产品无菌检验操作规程

1、PAGE PAGE 13文件编号： 产品无菌检检验操作作规程编制 日期审核 日期批准 日期版号 生效日日期 公公司公司司文件编号版本号产品无菌检检验修改次数0作业指导书书页次/1 目的通过无菌检检验，确确保灭菌菌后产品品能够达达到无菌菌的要求求。2 适用范范围适用于灭菌菌后医疗疗器械产产品（列列举）的的无菌检检验。3 检验依依据本厂产品注注册标准准（编号号）EN11774-119966 医疗器器械灭菌菌产品中中微生物物数量的的评估中国药典典（220055年版）GB142233.2-20055 医用输输液、输输血、注注射器具具检验方方法第二二部分：生物试试验方法法GB159980-19995 一

2、次性性使用医医疗用品品卫生标标准4 仪器、设设备百级层流超超净工作作台、电电热干燥燥箱、电电热恒温温培养箱箱、霉菌菌培养箱箱、压力力蒸汽灭灭菌器、集菌仪仪（器）、电子天天平、PPH计、冰冰箱、恒恒温水浴浴锅、酒酒精灯、三三角烧瓶瓶，接种种环、无无菌棉签签、镊子子，试管管架，大大试管若若干等。5 无菌检检验室的的环境要要求5.1 无无菌检验验应在环环境洁净净度1000000级下的的局部百百级的单单向流空空气区域域内进行行。5.2 缓缓冲区与与外界环环境、无无菌检验验室与缓缓冲区之之间空气气应保持持正压，阳阳性对照照室与缓缓冲区之之间空气气应保持持负压。无菌检验室与室外大气之间静压差应大于10Pa

3、。无菌检验室的室温应保持1826，相对湿度：4565%。5.3 无无菌检验验室的单向流流空气区区、工作作台面及及环境应应定期按按医药药工业洁洁净室（区区）悬浮浮粒子、浮浮游菌和和沉降菌菌的测试试方法的的现行国国家标准准进行悬悬浮粒子子、浮游游菌和沉沉降菌的的监测。每年至至少检测测一次。5.4 无无菌检验验过程中中应同时时检查超超净工作作台单向向流空气气中的菌菌落数：每次操操作时在层流流空气所所及台面面的左中右右置3个个营养琼琼脂平板板，暴露露30mmin，于于3035培养448小时时，菌落落数平均均应不超超过1CCFU/平板。6 无菌检检验前的的准备6.1 器器具灭菌菌、消毒毒6.1.11 灭

4、菌菌：试验验过程中中与供试试品接触触的所有有器具必必须采用用可靠方方法灭菌菌。可经电电热干燥燥箱1660以上干干烤2小小时，或或置压力力蒸汽灭灭菌器内内1211蒸汽灭灭菌300分钟后后使用（根根据灭菌菌效果验验证决定定灭菌参参数）。所有的灭菌物品不应超过2周即用毕，否则应重新灭菌。6.1.22 消毒毒：凡检验验中使用用的器材材无法灭灭菌处理理的，使使用前必必须经消消毒处理理。如无无菌检验验室的试试管架、电子天平、工作台面、工作人员的手、橡胶吸头等。可采用消毒剂浸泡或擦拭。消毒剂应每月更换，以防止产生耐药菌株。6.1.33 标识：器具的的灭菌、消消毒后必必须做好好标识，标标明灭菌菌、消毒毒时间和

5、和使用有有效期。6.2 人人员、物物料进入入无菌检检验室6.2.11 开启启紫外线线灯或臭臭氧发生生器进行行空间灭灭菌处理理，消毒毒时间不不得少于于30mmin。6.2.22 物料料进入无无菌检验验室流程程6.2.22.1 脱包：进入无菌菌检验室室的物品品若有双双重包装装的，需需将外包包装在传传递窗/缓冲间间拆除后后，传入入试验室室。6.2.22.2 消毒：进入无无菌操作作室的所所有培养养基、供供试品等等的外表表都应采采用适用用的方法法进行消消毒处理理，以避避免将外外包装污污染的微微生物带带入无菌菌检验室室。6.2.22.3 传递：查看所所有进入入无菌检检验室的的器具上上的灭菌菌、消毒毒标识，

6、是是否在有有效期内内。符合要要求的经经传递窗窗传入无菌检检验室。6.2.33 人员员进入无无菌检验验室流程程6.2.33.1 更鞋脱脱衣：在在一更区区脱去一一般区工工作鞋，穿上无菌检验室工作鞋；脱去一般区工作服。6.2.33.2 洗手：首先用用肥皂或或洗手液液在手上上揉擦出出泡沫，再再用流水水连续冲洗洗20秒秒，洗净净泡沫。6.2.33.3 更衣：在二更更区按照照从上到到下的顺顺序穿戴戴无菌工工作服（包包括衣、帽、口口罩等），要求裤子掖在上衣里，口罩掩住口鼻，帽子包裹所有头发。6.2.33.4 手消毒毒：用消消毒液浸浸泡双手手5秒以以上或用用浸过消消毒液的的棉球擦擦拭双手手。消毒毒液可用用洗必

7、泰泰、新洁洁尔灭、碘碘伏、775%酒酒精等。6.2.33.5 人员进进入：经经缓冲间间进入无无菌检验验室。6.2.44 人员员进入无菌菌检验室室后，进进一步用用消毒液液擦拭工作作台面，戴戴无菌手手套。7 无菌检检验操作作要求7.1 全全过程必必须严格格执行无无菌操作作，防止止微生物物污染。7.2 使使用玻璃璃器皿应应轻取轻轻放，避避免破损损，以防防培养物物扩散。7.3 所所有操作作均应在在近火焰焰区进行行，且不不得有大幅幅度或快快速动作作，以免免搅动空空气中的的尘埃微微粒。7.4 使使用金属属接种器器具时，用用前、用用后均需需灼烧灭灭菌。7.5 在在接种培培养物时，动动作应轻轻、准，防防止培养

8、养物溅出，产产生汽溶溶胶，造造成污染染。7.6 操操作过程程中所有有的带菌菌物品，用后均应作消毒、灭菌处理。可在检验过程中随用随时放入消毒液缸内浸泡或消毒桶内，或在检验完成后经传递窗传至一般区，立即用压力蒸汽灭菌锅121灭菌30分钟。8 培养基基制备8.1需气气菌、厌厌气菌培培养基（硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基）的制制备8.1.11 所用试试剂酪胨（胰酶酶水解）15.00g葡萄糖5.0gL-胱氨酸酸0.5g硫乙醇酸钠钠0.55g（或硫乙醇醇酸）（00.3mml）酵母浸出粉粉5.0g氯化钠2.5g新配制的00.1%刃刃天青溶溶液1.0mll琼脂0.775g水10000ml8.1.22 制备除葡萄

9、糖和和刃天青青溶液外外，取上上述成分分混合，微微温溶解解，调节节pH为为弱碱性性，煮沸沸，滤清清，加入入葡萄糖糖和刃天天青溶液液，摇匀匀，调节节pH为77.10.2。8.1.33 硫乙乙醇酸盐盐流体培培养剂氧氧化层的的颜色要要求在供试品接接种前，培培养基氧氧化层的的高度不不得超过过培养基基深度的的1/55，否刚刚需经1100水浴加加热到粉粉红色消消失（不不超过220分钟钟）迅速速冷却，只只限加热热一次，并并应防止止被污染染。8.2 霉霉菌培养养基（改改良马丁丁培养基基）的制制备8.2.11 所用试试剂胨5.0gg酵母浸出粉粉2.00g葡萄糖200.0g磷酸二氢钾钾1.0g硫酸镁0.5g水100

10、00 mll8.2.22 制备除葡萄糖外外，取上上述成分分混和，微微温溶解解，调节节pH值值约为66.8，煮煮沸，加加葡萄糖糖溶解后后，摇匀匀，滤清清，调节节pH为66.40.22。8.3 还还可使用用按处方方生产的的符合规规定的脱脱水培养养基，按按照使用用说明书书配制。8.4 培培养基配配制后应应尽快灭灭菌，避避免微生生物繁殖殖。一般般采用高高压蒸汽汽1211灭菌300分钟。8.5 制制备好的的培养基基应在22255保存，在3周周内使用用。8.6 培培养基的的无菌性性检查每批配制的的培养基基均应进进行无菌菌性检查查（可与与产品无无菌检验验同步进进行）。检检查时，每每批培养养基随机机取不少少于

11、5支支（瓶）培培养144天，应应无菌生生长。9 稀释液液、冲洗洗液的制制备9.1 00.1%蛋白胨胨水溶液液取蛋白胨11.0gg，加水水10000mll，微温温溶解，滤滤清，分分装后置置入压力力蒸汽灭灭菌器内内，1221灭菌300分钟后后，于4保存备备用。9.2 ppH7.0 氯氯化钠-蛋白胨胨缓冲液液取磷酸二氢氢钾3.56gg、磷酸酸氢二钾钾7.223g、氯氯化钠44.300g、蛋蛋白胨11.0gg，加水水10000mll。微温温溶解，滤滤清，分分装后置置入压力力蒸汽灭灭菌器内内，1221灭菌300分钟后后，于4保存备备用。9.3 浸浸提介质质：9gg/L无无菌氯化化钠溶液液，可直接接从有证

12、证单位采采购大输输液。10 对照照菌液制制备10.1 无菌检检验所用用的菌株株传代次次数不得得超过55代。10.2取取金黄色色葡萄球球的普通通琼脂斜斜面培养养物，接接种一白白金耳至至营养琼琼脂培养养基内，在在3035培养18244h后备备用，同同时制备备0.99%氯化化钠溶液液加入在在6支小小试管内内，每支支试管内内加9.0mll的0.9%氯氯化钠溶溶液，在在压力锅锅内经1121灭菌330miin备用用。将已已配好的的金黄色色葡萄球球菌培养养菌液取11.0mml加入入第一支支小试管管内，稀稀释成浓浓度1:10的的菌液；取第一一支试管管内1.0m l菌液液加入第第二支小小试管内内，稀释释成浓度度

13、1:1000的菌液液，同法法稀释成成浓度1:106（每mml含菌菌量1000CFUU）即可可。10.3 采用平平皿计数数法测定定活菌数数。11 无菌菌检验培培养温度度硫乙醇酸盐盐流体培培养基，置置3035培养。改良马丁培培养基，置置2328培养。12 无菌菌检验12.1 如产品品注册标标准中明明确“产品应应经过一一个确认认过的灭灭菌过程程”，则执执行122.1项下下各项。12.1.1 放样每个灭菌批批次按已已验证的灭灭菌工艺艺，在灭菌菌柜内相相应的位位置放置置适量菌片片，灭菌菌后对菌片进行行无菌检检验。12.1.2 菌菌片贮存存灭菌前、后后菌片应应按菌片片说明书书规定条条件保存存。（RREVE

14、EN公司司菌贮存存温度为为1527）12.1.3 接接种开启超净工工作台单单向层流流，在此此环境下下，分别别将灭菌菌后的菌片成成对放入入已灭菌菌的硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基中中。同时以以金黄色色葡萄球球菌作阳阳性对照照，以未未接种的的硫乙醇醇酸盐流流体培养养基和未未接种的的改良马马丁培养养基作为为阴性对对照。12.1.4 培养阳性对照管管于3035细菌培培养箱培培养488722小时。其余硫乙醇醇酸盐流流体培养养基于330335培养77天。改良马丁培培养基于于2328培养77天。12.1.5 结果判判定培养后，阳阳性对照照应有菌生生长，阴性对对照和被被检样品品未见需需气菌、厌厌气菌和和霉菌生生长

15、的为合格格。12.2 如产品品注册标标准中明明确产品品应进行行无菌检验验，则执执行122.2.112.22.5。12.2.1 抽抽样根据各自的的产品注注册标准准和相应应产品出出厂检验验规程的的规定，对对成品库库内的产产品进行行抽样。一般同一个灭菌批产品检验311个单位供试品。12.2.2 供供试液准准备优先采用将将供试品品或其有有代表性性的各部部分直接接投放入入培养基基内培养养的方法法，如供供试品不不适宜直直接投放放，可按按下列方方法制备备供试液液，应使使浸提介介质充分分洗提供供试品的的浸提表表面，供供试液制制备应按按无菌操操作法进进行，在在制备后后2小时时内使用用。根据供试品品具体特特性选择

16、择下列方方法：a) 管类类器具：按管内内表面积积每10cm2流过管管内腔11ml浸浸提介质质，流量量约为110ml/minn，收集到到无菌的的容器内内。b) 容器器类器具具：按容容器内表表面积每10cm2加入浸浸提介质质1mll的比例例，振摇摇数次。 c) 实体体类器具具：实体体类器具具按表面面及每110cm2加入浸提提介质11ml，振振摇数次次。收集上述冲冲洗液或或浸提介介质于无无菌容器器中。12.2.3 接接种12.2.3.11 薄膜膜过滤法法：优先先采用封封闭式薄薄膜过滤滤器（集集菌器），也也可使用用开放式式薄膜过过滤器。滤滤膜孔经经不大于于0.445。滤器器和滤膜膜使用前前应采用用适宜

17、的的方法灭灭菌，或或直接采采用无菌菌集菌器器。a、如采用用封闭式式薄膜过过滤器，取一副副三联式集菌器器，将供试试液通过过集菌仪仪过滤，使通过过每只培培养管的的量基本本均匀。然后通通过集菌菌仪一只只加1220mll改良马马丁培养养基，另另两只分分别加入入1200ml硫硫乙醇酸酸盐培养养基（其其中一只只做阳性性对照，内内加金黄黄色葡萄萄球菌液液1mll）。另另取一副副二联集集菌器，用用同批的的冲洗液液或浸提提介质1120mml通过过集菌仪仪过滤（每每只约550mll），同同法一只只加硫乙乙醇酸盐盐培养基基1200ml，另另一只加加改良马马丁培养养基1220mll分别作作阴性对对照。b、如用一一般薄

18、膜膜过滤器器，将供供试液过过滤后取取出滤膜膜，将其其剪成33等份，分分别置于于含500ml硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基及改良马马丁培养养基的容容器中，其其中两份份作检验验，一份份作阳性性对照。12.2.3.22 直接接接种法法：适用用于一次次性使用用注射针针、一次次性使用用静脉输输液针（包包括输液液器、输输血器、注注射器配配套使用用注射针针）。a、敷料供供试品：取规定定数量，每每个包装装以无菌菌操作拆拆开，于于不同部部位剪取取约1220mgg或1ccm3cmm的供试试品，接接种于各各管足以以浸没供供试品的的适量培培养基中中。b、无菌针针头：直直接投入入含155ml以以上硫乙乙醇酸盐盐流体培培养

19、基及及改良马马丁培养养基的容容器中。c、一次性性使用的的材料：拆散或或切成小小碎断，接接种于各各管足以以浸没供供试品的的适量培培养基中中。供试品按规规定量分分别接种种至各含硫硫乙醇酸酸盐流体体培养基基及改良良马丁培培养基的的容器中中，其中中一份作作阳性对对照。每个容器中中培养基基的用量量应符合合：接种的的供试品品体积不不得大于于培养基基体积的的10%，或培培养基的的装量足足以浸没没供试品品。每管培养基基的最低低用量硫乙乙醇酸盐盐流体培培养基每每管装量量不少于于15mml，改改良马丁丁培养基基每管装装量不少少于100 mll.12.2.4 培培养、观察上述含培养养基的容容器分别别置规定定温度的的恒温培培养箱中中，除阳阳性对照照管培养养4872小小时外，其其余管培培养144天。培培养期间间应逐日日