血小板糖蛋白特异性抗体在骨髓增生异常综合征患者中的表达及其意

1、血小板糖蛋白特异性抗体在骨髓增生异常综合征患者中的表达及其意【摘要】本研究讨论血小板糖蛋白特异性抗体在骨髓增生异常综合征ds患者发病中的作用。采用改良的aipa法检测血浆血小板糖蛋白特异性抗体(抗gpb/a抗体和抗gpb/抗体)。假设患者的d值大于正常d值的均数+3倍标准差那么为阳性。结果说明：ds组总阳性率为16.67%(5/30)，itp组总阳性率为46.67%(14/30)，两者之间差异有显著性p0.05。结论：部分ds患者的糖蛋白特异性抗体为阳性，这说明部分ds患者的血小板减少与免疫因素有关；血小板糖蛋白特异性抗体所致的血小板破坏在ds患者的血小板减少中可能具有一定作用，这为ds患者的

2、免疫抑制剂治疗提供了新的根据。【关键词】骨髓增生异常综合征血小板特异性抗体expressinfspeifiantibdiesagainstplateletglyprteinsinpatientsithdsanditssignifianedepartentfheatlgy,1departentfbstetris,2departentfediallabratryexainatin,thesendhspitalfshandnguniversity,jinan250033,hinakeyrdsyeldysplastisyndre;plateletspeifiantibdy;glyprteinjexph

3、eatl2022;15(1):95-98材料和方法一般资料血小板糖蛋白特异性抗体的检测血浆的别离及保存edta抗凝血2l离心后取上清，置80保存。多孔板抗体包被准备包被液10l,抗体终浓度为3g/l，加样,100l/ell，塑料薄膜覆盖,4过夜，用0.01l/lpbs+teen洗涤2次，每孔参加封闭液(0.01l/lpbs+teen+3%bsa)200l,置室温下30分钟，去除封闭液，控干，即用。单克隆抗体俘获制备单克隆抗体sz2或hip8稀释液(4g/l)，每孔参加50l单克隆抗体稀释液，室温孵育60分钟(摇床)，用pbs+teen洗板3次，待用于aipa。改良aipa取型全血50l,edt

4、a抗凝，离心别离血小板，用pbs+edta洗涤2次，以2lpbs+edta重新悬浮血小板，调节血小板浓度至1109/l，移至ep管中,每管血小板1108个，每管参加100l待测血浆,在室温下孵育60分钟，pbs+edta洗涤3次，然后用溶解缓冲液(含蛋白酶抑制剂)110l溶解血小板,置于摇床上,4孵育30分钟,离心30分钟，取100l上清液以400l稀释缓冲液稀释，加样于羊抗鼠俘获单克隆抗体包被的96孔板上,设双复孔,每孔参加100l稀释上清，室温孵育60分钟(摇床)，0.01l/lpbs+teen洗涤4次，每孔参加100l碱性磷酸酶标记的羊抗人igg13000，室温孵育60分钟(摇床)，0.

5、01l/lpbs+teen洗涤6次，加100lpnpp/底物缓冲液,孵育15-60分钟,至显色，全自动酶标仪分别于405n、495n波长处观察结果，405n处d值减去495n处d值为患者的d值,取2复孔的平均值为测定值，每板设4个正常对照,假设患者的d值大于正常d值的均数+3倍标准差那么为阳性。统计学处理结果以阳性率表示。两个率的比较采用卡方检验。d值采用t检验。结果各组血浆gp特异性抗体程度抗gpb/ad值：ds组为0.2730.026；itp组为0.4870.732；正常对照组为：0.2640.013。抗gpb/d值：ds组为0.3530.032；itp组为0.5390.733；正常对照组

6、为：0.3190.024。抗gpd值ds组与正常对照组相比，p0.01，差异具有显著性；itp组与正常对照组相比，p0.05，无显著性差异表1。血浆gp特异性抗体aipa法检测结果血浆gp特异性抗体ds组中抗gpb/a阳性者4例，抗gpib/阳性者2例，双阳性者1例；itp组中抗gpb/a阳性者10例，抗gpib/阳性者7例，双阳性者3例；正常对照组阳性者为0表2。抗gpb/a特异性抗体阳性率ds组为13.33%(4/30)，itp组为33.33%(10/30)，两组比较：2=3.35，p0.05，差异无显著性。与正常对照组比较：ds组p0.05，差异无显著性；itp组p0.05，有显著性差异

7、表2。抗gpb/特异性抗体阳性率ds组为6.67%(2/30)，itp组为23.33%(7/30)，两组比较：2=2.09，p0.05，差异无显著性。与正常对照组比较：ds组和itp组p值均大于0.05，无显著性差异表2。总阳性率ds组为16.67%(5/30)，itp组为46.67%(14/30)，两组比较：2=6.239，p0.05，两组之间有显著性差异。与正常对照组比较：ds组p0.05，差异无显著性；itp组p0.05，有显著性差异。表2。讨论在巨核细胞和血小板外表存在着大量的糖蛋白(gp)，其中最重要的是gpb/a、gpib/。这些gp分子不仅是血小板发挥功能所必需的成分，而且可以作

8、为血小板自身抗体的靶抗原。改良aipa法对免疫性血小板减少的的诊断具有极高的特异性,可达95%，对血浆gpb/a和gpib/抗体检测的敏感性达40%2。近年来的研究说明，部分ds患者存在自身抗体和单克隆免疫球蛋白病，表现为多种免疫球蛋白程度升高和多种自身抗体的产生3，4，提示部分ds患者存在体液免疫方面的异常。ds的血小板减少的原因通常认为是中枢性的，而burgeis等5对61例血小板减少的ds患者的血小板寿命进展了观察，结果发现15%9/61的患者血小板寿命缩短3.5天，对其中6例病人行脾脏切除术，术后患者血小板均增高。这些结果提示，在某些病例可能同时有外周血血小板降低是由血小板破坏造成的，

9、那么，外周血小板的破坏是否有免疫因素参与、与血小板gp特异性自身抗体是否有关，目前国内有关这方面的研究较少。为了明确血小板gp特异性自身抗体是否与ds患者的血小板减少有关。我们应用先进的改良aipa法检测了30例ds患者血浆中血小板gp特异性自身抗体抗gpb/a抗体和gpib/抗体的表达。结果显示，部分ds患者血浆中血小板gp特异性抗体为阳性，提示部分ds患者的血小板减少与免疫因素有关,是由血小板gp特异性抗体所致的血小板破坏造成的。这种破坏可能通过血小板gp特异性自身抗体与血小板膜外表糖蛋白结合完成的，一方面被抗体包被的血小板可通过巨噬细胞上的f受体与巨噬细胞相连，被巨噬细胞吞噬；另一方面抗

10、原抗体复合物可激活补体，直接破坏血小板，或通过3b与巨噬细胞上的3b受体结合，使血小板破坏增多。另外，巨核细胞外表亦表达gpb/a和gpib6，自身抗体与巨核细胞上相应的抗原结合，可干扰巨核细胞的增生、成熟和血小板的产生，或在骨髓内血小板即被活化的补体或巨噬细胞破坏，结果不仅使血小板破坏增加，而且使血小板生成减少7。这为ds的免疫抑制剂治疗提供了新的根据。本实验结果显示，ds组与itp组抗gp特异性抗体总阳性率的比较有显著性差异，提示改良aipa法检测患者血浆中血小板gp特异性抗体的表达有助于鉴别免疫性血小板减少和非免疫性血小板减少。致谢感谢山东大学齐鲁医院侯明教授及朱媛媛教师的支持与帮助！【参考文献】5burgeise,auliert,rse,etal.rlefsplenetyinthetreatentfyeldysplastisyndresithperipheralthrblytpenia:areprtnsixases.leukeia,2001;15:950-9536vainhenker,deshapsjf,bastinj,etal.tnlnalant