Skp2与P27kip1在鼻咽癌组织中的表达及意义

1、Skp2与P27kip1在鼻咽癌组织中的表达及意义【关键词】鼻咽肿瘤Skp2蛋白P27kip1蛋白细胞周期KEYRDSNaspharyngealarina;Skp2，prtein;P27kip1，prtein;ellyle鼻咽癌（naspharyngealarina,NP）为我国最常见的恶性肿瘤之一。多见于我国广东、广西等省，其发病率据国内观察为耳鼻咽喉科恶性肿瘤之首1，但它的发病机制尚未明确。肿瘤发生的共同特征是细胞周期调控机制的紊乱，导致细胞的失控性生长2。调控细胞周期的核心机制是由细胞周期蛋白（ylin），周期蛋白依赖性激酶（ylindependentkinase,DK）,周期蛋白依赖性

2、激酶抑制剂（ylindependentkinaseinhinitrs,KI）构成的调控网络。目前SKP2、P27kip1在各种肿瘤中的表达及其两者的相关性已成为研究热点，如淋巴瘤、消化系统肿瘤、肺癌、口腔鳞癌等方面，但其与鼻咽癌的关系国内外均未见有关报道。本课题旨在探讨SKP2和P27kip1在鼻咽癌组织中的表达和意义，进一步研究鼻咽癌的生物学特性，了解其发病机制，或能有一定的理论价值和临床意义。1材料与方法1.1实验对象收集贵阳医学院附属医院2003年9月至2005年9月门诊耳鼻喉科纤维镜检查鼻咽部非角化性癌活检组织及贵医附院病理科部分存档鼻咽部非角化性癌活检组织蜡块共39例，慢性鼻咽炎活检

3、标本24例。鼻咽癌组39例中，男25例，女14例；3272岁，按照鼻咽癌92TN分期标准（福州）分期：期6例，期8例，期10例，期15例。39例鼻咽癌患者均未行过放化疗，其中28例伴有颈淋巴结转移，15例伴有颅神经侵犯症状。慢性鼻咽炎组24例中，男10例，女14例，2568岁。所有标本经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色复检确诊。两组患者的年龄、性别差异无统计学意义，具有可比性。实验步骤均按试剂盒说明书进行，严格控制实验条件，每组实验均设阳性对照和用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照，每组均作常规HE染色。1.3结果判定Skp2、P27kip1均以细胞核或细胞核伴胞质内出现棕黄色颗粒为阳性

4、细胞，而只有胞浆出现棕黄色为非特异性染色。鼻咽癌组织以癌细胞核着色为阳性细胞；慢性鼻咽炎组织以黏膜上皮细胞核着色为阳性细胞。取染色良好（阳性细胞染色清晰，背景染色低）的组织切片，用半定量法4行结果判定。A按阳性细胞比例评分：在高倍镜下（400）随机选取5个阳性细胞数多的视野计数，计数阳性细胞及总细胞数，求出阳性细胞所占总细胞数的百分比，取其平均值，并计分：无细胞染色为0分,阳性细胞25%为1分，阳性细胞占26%50%为2分，阳性细胞占51%75%为3分，阳性细胞75%为4分。B按染色强度计分：不染色为0分,呈淡黄色为1分,呈黄色为2分,呈棕黄色为3分。最后以AB的值划定标准：3分可判为阳性，3

5、5分为（），68分为（2结果2.1Skp2和P27kip1蛋白在鼻咽癌和慢性鼻咽炎组织中的表达情况Skp2蛋白在鼻咽癌癌细胞核部位染色阳性，细胞浆中无表达，阳性细胞弥漫散布于鼻咽部黏膜上皮层及黏膜下，癌灶处癌细胞表现为Skp2蛋白染色强阳性（图1），而在慢性鼻咽炎组织中阳性染色较鼻咽癌组明显减少（图2）。39例鼻咽癌组织中Skp2蛋白总阳性表达率为71.79%，强阳性表达率为56.41%；24例慢性鼻咽炎组织中Skp2蛋白总阳性表达率为41.67%，强阳性表达率为25%，两组差异有统计学意义(2=5.63，P0.05)。鼻咽癌组织中P27kip1蛋白表达明显减少（图3），P27kip1蛋白在慢

6、性鼻咽炎黏膜上皮中分布未见明显特异性。39例鼻咽癌组织P27kip1蛋白总阳性表达率为35.90%，强阳性表达率为17.95%，显著低于其在慢性鼻咽炎的总阳性表达率79.17%，强阳性表达率58.33%（2=11.15,P0.01），见表。+P27kip1-+11691325743慢性鼻咽炎14445682.2Skp2和P27kip1蛋白表达与鼻咽癌多项临床病理特征的关系Skp2和P27kip1的蛋白表达与鼻咽癌的临床分期、颅神经侵犯有相关性（P0.05），与年龄、性别、鼻咽癌的分化程度、颈淋巴结转移无相关性（P0.05），见表2。2.3鼻咽癌中Skp2与P27kip1蛋白表达的关系经Spea

7、ran等级相关分析，在鼻咽癌中Skp2与P27kip1蛋白表达呈明显的负相关（rs=-0.373,P=0.019）。nSkp2+P值P27kip1+P值年龄60岁2315(65.22)0.1640.18660岁1613(81.25)性别男2517(68.00)0.2350.215女1411(78.57)组织学分类低分化3627(75.00)0.16913(36.11)0.46中高分化临床分期、期140.0260.035、期2521(84.00)颈淋巴结转移L(+)2822(78.57)0.10410(45.45)0.287L(-)颅神经侵犯N(+)14(93.33)0.0180.019N(-)

8、2414(58.33)12(50.00)3讨论细胞周期的运行受多种因素调控，有两个主要的调控点：一个处于G1/S转折点G1期检测点，是控制细胞进入S期的控制点；另一个处于G2/转折点G2期检测点。在G1期早期，ylinD和DK4,6复合物发挥正向调节作用，进入G1期中后期ylinE和DK2复合物进行正向调节5。本研究发现，P27kip1在慢性鼻咽炎组织中的阳性率为79.17%，而在鼻咽癌组织中的阳性率为35.90，明显低于慢性鼻咽炎组，两者差异有统计学意义(P0.05)。此结果支持体外细胞株检查几种即在静止期细胞中，P27kip1呈高水平表达，随着增生活性的增加，P27kip1蛋白水平下降。提

9、示在鼻咽癌的发生中P27kip1蛋白的减少起重要作用。对不同临床特征的鼻咽癌患者比较P27kip1表达，在组织学分化及淋巴结转移上未发现差异有统计学意义(P0.05)。但研究结果发现，P27kip1蛋白阳性表达率在临床分期、期及有颅神经侵犯组均明显低于、期和无颅神经侵犯组(P0.05)，提示P27kip1与肿瘤临床分期、颅神经侵犯有显著相关性，可能在鼻咽癌的发生发展中起重要作用。本研究中P27kip1蛋白表达与鼻咽癌组织学分级、淋巴结转移之间的差异无统计学意义。而iaparrn等9分析P27kip1蛋白在一系列不同阶段人类结肠癌标本中的表达，发现P27kip1的表达与肿瘤分级之间有显著的关系，

10、高中分化的肿瘤有P27kip1的高表达，而低分化的肿瘤显示低表达；Tan等10分析了202例T1a,T1b浸润性乳腺癌，发现P27kip1表达水平和淋巴结转移与乳腺癌生存率显著相关。这可能是因为鼻咽癌本身的病理特点98%属低分化鳞癌，本实验收集的标本中绝大多数亦为低分化鳞癌，中高分化组样本含量较小，来院就诊的病例大多属中晚期，已发生淋巴结转移的病例较多，本研究所收集的淋巴结阴性病例组样本含量较校目前，P27kip1蛋白已被证明通过Skp2依赖性泛素-蛋白酶体途径降解。本研究发现，Skp2蛋白阳性表达率与鼻咽癌临床分期、颅神经侵犯呈明显的相关性(P0.05)，提示Skp2可能在鼻咽癌的发生发展中

11、起重要作用，检测其蛋白表达对判断鼻咽癌的临床分期及恶性程度有一定意义。与P27kip1相同，Skp2蛋白表达与鼻咽癌的组织学分化、淋巴结转移无关。本研究结果显示，在鼻咽癌中Skp2蛋白和P27kip1蛋白表达呈显著负相关(P0.05)，与众多的文献报道一致。提示，(1)鼻咽癌中P27kip1低表达可能产生于Skp2高表达介导的P27kip1降解升高。由此可以推测，在鼻咽癌患者的鼻咽黏膜被覆上皮细胞中，Skp2过表达通过加速对P27kip1的泛素化降解，使细胞异常增殖不能得到有效抑制，导致细胞过度增殖，分化程度降低，最终发生癌变，此过程可能为鼻咽癌分子发病机制之一，可为鼻咽癌的诊治提供一定的理论依据；(2)Skp2有可能成为鼻咽癌治疗的新靶点。Skp2