寿胎丸对SD孕鼠生殖功能及其胚胎发育的毒性研究

1、寿胎丸对SD孕鼠生殖功能及其胚胎发育的毒性研究【摘要】目的观察寿胎丸对SD孕鼠生殖功能及胚胎发育的毒性。方法将孕鼠随机分成5组，即溶剂对照组、寿胎丸高剂量组简称高剂量组、寿胎丸中剂量组简称中剂量组、寿胎丸低剂量组简称低剂量组、阳性对照组。寿胎丸高、中、低剂量组采用灌胃给药。观察孕鼠增重、摄食量、交配率、受孕率等，并观察吸收胎、畸胎等异常状况。结果寿胎丸不同剂量对孕鼠生殖功能状态、胎仔活胎率、吸收胎率和畸胎率的影响，与溶剂对照组比拟差异均无统计意义。结论寿胎丸药液在本研究所确定的50g/kg质量浓度以下，初步认为对安康育龄SD孕鼠生殖功能及其胚胎发育最大无损害效应程度为50g/kg。【关键词】寿

2、胎丸；生殖毒性；平安性寿胎丸乃清代盐山名医张锡纯所创，出自?医学衷中参西录?，原为护胎而设，后经多年降临床医家们反复理论与锤炼，已成为治疗胎漏、胎动不安、自发流产、滑胎的首选方。寿胎丸广泛用于妊娠期,其药效已得到了充分肯定,但临床运用平安性研究至今未见详细报道。有效评价药物对女性生殖功能的影响有着深远的意义，女性生殖系统是药物作用的一个特有的靶器官，女性生殖系统复杂且所有配子在出生前就已形成,所以其损害可能是多靶点及永久性的,并可导致完全绝育1。有鉴于此，本实验通过其不同剂量寿胎丸对SD孕鼠体内染毒，进展生殖毒性测定,以期获得其继药效学之后的临床前毒效学资料，为其孕期合理和平安应用提供实验根据

3、。1材料与方法1.1材料1.1.1药液制备对所需中药药材的来源及品种进展鉴定，挑选优质正品，原料经品种鉴定无误后，再进展挑选和洗净，然后炮制、切片、烘干、粉碎。严格按照经典处方比例用量装备，制取工艺如下：取经加工炮制的标准中药饮片菟丝子、续断、桑寄生加蒸馏水68倍量，煎煮2次，每次1.5h，合并滤液，浓缩至相对密度为1.11.25060；参加乙醇使醇含量达65%，冷藏24h，醇液滤过，滤液回收乙醇，至无醇味；阿胶烊化；以上两液合并，滤过；滤液冷藏放置，视无沉淀析出；添加蒸馏水，调pH值至6.57.0,并调整至相当于含生药2g/L；精滤、灌封、灭菌。1.1.2主要试剂与仪器40%甲醛，北京化学试

4、剂公司消费；冰乙酸，北京化学试剂公司消费；95%乙醇，北京化学试剂公司消费；丙三醇，北京化学试剂公司消费。光学显微镜：日本LYPUSSZ-ST型。电子分析天平：美国AG-104，感量值0.01g。游标卡尺：天津仪器厂消费。1.1.3实验动物1.2方法1.2.1实验分组采用交配后动物分组法：将当日已交配受精鼠称重,按体质量排序，以每组5只1盒将受精鼠按体质量依溶剂对照组、寿胎丸低剂量组简称低剂量组、寿胎丸中剂量组简称中剂量组、寿胎丸高剂量组简称高剂量组、阳性对照组环磷酰胺组，代号P顺序随机分配，并尽量使各组受精鼠数相近。次日交配受精雌鼠再按体质量编号依次随机分配到前一日未分配组别或下一轮次组别中

5、。交配完毕前少量受精鼠再按体质量编号依次补充至受精雌鼠数较少的组别中，使各组受精鼠总数相近。最终各实验组分组只数见表1。1.2.2给药方法各剂量组大鼠分上下午2次固定时间灌胃给药，与人临床拟用处径一样，给药剂量见各表,高剂量相当于人临床用量的200倍。于妊娠期第6d开场给药，连续给药10d。给药期间依体质量变化随时调整给药体积。溶剂对照组：同期灌胃蒸馏水，给药体积设计与各剂量组给药体积相当，并依体质量变化随时调整给药体积。阳性对照组：采用腹腔注射给药，给药期限从妊娠第11d至妊娠第13d，给药剂量7g/kgd。1.2.3动物体征观察及体质量、摄食量测定给药期间每3天称1次体质量，并计数。给药日

6、起至处死日每日上下午观察大鼠各1次，记录动物外观、行为或异常体征。给药日起至处死日每3天测定1次每盒大鼠摄食量。1.2.4动物同笼交配、受精检查雌雄鼠每日16：00以11的比例放交配笼同笼交配，于次日8：00检查阴栓。发现阴栓记为交配受精，将已交配雌鼠称重。发现阴栓之日定为妊娠第0d，第2d为妊娠第1d，以此类推。交配期2周，记录每组受精鼠总数。1.2.5实验步骤及观测指标妊娠第20d颈椎脱臼处死孕鼠,处死后即称重,计算孕鼠体质量及增重，并计算摄食量。切开腹部暴露两侧子宫及内脏器官,并计数总着床数、黄体数。发现内脏异常做记录,并做组织病理学检查。纵向切开子宫,别离胎仔,记录死胎、活胎和早晚吸收

7、胎,计算孕鼠交配率、受孕率和死亡率。最后子宫做病理学检查。转贴于论文联盟.ll.1.3统计学分析全部数据统计分析均采用SAS9.13版软件，由计算机完成。各组孕鼠平均体质量、摄食量等计量资料以均数标准差s表示，数据采用t检验进展显著性分析。活胎、死胎、畸胎、早晚吸收胎等计数资料以百分率%表示，数据采用2检验进展显著性分析。2结果2.1寿胎丸对妊娠期雌鼠摄食量影响采用高中低不同剂量染毒，各剂量组雌鼠在整个妊娠期过程中的摄食量均与溶剂对照组相近，差异无统计意义P0.05。阳性对照组妊娠期雌鼠摄食量也与溶剂对照组相近，差异无统计意义P0.05。见表1。表1寿胎丸不同剂量对妊娠期雌鼠摄食量影响注：GD

8、2-GD5即妊娠期第2至第5d,其余类推。2.2寿胎丸对孕鼠体质量及妊娠期增重影响设高、中、低寿胎丸不同剂量分别对SD孕鼠染毒，结果高、中、低不同剂量组孕鼠妊娠期体质量变化均与溶剂对照组孕鼠根本相当,差异无统计意义P0.05。高剂量染毒组孕鼠妊娠期增重略低于溶剂对照组，但经统计学处理，差异无统计意义P0.05。而阳性对照组孕鼠GD20体质量变化及妊娠期增重明显低于溶剂对照组，差异有高度统计意义P0.01。分析原因可能与该药本身造成的母体毒性导致胎仔体质量较低有关。见表2。表2寿胎丸不同剂量对孕鼠体质量及妊娠期增重影响注：与溶剂对照组比拟*P0.01。妊娠期增重=GD20体重-GD6体重-子宫连

9、胎重。2.3寿胎丸对妊娠期雌鼠生殖状态影响1各实验组孕鼠受孕率为80.77%87.50%，寿胎丸高、中、低剂量组及阳性对照组均与溶剂对照组比拟，差异无统计意义P0.05。实验期内各组均未发现动物死亡。各实验组孕鼠的黄体数与总着床数相近，仅有少量着床前胚胎丧失，各剂量组及阳性对照组均与溶剂对照组比拟，着床前胚胎丧失率差异无统计意义P0.05。各实验组孕鼠平均着床数为11.7613.25，各剂量组及阳性对照组均与溶剂对照组相比，差异也无统计意义P0.05。见表3。表3寿胎丸不同剂量对妊娠期雌鼠生殖状态影响12.4寿胎丸对妊娠期雌鼠生殖状态影响2寿胎丸各剂量组活胎率为97.7498.51，溶剂对照组

10、活胎率为97.57，各剂量组与溶剂对照组比拟，其活胎率差异无统计意义P0.05。各剂量组孕鼠的死胎率与溶剂对照组相当，在0.00.4之间，仅偶见死胎。寿胎丸不同剂量组的吸收胎率，均与溶剂对照组相当，差异无统计意义。在胎鼠畸形方面，其高、中、低不同剂量组胎鼠的畸胎率0.75%1.54%与溶剂对照组1.24%相比，差异无统计意义P0.05。阳性对照组活胎率87.94%和死胎率0.39%均与溶剂对照组相近，但畸胎率37.61%和吸收胎率11.67%明显高于溶剂对照组，差异有高度统计意义(P0.01)。见表4。表4寿胎丸不同剂量对妊娠期孕鼠生殖状态影响2注：与溶剂对照组比拟*P0.013讨论合理使用药

11、物，特别是减少药物毒性对妊娠妇女机体的损害，一直是临床用药的宗旨。但是，许多临床中应用于妊娠期、围生期等中药或复方，由于其疗效肯定，而其潜在生殖或遗传毒性并没有引起人们足够重视，也正是由于这种无视，方药的潜在毒性可能直接或间接地作用于DNA分子，使DNA的复制或修复过程受阻，从而引起疾病发生，甚至遗传给下一代。目前国内外所涉及的药物生殖毒性研究方法数以百计，常用的也有十余种2。如致畸敏感期毒性试验、胚胎毒性试验、一般生殖毒性试验、围产期生殖毒性试验、行为畸胎学试验等。研究方法虽多，但根本上没有根据中医药自身特点所建立的生殖平安性研究体系。基于中医的辨证论治规律，方药的遣方配伍原那么，寿胎丸广泛

12、用于妊娠期，而胚胎器官形成期对药物作用最为敏感，为此，本研究采用动物胚胎致畸敏感期作为药物作用的时间靶点进展生殖毒性试验。本研究采用寿胎丸3个不同剂量对妊娠期雌鼠染毒，各剂量组雌鼠在妊娠期摄食量、体质量及增重均与溶剂对照组相近，说明药物本身没有造成明显的母体毒性而导致胚胎发育体质量偏低。剖宫检查时，未发现内脏异常，进一步说明药物对母体未见明显毒性。各实验组孕鼠受孕率、黄体数与总着床数相近，仅有少量着床前胚胎丧失，与溶剂对照组比拟，均未见明显差异。各实验组孕鼠平均着床数、活胎率，均与溶剂对照组相当，未见有明显差异。不同剂量组胎鼠吸收胎率、畸胎率与溶剂对照组相比，差异无统计意义。这提示寿胎丸对妊娠期孕