白血病疾病的常用实验检测培训课件

1、了解骨髓细胞学的临床应用了解血细胞发育过程中的形态变化规律和各系血细胞的形态学特点 常见细胞化学染色的临床意义本章节教学目的和任务 良性白细胞疾病的实验诊断了解骨髓细胞学的临床应用了解血细胞发育过程中的形态变化规律和血细胞的正常形态学特征血细胞的正常形态学特征形态学特点红细胞淋巴细胞粒细胞单核细胞巨核细胞血细胞的形态学特点形态学特点红细胞淋巴细胞粒细胞单核细胞巨核细胞血细胞的形态学核染色质 胞核 胞浆核仁胞质颗粒细胞大小 大小细致粗糙 疏松致密少多 核质比：大小大小 圆凹陷分叶有无 无少多 小淋巴细胞无颗粒血细胞发育过程中的形态学变化规律 原始粒细胞比早幼粒小 巨核细胞：小大核染色质 胞核 胞

2、浆核仁胞质颗粒细胞大小 大小细致粗糙一、骨髓细胞学的临床应用 适应证：1、患者多次检查外周血象有异常。2、患者有原因未明的肝、脾、淋巴结肿大。3、查明感染的原因，如黑热病患者通过骨髓涂片 查找黑热病原虫等。4、查恶性肿瘤有无骨髓转移。5、助诊类脂质沉积病，如戈谢病及尼曼皮克病。6、血液病进行鉴别诊断和疗效观察、利用骨髓液进 行祖细胞培养及染色体核型检查等。7、提高某些疾病诊断率。检验疟原虫、黑热病原虫等一、骨髓细胞学的临床应用 适应证：禁忌证：1、血友病患者，由于凝血因子缺陷引起的出血性疾病。2、晚期妊娠的孕妇作骨穿刺术应慎重。 禁忌证：评价1) 辅助诊断 2) 鉴别诊断 3) 判断疗效评价注

3、意事项1) 骨髓取材,涂片,染色良好时,才能进行骨髓检查.2) 骨髓抽取0.2-0.3ml，骨髓片应在采集后迅速涂片，避免凝固。注意事项四、骨髓细胞学检查的内容低倍镜高倍镜有核细胞分类；计算粒/红比值；观察有无特殊细胞和寄生虫。血片检查骨髓有核细胞增生程度（增生极度活跃、增生明显活跃、增生活跃、增生减低、增生明显减低）巨核细胞计数和分类；其它特殊细胞。 有核细胞分类；观察有无特殊细胞和寄生虫。四、骨髓细胞学检查的内容低倍镜高倍镜有核细胞分类；计算粒/红五、常见细胞化学染色的临床意义铁染色等中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）糖原染色（PAS）酯酶染色（E）髓过氧化物酶染色（POX）常用的细胞化学染色

4、五、常见细胞化学染色的临床意义铁染色等中性粒细胞碱性磷酸酶（过氧化物酶染色（POX）原理： 血细胞中的过氧化物酶能分解试剂中的底物H2O2，释出新生态氧，使无色联苯胺化为蓝色联苯胺，后者与亚硝基铁氰化钠结合形成蓝黑色的颗粒，沉着于细胞质中。过氧化物酶染色（POX）原理：POX染色示意图POX染色示意图临床意义 主要用急性白血病的鉴别急性淋巴细胞白血病（ POX3%阳性）临床意义1.急性粒细胞白血病I型原粒细 阴性，型原粒细胞及其各阶段粒细胞 均阳性， M3型最强。（POX3%阳性） 2.急性单核细胞白血病 原单、幼单细胞 弱阳性（POX3%阳性） 3.急性淋巴细胞白血病 阴性（POX3%阳性）

5、 4.巨核细胞白血病 阴性（POX3%阳性） 1.急性粒细胞白血病非特异性酯酶染色（NSE）主要存在于单核细胞和组织细胞内。又称单核细胞酯酶染色原理： 血细胞内的-醋酸萘酚酯酶又称非持异性酯酶。其能将基质液中的-醋酸萘酚水解，产生-萘酚,萘酚再与重氮染料偶联，形成不溶性的有色沉淀，定位于胞质内。非特异性酯酶染色（NSE）主要存在于单核细胞和组织细胞内。又临床意义：主要用于鉴别急性单核细胞白血病和急性粒细胞白血病。1.急性单核细胞白血病 阳性 可被氟化钠（NaF）抑制（抑制率大于50%）2.急性粒细胞白血病阴性或弱阳性其弱阳性反应不被NaF抑制（抑制率小于50%）临床意义：单核细胞（a）、血小板

6、（b）、巨核细胞（c）胞浆中有弥漫性灰黑色阳性反应产物，淋巴细胞（d）呈点状阳性反应，幼红细胞（e）呈阴性反应单核细胞（a）、血小板（b）、巨核细胞（c）胞浆中有弥漫性灰A：急性单核细胞白血病呈强阳性B：急性单核细胞白血病细胞NSE活性明显受NaF抑制C：急性原粒细胞白血病呈点状弱阳性反应D：急性原粒细胞白血病细胞不受NaF抑制A：急性单核细胞白血病呈强阳性特异性酯酶染色（SE） 氯化醋酯AS-D萘酚酯酶主要分布于中性粒细胞中，又称粒细胞酯酶。原理：此酶能将基质液中的氯化醋酯AS-D萘酚水解，产生萘酚AS-D，进而与重氮盐GBC偶联，形成不溶性的红色沉淀，定位细胞质内。特异性酯酶染色（SE）

7、氯化醋酯AS-D萘酚酯酶主要分临床意义：1.急性粒细胞白血病时原粒细胞和早幼粒 细胞酶活性明显增强 强阳性；2.急性单核细胞白血病及急性淋巴细胞白 血病时 阴性；3.急性粒-单核细胞白血病 白血病粒细胞（粒系） 阳性， 白血病细胞（单核系） 阴性。临床意义：A+B：急性早幼粒细胞白血病细胞胞浆内有大量蓝 色阳性反应物质C：急性原粒细胞白血病（M1型）呈阳性反应D：急性淋巴细胞白血病呈阴性反应A+B：急性早幼粒细胞白血病细胞胞浆内有大量蓝 -NBE染色主要存在与单核系细胞中，故又称单核细胞酯酶。 临床意义： 急性粒-单核细胞白血病 原粒细胞NAS-DCE染色阳性或弱阳性 单核系细胞-NAE和-N

8、BE染色阳性-NBE染色糖原染色（PAS）原理：又称过碘酸-雪夫(Schiff)反应。过碘酸能将血细胞内的糖原氧化，生成醛基。醛基与Schiff液中的无色品红结合，形成紫红色化合物，定位于胞质内。糖原染色（PAS）原理：又称过碘酸-雪夫(Schiff)反应临床意义：1.鉴别淋巴系统增生性质 恶性增生时PAS反应 强阳性（阳性反应见于急、慢性淋巴细胞白血病、淋巴瘤等）。2.鉴别红系增生性质 恶性增生者，如红血病、红白血病其原幼红细 胞 强阳性 增生性贫血和巨幼红细胞性贫血 阴性。3.巨核细胞 强阳性（有助于巨核细胞白血病的诊断）。临床意义：糖原染色：成熟粒细胞（a），巨核细胞（b）呈强阳性反应，

9、单核细胞（c）呈弱阳性反应，正常幼红细胞（d）呈阴性反应糖原染色：成熟粒细胞（a），巨核细胞（b）呈强阳性反应，单核A：慢性淋巴细胞白血病细胞呈红色粗颗粒状阳性反应B：急性淋巴细胞白血病细胞呈红色颗粒状阳性反应，幼红细胞呈阴性反应A：慢性淋巴细胞白血病细胞呈红色粗颗粒状阳性反应A：急性红白血病幼红细胞呈红色阳性反应B：巨幼细胞性贫血时巨幼红细胞呈阴性反应A：急性红白血病幼红细胞呈红色阳性反应中性粒细胞碱性磷酸酶染色（NAP）原理：碱性磷酸酶在碱性条件下将基质液中的-甘油磷酸钠水 解产生磷酸钠。磷酸钠依次与硝酸钙、硝酸钴、硫化胺 发生 一系列反应形成不溶性棕黑色的硫化钴，定位于酶活性之处。中性粒

10、细胞碱性磷酸酶染色（NAP）原理：临床意义：1.鉴别慢性粒细胞白血病及中性粒细胞型类白血病反应 前者阳性率及积分值均极低，甚至为“0”， 后者强阳性，阳性率可达100%，积分值可达400。2.初步鉴别感染的类型 在急性细菌性感染时NAP阳反应强，而病毒和寄生虫及结核菌感染时NAP染色结果多在正常范围。3.再生障碍性贫血（AA)和阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH） AA NAP染色常增高，PNH NAP染色常减低4.恶性组织细胞病与反应性组织细胞增生症的鉴别 前者常降低，后者常增高。5.真性红细胞增多症与继发性红细胞增多症的鉴别 前者常增高，后者无明显变化。临床意义：1.鉴别慢性粒细胞白血病及中性

11、粒细胞型类白血病反应NAP染色：中性粒细胞呈不同程度阳性a：+ c：+ e：阴性反应b：+ d：+ f：嗜酸细胞呈阴性NAP染色：中性粒细胞呈不同程度阳性慢性粒细胞白血病（CML）中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色：未见阳性反应慢性粒细胞白血病（CML）中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色急性化脓性感染NAP染色：NAP反应阳性率及积分均增高，片中4个细胞均为+阳性反应急性化脓性感染NAP染色：铁染色原理： 细胞外含铁血黄素和幼红细胞内的铁与酸性亚铁氰化钾发生普普鲁士蓝反应，形成蓝色的亚铁氰化铁沉淀普鲁士蓝），定位于含铁的部位。故此法又称为普鲁士蓝反应。铁染色原理：应用：鉴别缺铁性贫血与非缺铁性

12、贫血 前者细胞外铁减少甚至阴性，（为“-、+-”），细胞内铁平均为5.9%,经有效铁剂治疗后,外铁增多.因此骨髓铁染色为诊断缺铁性贫血及指导铁剂治疗的重要方法。诊断铁粒幼细胞性贫血 铁粒幼细胞增多, 可达30-90%. MDS的RAS型也可见环形铁粒幼细胞增多(占全部幼红细胞的15%或更多),借此可与再生障碍性贫血鉴别,此贫血不会出现环形铁粒幼细胞。应用：细胞外铁染色：A：+阳性反应 B：+阳性反应 C：+阳性反应 D：+反应 E：+阳性反应 F：阴性反应细胞外铁染色：细胞内铁染色：A：环形铁粒幼红细胞（）和铁粒红细胞（ ）B：含2-5个颗粒的铁粒红细胞C：含两个小颗粒的巨幼红细胞D：细胞内无

13、铁颗粒的幼红细胞细胞内铁染色：白细胞免疫表型分析概念： 细胞免疫分型细胞免疫标记检测 用单克隆抗体及免疫学技术对细胞膜表面和细胞质存在的特异性抗原进行检测。 用来分析细胞所属系列，分化程度和功能状态的一种方法。白细胞免疫表型分析概念：（一）检测方法12免疫荧光法免疫酶染色法（一）检测方法12免疫荧光法免疫酶染色法巨核细胞和血小板淋巴细胞系列红细胞系列造血干细胞B淋巴细胞系髓系细胞CD41,CD42,CD61等血型糖蛋白A或BCD1,CD2,CD3,CD4,CD5,CD7,CD8，CD9，CD19，CD20等CD34+、CD90+、Lin+CD34+、CD19+(二)细胞免疫分型的临床应用CD1

14、3,CD14,CD15,CD32,CD33等有助于识别不同系列的细胞巨核细胞和血小板淋巴细胞系列红细胞系列造血干细胞B淋巴细胞系（三）急性白血病细胞免疫表型特点（三）急性白血病细胞免疫表型特点白血病疾病的常用实验检测培训课件白血病疾病的常用实验检测培训课件临床意义：急性白血病淋巴瘤： 1）免疫表型分析是形态学与细胞化学分型基础上的补充和深化 2）识别生物学和预后相关的白血病亚型并达到诊断与治疗标准化 3）检测白血病细胞表达的某些与细胞黏附、增殖、分化、凋亡、耐药等相关的蛋白成分 4）微量残留白血病的检查、判断疗效或预后。临床意义：血细胞染色体分析临床意义：（1）恶性白细胞疾病的诊断与分型（2）

15、监测恶性白细胞疾病的环节、预后及复发血细胞染色体分析基因诊断 已经证实部分造血与淋巴组织肿瘤染色体异常形成融合基因在白血病的发病中起重要作用。基因诊断第三节 常见良性白细胞疾病的实验诊断一、白细胞减少症白细胞减少症主要指中性粒细胞减少症外周血中性粒细胞数量轻度减少1.5109L中度减少（0.51.0）109L重度减少0.5109L （又称粒细胞缺乏症）第三节 二、传染性单核细胞增多症传染性单核细胞增多症患者多有高热、淋巴结肿大和咽喉肿痛等症状，主要见于青少年发病。WBC增高，可高达（3050）109L，单个核细胞（淋巴细胞、单核细胞和异型淋巴细胞）可高达60%以上。嗜异性凝集试验阳性是EBV-

16、IM的诊断性试验。二、传染性单核细胞增多症三、类白血病反应分为五种主要类型：1）中性粒细胞型；2）淋巴细胞型；3）单核细胞型；4) 嗜酸性粒细胞型；5）红白血病型。 中性粒细胞的类白血病血象胞质中有中毒颗粒、空泡变性、固缩及碎裂等中毒现象。核左移甚至出现幼稚粒细胞等感染中毒性形态学表现。三、类白血病反应常见血液病的血液学特征白血病1骨髓增生异常综合征（MDS）2多发性骨髓瘤3原发性血小板减少性紫癜（ITP）4常见血液病的血液学特征白血病1骨髓增生异常综合征（MDS）2一、白血病概念：是造血系统的一种恶性肿瘤。特征： 是骨髓或其他造血器官中白血病细胞（常为某系例原始或幼稚细胞）无控制地增生，并浸

17、润其他组织和器官。骨髓和外周中常有血细胞质和量的异常。表现： 临床上常有贫血，发热，出血和肝脾淋巴结肿大等表现。一、白血病概念：是造血系统的一种恶性肿瘤。白血病疾病的常用实验检测培训课件急性白血病分类FAB分类法：1976年法（F），美（A），英（B）三国：7位血液学专家组成的协作组通过研究提出了急性白血病的分类和诊断标准的方案。（以后又数次修订）我国分型1980年以FAB分型标准为模板，结合我国特点制定了我国急性白血病的分类标准。1986年天津会议上又进行修改。急性白血病分类FAB分类法：急性白血病分类急性髓系白血病（AML）急性淋巴细胞白血（ALL）急性白血病分类急性髓系白血病（AML）急

18、性淋巴细胞白血（AL急性淋巴细胞白血病 ALL为单克隆淋巴细胞恶性增殖所致，好发于儿童及青状年，患者多有全身淋巴结肿大，半数病例肝，脾肿大，骨关节痛较多见，易伴发中枢神经系统白血病。急性淋巴细胞白血病 ALL为单克隆淋巴细胞恶性增殖所致ALL分型L1型以小细胞为主（细胞直径12m），细胞大小不均。核形不规则，常见凹陷或折叠，核染色质疏松，有1个或多个较大而清楚的核仁。胞质量丰富，着色深浅不定L3型以大细胞为主，细胞大小一致。核形规则，核染色质均匀致密细点状。，有1个或多个明显核仁。胞质丰富，呈深蓝色，内含明显小空泡而呈峰窝状ALL分型L1型以小细胞为主（细胞直径12m），大小一致1. 急性粒细

19、胞白血病部分分化型，原粒细胞30%-89%早幼粒细胞以下阶段细胞10%，单核细胞20%急性早幼粒细胞白血病（颗粒增多的早幼粒细胞白血病），骨髓中以多颗粒的异常早幼粒细胞为主，此类细胞30% NEC,胞质中有大量密集的粗大颗粒,常有成束的棒状小体(Auer小体)急性单核细胞白血病，骨髓中原单核、幼单核及单核细胞大于等于80%（NEC）急性红白血病，骨髓中红系细胞大于50%，NEC中原始细胞大于30%急性巨核细胞白血病，骨髓中原幼巨核细胞大于等于30%。急性粒细胞白血病未分化型M7型M6型M5型M4型M3型M2型M1型急性粒-单核细胞白血病，骨髓及外周血中粒系和单核系两系均增生。骨髓中原始细胞30

20、%NEC，各阶段粒细胞20%，各阶段单核细胞20%急性髓细胞性白血病（AML）分类1. 急性粒细胞白血病部分分化型，原粒细胞3慢性白血病慢性粒细胞性白血病（CML） 造血干细胞的克隆性增殖性疾病临床表现：脾明显肿大和粒细胞显著增多。细胞遗传学特征：ph染色体和ab1/bcr融合基因。病程：1-4年，自然临床过程式，慢性期加速期急变期 血象，骨髓象特征见书上描述。 白细胞显著增高，多数在100-300109/L，高者可500109/L以上。 分类计数粒细胞比例增高，可见各阶段粒细胞，以中性中幼粒细胞以下阶段为主，尤以中性晚幼粒细胞为多见，原粒细胞和早幼细胞 10%。嗜碱性粒细胞增高为慢粒的特征之一，嗜酸性粒细胞也可增高,血小板早期增多或正常,疾病加速期及急变期,血小板可进行性下降。慢性白血病慢性粒细胞性白血病（CML）白血病疾病的常用实验检测培训课件慢性淋巴细胞白血病（CLL）多见于60岁以上的