毕业论文-大血藤的病虫害鉴定及防治

1、PAGE 学科代码： 学 号： 本科毕业论文（设计）题目：大血藤的病虫害鉴定与及防治学 院： 环境与生命科学学院 专 业： 生物科学 班 级： 2009级 学生姓名： 指导教师： 2013年3月25日凯里学院本科毕业论文PAGE II目录 TOC o 1-3 h z u HYPERLINK l _Toc322813791 目录 PAGEREF _Toc322813791 h I HYPERLINK l _Toc322813792 摘要 PAGEREF _Toc322813792 h II HYPERLINK l _Toc322813793 关键词 PAGEREF _Toc322813793 h

2、 II HYPERLINK l _Toc322813794 Abstract PAGEREF _Toc322813794 h IIKeywords. PAGEREF _Toc322813794 h II HYPERLINK l _Toc322813796 0 引言 PAGEREF _Toc322813796 h 1 HYPERLINK l _Toc322813797 1 材料与方法 PAGEREF _Toc322813797 h 1 HYPERLINK l _Toc322813798 1.1试验时间、地点 PAGEREF _Toc322813798 h 1 HYPERLINK l _Toc32

3、2813799 1.2 实验材料 PAGEREF _Toc322813799 h 1 HYPERLINK l _Toc322813800 1.2.1 标本采集 PAGEREF _Toc322813800 h 1 HYPERLINK l _Toc322813801 1.2.2 生物防菌 PAGEREF _Toc322813801 h 1 HYPERLINK l _Toc322813802 1.2.3 试剂 PAGEREF _Toc322813802 h 1 HYPERLINK l _Toc322813803 1.2.4 仪器设备 PAGEREF _Toc322813803 h 1 HYPERLI

4、NK l _Toc322813804 1.2.5 PSA培养基的制备1 HYPERLINK l _Toc322813805 1.3试验方法1 HYPERLINK l _Toc322813806 1.3.1 病症的观察与描述1 HYPERLINK l _Toc322813807 1.3.2病原菌的分离与培养1 HYPERLINK l _Toc322813808 1.3.3 病原菌的鉴定 PAGEREF _Toc322813808 h 2 HYPERLINK l _Toc322813809 1.3.4 生物防菌对病原菌的抑制的测定 PAGEREF _Toc322813809 h 2 HYPERLI

5、NK l _Toc322813812 2 结果与分析2 HYPERLINK l _Toc322813813 2.1 病症的观察与描述2 HYPERLINK l _Toc322813814 2.2 分离培养结果2 HYPERLINK l _Toc322813815 2.3 显微镜镜检结果3 HYPERLINK l _Toc322813816 2.4生防菌预防结果与分析3 HYPERLINK l _Toc322813818 3 结论与讨论4 HYPERLINK l _Toc322813819 参考文献6 HYPERLINK l _Toc322813820 致谢7大血藤的病虫害鉴定及防治 摘要：为了

6、了解和鉴定出引起大血藤病害的微生物，通过组织分离法从叶片中分离得到病原菌，并对病原菌进行培养和鉴定。显微镜检的病原菌特征表明，引起大血藤病害的是丝核菌（Rhizoctonia)和链格孢属（Alternaria Nees)。引起玉泉的大血藤病害的这两种病原菌，可以通过生物防治来减少病害的危害。关键词：大血藤；病虫害；丝核菌；链格孢属；生物防治 Damage identification and control of the primary diseaseWu Jijin(environment and life science, Caili University Guizhou Kaili 55

7、6011) Abstract: in order to understand and identify the bacteria that cause Sargentgloryvine disease, pathogenic bacteria isolated from the leaves obtained by tissue isolation method, and culture and identification of pathogenic bacteria. Showed that the pathogen characteristics of microscopy, prima

8、ry disease is caused by Rhizoctonia (Rhizoctonia) and Alternaria (Alternaria Nees). The two pathogens Sargentgloryvine Stem disease in Yuquan, can reduce damage by biological controlKeywords: Caulis Sargentoxae; pests and diseases; Rhizoctonia; Alternaria spp.; biological control凯里学院本科毕业论文 PAGE 10 引

9、言 大血藤(Caulis Sargentodoxae）又名血藤、红皮藤、千年健等，为木通科植物大血藤的茎，生于山坡疏林、溪边；有栽培。主产湖北、四川、江西、河南、江苏、安徽、浙江、云南、贵州等地。落叶木质藤本，长达到10余米。藤径粗达9厘米，全株无毛 。当年枝条暗红色，老树皮有时纵裂 。大血藤茎含大黄素、大黄素甲醚、-谷甾醇、硬脂等多种化学成分。其茎可以入药，具有败毒消痈、活血通络、祛风杀虫的作用。治急慢性阑尾炎、风湿痹痛、赤痢、血淋、月经不调、疳积、虫痛、跌扑损伤等。其花为总状花序，长6-12厘米，花为紫色，花期4-5月，果实的颜色由绿色到蓝紫色，成熟为红色，果期6-9月，花和果都具有很高的

10、观赏价值。所以，大血藤由于具有很高的经济价值而被广泛的种植。 但近几年来，大血藤却遭受很多种病害，严重的影响了它的生长发育，降低了它的药用价值和观赏价值，引起了政府、广大农民、专家、学者的重视。引起大血藤病害的原因多种多样，如今经过前者研究得之的有：大血藤黄化病；大血藤炭疽病；蜂、袋蛾类、红蜡蚧、螨类、刺蛾类等引起的病害。本文对大血藤进行初步的病害分析，简要提出对大血藤几种病的防治措施，以期为贵州省黔东南州大血藤病害的研究有一定的参考价值。 而本文从生防菌防治的角度提供了新的视野，采用组织分离法分离得到大血藤丝核菌、链格孢属病原菌，通过对病原菌的培养性状、分生孢子的形态观察，证明了引起大血藤为

11、丝核菌、链格孢属病原菌。本实验用F19、F18、F2三种生物防菌对丝核菌、链格孢属具有高效的抑制作用，特别是F19和F2两种生防菌。这实验说明了除了传统的化学试剂、农药灭菌，我们还可以产用新的方法生物防菌。它避免了传统的农药灭菌引起病原菌的抗药性增强，造成药物的浪费，灭菌效果低以及药物沿着食物链和食物网集留在更高的营养极，给生物体带来危害的情况。并且它用量低，专一性强。从生态系统的平衡和经济的角度来说，它更科学，更实用。1 材料与方法1.1 试验时间、地点生物实验室和显微镜实验室进行。1.2 实验材料1.2.1 标本采集 分别对玉泉和银屏县边沙村两地大血藤进行病害标本的调查和采集，并对整植株危

12、害程度进行记录，采集新鲜标本用于室内分离鉴定。1.2.2 生物防菌 从北京微生物研究所购得，有F19、F18、F2等1.2.3 试剂 无水乙醇、70的酒精、工室外试验于2012年1月分别在玉泉进行，室内试验在凯里学院环境与生命科学学院微业酒精、升汞、链霉素。1.2.4 仪器设备 电热恒温培养箱、高压蒸汽灭菌锅、无菌操作台、显微镜等1.2.5 PSA培养基的制备 取1000克干净水倒入电饭锅中，再将称好的200克的马玲署块、17克的蔗糖放进水里，加热，用玻璃棒不断搅拌，至马铃薯肉汁几乎溶解于水，停止加热，过滤，将17-18克的琼脂倒进滤液中，充分搅拌，待其冷却到50度左右，装入多个培养瓶中，封装

13、，再放入高压蒸汽灭菌锅里进行121度的长达30分钟的高压灭菌。1.3 试验方法1.3.1 症状的观察和描述 到玉泉和锦屏县边沙两地对大血藤的病害症状和发病程度进行观察，主要从病组织的表面病斑形态、颜色、大小及危害程度等方面进行观察和描述，并对危害组织进行拍照。1.3.2 病原菌的分离和培养 对于病原菌的真菌分离采用组织表面分离法。取病健交界处的叶片小块组织2-4mm，先用70%的酒精对大血藤叶片病斑部进行表面消毒处理，然后放入0.1%的升汞溶液中进行消毒2分钟，再放进无菌水中漂洗3次，移入PSA平板内培养。在PSA培养基上28培养34天，病组织的周围长出不同的菌丝体，挑取外围新长的菌丝，分别移

14、置到新的添加链霉素的PSA培养基上，依次重复多次，直至得到纯的病原菌进行纯培养，然后对菌落进行观察、描述和拍照。1.3.3 病原菌的鉴定 对培养的真菌进行显微观察、描述以及照相。主要观察孢子的形态结构、颜色、菌丝的颜色是否有隔和分支。操作步骤：用灭菌后的接种针挑取少许菌丝，放在加有1 滴浮载剂（水）的载玻片上，盖上盖玻片后放在光学显微镜下观察、描述。同时对在显微镜下的病原菌进行拍照，以及对孢子大小进行测量、记录。1.3.4 生物防菌对病原菌的抑制的测定 通过观察F19、F18、F2三种生防菌从三个空间方向对病原菌的长势的影响，可以比较出哪种生防菌的抑制作用更强。2 结果与分析通过实验采用组织表

15、面分离法分离和培养得到病菌，经显微镜检查的结果，通过症状观察以及危害程度进行分析，最后鉴定为引起玉泉大血藤病害的的病原微生物是丝核菌和链格孢属。2.1 病症的观察描述 图1 大血藤丝核菌病害病叶 图2 大血藤病害病叶左图叶片病斑为黄色、黑色、褐色的圆点、圆形或不规则的图形，成孤立的块状或网状沿着叶缘布满整片叶片。病斑大小约为1-20mm，病害的部位变得枯萎、腐烂，甚至空洞（见图1）。 右图叶片病斑为黄色或黑褐色，近似圆或椭圆形，大小约为2-10，呈块状和圆形状孤立分布在叶尖和叶中，病害使叶尖枯萎j继而腐烂，病斑中心变得空洞(见图2）。2.2 分离培养结果 图3 丝核菌的菌落正面观 图4 丝核菌

16、的菌落背面观 丝核菌在PSA培养基上培养时，菌落很大，呈棉花状生长。菌落中心向上突起，边缘整齐光滑，质地均匀柔润，不透明。菌落初期为白色，三天之后变苍白色，逐渐变为微黄色。培养基的背面观，呈鲜红色，中心呈红褐色，菌落具有明显的同心轮纹，由外到内轮纹颜色由浅到深。再培养到后期，培养基的背面观呈黑褐色（如图3，4）。 图5 链格孢属的菌落的背面观 图6 链格孢属的菌落正面观 链格孢属在PSA培养基上培养时，菌落较大，呈绒毛状生长，形成不规则“四叶草”型，菌落边缘粗糙，不光滑，质地不均匀不透明，不易挑取。中央长势较周围快。其培养基背面观呈灰黑色，中央部较周围颜色深（如图5，6）。2.3 显微镜镜检结

17、果丝核菌rhizoctonia 属半知菌亚门,无孢目,丝核菌属。菌丝褐色,蛛网状,多直角分枝,近分枝处形成隔膜,缢缩状。病菌菌丝粗壮，初时无色，老熟时淡褐色，老熟菌丝常呈一连串桶形细胞，并可交织而成质地疏松的黑褐色菌核。 主枝细胞念珠状，两菌丝有时以短分枝相联结，菌丝表面细胞为褐色，内部土白道浅褐色。分枝有性态为亡革菌属（Thanatephorus），常不发生。常见的有立枯丝核菌（R. solaniKhn.），引致多种植物立枯病(如图8)。链格孢属（Alternaria alternata）属半知菌纲，链孢霉目，黑霉科.。链格孢属分生孢子顶部小膨大，分生孢子梗顶部有1个至多个孢痕，分生孢子呈典

18、型的倒棒状，分隔处隘缩明显或不明显，一般成链，为褐色。菌丝灰色至黑色，多成直角分支，菌丝形成隔膜，隘锁状。生长迅速，扩散快（如图7）。 图7 链格孢属的菌丝和孢子 图8丝核菌的菌丝 2.4 生防菌预防结果与分析通过F19、F18、F2三种生防菌从三个空间方向对链格孢属病原菌的长势的影响，可以比较出这三种生防菌的抑制效果。本次试验得出F19、F18、F2三种生防菌对上诉病原菌均有抑制作用，其中F18的抑制作用最强。因为细菌与真菌存在着竞争关系，生物防治主要是利用有益微生物对病原物的各种不利作用，来减少病原物的数量和削弱其致病性。有益微生物产生抗菌物质，抑制或杀死病原菌，还能诱导或增强植物杭病性，

19、通过改变植物与病原物的相互关系，抑制病害发生。有益微生物对病原物的不利作用主要有抗菌作用(antibiosis)、溶菌作用(Lysis)、竞争作用 (competition )、重寄生作用 (hyperparasitism )、捕食作用 (predation )相交互保护作用(crossprotection )等（如图9）。 图9 生防菌与病原菌的相互作用3 结论与讨论 大血藤因其较高的药用价值和观赏价值而被越来越多国内的专家、学者所研究，他们大多是研究它的化学物质成份，药用成份，也有少数学者研究了它的病虫害鉴定及药物防治。本次研究通过科学合理的实验方法证实了药用大血藤当前导致病害的病原菌为丝

20、核菌和链格孢属，并改了以往传统的药物防治采用生物防治，取得了良好的效果，为大血藤真菌病害的预防和鉴定提出了一定的理论依据和科学基础。丝核菌是一种不产生任何无性孢子，以菌丝或菌核形态存在于自然界的土壤习居菌，其中大部分是重要的植物病原菌。该菌的菌核可以残留在土壤的表面，在土壤存活2-3年，遇到足够的水分和较高的湿度时，菌核萌发出菌丝通过雨水，土壤中的水的流动传播蔓延，病菌的菌丝直接侵入叶片，破坏叶肉组织，造成叶片收缩、干枯或萎焉，随之渐渐枯死。链格孢霉菌丝，大量存在于土壤、空气和作为培养料的各种有机基质上，其孢子通过空气传播。在灭菌不彻底，无菌操作不严及培养料含水量偏高和温度大的条件下，有利于发

21、生。该属引起多种水果蔬菜等黑腐病，这种真菌在很广的范围内均可以生长良好，甚至在2的低温条件下也可缓慢生长，链格孢可通过机械伤口、冷害损伤及衰老组织的自然开孔侵入，甚至也可以通过健康的表皮。每逢4月到7月，黔东南地区多雨高温，正是这两种病原菌的繁殖期和生长期，大量茂盛的叶片也同样遭受着病害的威胁，严重的影响了植物的生长。下面基于丝核菌和链格孢属的生长条件提出一些防治措施。 （1）农业措施：合理规划，规范管理。种植前进行土壤灭菌，培育无毒无病幼苗。采用大棚种植的，应合理规划好植株与植株见得距离，行与行的距离，做到通风透光。建立良好的灌溉系统和排水系统，以减少病原菌的传染。入秋后注意落叶的收集，统一处理，可进行燃烧。 （2）生物防治：在幼苗种植后，可每月喷洒一次F19、F18、F2三种生防菌，依情况喷洒