乙胺、磷酸和磷酸二氢钾均为分析纯。没食子酸对照品和盐酸小檗碱对照品中国药品生物制品检定所，妇康阴道泡腾片自制。2实验方法2.1没食子酸的含量测定2.1.1色谱条件岛津ShapakVPDS柱1504.6，5。流动相:0.2%甲醇的乙腈溶液-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸的水溶液397，流速1.0lin-1，检测波长270n，柱温35。2.1.2对照品溶液的制备及线性关系的

7、考察精细称取减压枯燥至恒重的没食子酸对照品加50%甲醇制成每1l含0.02604g的对照品溶液。精细汲取对照品溶液1，2，4，6，8l，按2.1.1色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品的量g为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:A=476696+678.56，r=0.9996，线性范围为0.026040.2083g。2.1.3色谱行为与系统适应性实验分别按照2.1.8.2及2.1.2项下方法制备供试品、阴性空白样品及对照品溶液，按照2.1.1项下的色谱条件，各进样10l，如图13所示，阴性空白溶液色谱没有干扰。理论塔板数按没食子酸峰计算不低于1900，别离度为1.9。2.1.

8、4供试液稳定性实验按2.1.8.2项下制备供试品溶液，取供试品溶液分别在4，8，12，24h进样10l，记录峰面积积分值，结果RSD为0.87%。可见供试品溶液在24h内稳定。2.1.5精细度实验精细汲取同一供试品溶液，连续重复进样5次，记录峰面积积分值，结果RSD为0.76%。2.1.6重现性实验取同一批样品，按2.1.8.2项下制备5份供试品溶液，分别测定没食子酸的含量，结果平均含量为0.7012gg-1，RSD为0.53%。2.1.7加样回收率实验取同一批样品6份各约0.25g，精细称定，置50l量瓶中，分别精细参加浓度为0.1302gl-1没食子酸对照品溶液1，1.5，2l，按2.1.

9、8.2供试品溶液制备项下，自“用适量50%甲醇操作，各进样10l，记录色谱图，计算回收率，结果见表1。表1妇康阴道泡腾片中没食子酸加样回收率实验结果取样量/g样品中没食子略2.1.8供试品溶液的制备2.1.8.1提取溶剂和提取方法确实定取本品20片，研细，取1g，精细称定，置100l量瓶中，分别用以下方法处理。a.用甲醇溶解并稀释至刻度，超声。分别于5，10，20，30in取样约2l，高速离心，取上清液10l注入高效液相色谱仪中，经测定峰面积分别为:33318，34109，33661，33855。用50%甲醇溶解并稀释至刻度，超声。分别于5，10，20，30in取样约2l，高速离心，取上清液1

10、0l注入高效液相色谱仪中，经测定峰面积分别为:34717，34376，34645，34525。实验结果说明，采用甲醇和50%甲醇做提取溶剂对没食子酸的含量影响不大，且当超声10in时，两者含量到达平衡。因此，综合考虑试验时间和经济确定供试品处理方法为:50%甲醇提取，超声10in。转贴于论文联盟.ll.2.1.8.2供试品溶液的制备及测定取本品20片，精细称定求得平均片重后，研细，取1g，精细称定，置100l量瓶中，用适量50%甲醇，超声处理10in，放冷后，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀。高速离心，即得供试品溶液。取三批产品按照上述方法制备。分别取10l注入高效液相色谱仪中测定，结果见表3。2

11、.2盐酸小檗碱的含量测定2.2.1色谱条件岛津ShapakVPDS柱1504.6，5。流动相:乙腈-含0.1%三乙胺的0.05lL-1磷酸二氢钾水溶液2575，混合后用磷酸调pH=3，流速1.0lin-1，检测波长345n，柱温25。2.2.2对照品溶液的制备及线性关系的考察精细称取减压枯燥至恒重的盐酸小檗碱对照品加甲醇制成每1l含0.01956g的对照品溶液。精细汲取对照品溶液1，2，4，6，8，10l，按2.2.1色谱条件测定峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，对照品的量g为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:A=562287-4.5178，r=0.9998，线性范围为0.019560.1

12、956g。2.2.3系统适应性实验分别按2.2.8.2及2.2.2项下方法制备供试品、阴性空白样品及对照品溶液，按照2.2.1项下的色谱条件，各进样5l，如图46所示，阴性空白溶液色谱没有干扰。理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算不低于2000，别离度为1.6。2.2.4供试液稳定性实验按2.2.8.2项下制备供试品溶液，取供试品溶液分别在4，8，12，24h进样5l，记录峰面积积分值，结果RSD为0.78%。可见供试品溶液在24h内稳定。2.2.5精细度试验精细汲取同一供试品溶液，连续重复进样5次，测定峰面积，结果RSD为1.08%。2.2.6重现性实验取同一批样品，按2.2.8.2项下的方法制备5

13、份供试品溶液，分别测定盐酸小檗碱的含量，结果平均含量为0.9672gg-1，RSD为1.24%。2.2.7加样回收率实验取同一批样品6份各约0.125g，精细称定，置25l量瓶中，分别精细参加浓度为19.56gl-1盐酸小檗碱对照品溶液7.5，12.5，15l，按2.2.8.2项下，自“用盐酸-甲醇1100操作，各进样5l，记录色谱图，计算回收率，结果见表2。表2妇康阴道泡腾片中盐酸小檗碱加样回收率实验结果取样量/g略2.2.8供试品溶液的制备2.2.8.1提取溶剂和提取方法确实定取本品20片，研细，取0.5g，精细称定，共五份，分别置于50l量瓶中，均用盐酸-甲醇1100溶液溶解并稀释至刻度

14、，摇匀。分别用超声提取法、水浴提取法、超声+热提取法处理。a超声提取法:将样品进展超声处理，分别于10，20，30in取样约2l，高速离心。分别取上述溶液各5l注入高效液相色谱仪中，经测定峰面积分别为51317，51884，51692。b热提取法:将三份样品置于60恒温水浴中，分别放置30，60，90in，取出后放冷，用盐酸-甲醇1100溶液分别稀释至刻度，摇匀，高速离心。分别取上述溶液各5l注入高效液相色谱仪中，峰面积分别为53625，54068，54608。超声提取+热提取法:将样5置于60恒温水浴中15in，取出后再超声30in，用盐酸-甲醇1100溶液稀释至刻度，摇匀。放置过夜，高速离

15、心。取上述溶液5l注入高效液相色谱仪中，峰面积为54364。实验结果说明，用超声提取法处理盐酸小檗碱的含量低于用热提取法和超声+热提取法处理;热提取法和超声+热提取法的提取时间虽相差较大，但测得盐酸小檗碱的含量根本平衡;用热提取法处理时水浴60in时盐酸小檗碱的含量到达平衡。因此，确定供试品处理方法为:盐酸-甲醇1100溶液提取，60恒温水浴60in。2.2.8.2供试品溶液的制备及测定取本品20片，精细称定求得平均片重后，研细，取内容物0.5g，精细称定，置50l量瓶中，用盐酸-甲醇1100溶液稀释至刻度，60恒温水浴60in后放冷，用盐酸-甲醇1100溶液稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

16、取样约2l，高速离心，即得。取三批产品按照上述方法制备，各取5l注入高效液相色谱仪中测定，结果见表3。表3妇康阴道泡腾片中没食子酸和盐酸小檗碱的含量测定结果略3讨论3.1将没食子酸对照品溶液进展UV吸收光谱扫描，其最大吸收波长为220n和270n。由于220n波长靠近UV的末端吸收区，干扰较270n处大，因此确定采用270n作为本品的测定波长。没食子酸为可水解鞣质的构造单元，它的含量随提取条件不同差异较大，超声波提取法时间短，提取的主要为游离没食子酸。加热提取会使药材中所含的大量可水解鞣质水解，所以本实验没有采用加热提取的方法。3.2?中国药典?2000版部黄连药材中盐酸小檗碱含量测定，供试溶

17、液的制备采用的是“2.2.8.1提取溶剂和提取方法确实定中的法，需放置1晚后再测定。研究中考察了超声提取法、热提取法及两者结合盐酸小檗碱的提取情况，试验结果说明，超声法和热提法均可。3.3据文献报道，测定没食子酸和盐酸小檗碱含量所用流动相有多种。本文曾以0.1%磷酸-甲醇982、四氢呋喃-甲醇-0.2%磷酸1198作为流动相测定没食子酸，别离效果均不理想，最终采用0.2%甲醇的乙腈溶液-含0.1%三乙胺的0.1%磷酸水溶液397得到较好的别离;曾以乙腈-0.03lL-1磷酸二氢钾、乙腈-0.05lL-1磷酸二氢钾三乙胺不同比例作为流动相测定盐酸小檗碱，但别离效果均不理想。经过反复探索，发现用乙腈-含0.1%三乙胺的0.05lL-1磷酸二氢钾水溶液2575，以磷酸调pH=3作为流动相，峰形较好，且主峰与相邻峰到达基线别离。参考文献:1李焕德，阎小华，欧阳华.高效液相色谱法测定妇霉栓剂中没食子酸的含量J.药物分析杂志，1996，162:105-107.2邓开英，梁渝陵，秦剑.HPL法测定结肠宁栓中没食子酸的含量J.药物分析杂志，2000，206:406-408.3颜玉贞，唐