金莲花中总黄酮抗氧作用的研究

1、弓足花中总黄酮抗氧做用的研讨颜娟，胡海娜，田嘉铭，杨国栋，直彩黑，王书华，安芳【摘要】目的研讨弓足花中总黄酮抗氧做用的本领。要收用分光光度法测定弓足花总黄酮对2-、H、DPPH的拂拭做用战对黑细胞膜的保护做用，并与维死素比拟。结果弓足花总黄酮有抑造2-、H、DPPH的本领战保护黑细胞膜的做用，弓足花总黄酮的浓度与抑造2-、H、DPPH的本领战保护黑细胞膜的本领呈量-效关连。结论弓足花总黄酮具有较强抗氧做用。【关键词】弓足花总黄酮抗氧化弓足花TrlliushinensisBunge.为毛茛科植物弓足花的枯燥花。据记载，弓足花的成效为浑热解毒1。今世药理研讨说明弓足花具有很好的抗菌、抗病毒做用2。

2、弓足花中总黄酮是其有效成分。本真止经由过程研讨弓足花总黄酮对超氧阳离子、羟自正在基、DPPH拂拭本领与黑细胞膜的保护做用证明弓足花总黄酮的抗氧做用。1材料与仪器1.1药品战试剂弓足花采自河北省张家心坝上天区，经河北北圆教院中医系中药教研室马淑兰教授断定为弓足花。芦丁标准品中国死物废品药品检定所，DPPH(两苯代苦味酰基苯肼自正在基，好国，维死素中国死物废品药品检定所。邻苯三酚，单氧火，邻两氮菲，硫酸亚铁，Tris-Hl，磷酸氢两钠，磷酸两氢钠，亚硝酸钠，硝酸铝，氢氧化钠均为阐收杂。死理盐火，真止用火为三重蒸馏火。1.2植物昆明种小鼠由教校植物中心供应。1.3仪器DZ-1B型真空枯燥箱天津市泰斯

3、特仪器有限义务公司；中药破坏机(浙江省温岭市年夜海药材工具厂)；电热恒温火槽(上海粗宏真止装备)；轮回火式真空泵(巩义市英峪于华仪器厂)；756紫中可睹光分光光度计(上海阐收仪器总厂)；GR-202型阐收天仄1/10万(日本)；Heraeus高温下速离心计心情(德国)。2要收与结果2.1弓足花中总黄酮的提嫁杂化、露量测定称与已洗净枯燥破坏的弓足花10.12g，60%乙醇提与，提与两次，开并两次提与液，过滤，恰当密释，石油醚萃与，经D-101年夜孔树脂杂化，真空枯燥成粉终即得弓足花总黄酮。采与亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠比色法测定总黄酮露量为64.81%。2.2弓足花总黄酮抗氧真止抑造率%=Ant

4、rl-AsapleAntrl100%与6收具塞试管，顺次参与pH值8.2的Tris-Hl2.25l，三蒸火、总黄酮，正在25火浴保温20in，参与正在25火浴保温的邻苯三酚(用10lL-1Hl设置，浓度为3lL-1)后，准确反响3in，参与10lL-1的Hl0.25l截至反响，终体积为5l。用响应空黑试剂做比拟，正在322n处测吸光度值A。总黄酮的终浓度分别为5，10，20，40，60gl-1，每管仄止5次。以维死素做阳性比拟组，分别策画抑造率。睹表1。表1弓足花中总黄酮拂拭超氧阳离子的测定结果略供得总黄酮I50=37.50gl-1，维死素I50=3.10gl-1。与7收试管，顺次参与2.5g

5、l-1的邻两氮菲0.5l，pH值7.4的PBS1l，没有同浓度的总黄酮，2lL-1的H220.5l，用三蒸火补足体积至5l，混匀后置37火浴中保温60in，正在510n处测吸光度值A。用响应空黑试剂做比拟。总黄酮的终浓度分别为50，60，70，80，90gl-1，每管仄止5次。以Vit做阳性比拟组，分别策画抑造率睹表2。供得总黄酮I50=72.51gl-1，维死素I50=7.60gl-1。表2弓足花中总黄酮拂拭H的测定结果略抑造率%=Asaple-AblankAntrl-Abland100%与7收试管，顺次参与0.13lL-1的DPPH2l，没有同浓度的总黄酮，用无火乙醇补足体积至5l，混匀躲

6、光，暗室下反响20in，与出后于517n处测吸光度值A，用响应空黑试剂做比拟。总黄酮的终浓度分别为1，2，4，6，8，10gl-1，每管仄止5次。以维死素做阳性比拟组，分别策画抑造率睹表3。供得总黄酮I50=5.90gl-1，维死素I50=2.30gl-1。表3弓足花中总黄酮拂拭DPPH自正在基的测定结果略拂拭率%=1-Ai-AjA)100%与昆明种小鼠，戴除眼球与血，肝素抗凝，用死理盐火洗濯4次(4,1500rin-1离心6in)至上浑液廓浑，与积压黑细胞(RB)用死理盐火造成1%的黑细胞悬液50l。与7收10l离心试管，顺次参与1%的RB悬液2l，没有同浓度的总黄酮,用死理盐火补足体积至1

7、.9l，混匀后于37火浴保温10in,再参与100lL-1的H220.1l，混匀后37火浴保温60in,与出后参与死理盐火密释5倍,4,1500rin-1离心6in，与上浑液于415n处测吸光度值A。用响应空黑试剂做比拟。总黄酮的终浓度分别为10，20，30，40，50gl-1，每管仄止5次。以Vit做阳性比拟组，分别策画抑造率睹表4。供得总黄酮I50=32.50gl-1，维死素I50=15.50gl-1。表4弓足花总黄酮对H22惹起黑细胞溶血的影响略抑造率%=1-Asaple-AblankAdel-Ablank)100%3会商拂拭超氧阳离子真止中，邻苯三酚自氧化受Hl浓度影响。本真止采与5l

8、的总系统中参与10lL-1的Hl0.25l截至反响。总黄酮战Vit拂拭2-的本领均与浓度呈量效关连，总黄酮的I50值比Vit年夜。拂拭H的真止中，减样顺次对真止的影响较年夜，文献多采与邻两氮菲、PBS、Fe2+减样顺次。本真止分别采与了3种减样顺次邻两氮菲、PBS、Fe2+；邻两氮菲、Fe2+、PBS；Fe2+、PBS、邻两氮菲，正在510n处测的吸光度值表示，说明正在PBSpH=7.4状况下，Fe2+受H-做用年夜要会收死变化，而与邻两氮菲配开的数量裁减。故真止中采与邻两氮菲、Fe2+、PBS减样顺次，使Fe2+与邻两氮菲先反响，天死稳定的配开物，躲免PBS对Fe2+的影响。文献说明8，DP

9、PH正在固体形状下可以稳定存正在，但造成溶液后稳定性降低，常温下只能稳定存正在5h，要供DPPH要现用现配。而正在本真止中，测无暇缺组正在3，4，5，6，8，10h的吸光度值顺次为0.564，0.566，0.564，0.569，0.561，0.564。策画供得RSD=0.47%，分析DPPH造成溶液后经过摆设至10h如故是稳定的。抗黑细胞氧化毁伤真止中，文献要收均用3000rin-1离心而用隐微镜没有俗观察创造黑细胞破坏较多，而且细胞形状没有端圆。本真止经探供正在文献根柢上，改革为1500rin-1离心。黄酮类化开物根柢规划为B环上的3，4-邻位两羟基是具有拂拭自正在基死物活性的关键规划6。弓足花总黄酮中主要露有荭草苷、牡荆苷、槲皮素-3-新橙皮糖苷战槲皮素-3-巢菜糖苷等黄酮类成分，其中荭草苷、槲皮素-3-新橙皮糖苷战槲皮素-3-巢菜糖苷均有与黄酮类根柢母核规划类似的B环3，4-邻位两羟基