DHA对MC增生的抑制作用

1、DHA对MC增生的抑制作用DHA对MC增生的抑制作用摘要目的:观察二氢青蒿素(DHA)对大鼠系膜细胞(MC)增生的抑制作用.方法： 采用MTT掺入方法,观察不同浓度DHA和不同作用时间各组体外培养的MC增生 水平.结果：DHA对MC增殖有显著的抑制作用，代写硕士论文其抑制作用呈浓度 依赖性和时间依赖性.LD50为197p mol/L. DHA作用72 h后，从0到 100mol/L浓度梯度，以100mol/L对MC增生的抑制作用最为显著；DHA 30mol/L作用072 h,以72 h对MC增生的抑制作用最为显著(P001).结论: DHA能够抑制大鼠MC增生.关键词 二氢青蒿素； 系膜细胞；

2、 MTT系膜细胞(mesangial cells, MC)是肾小球中主要固有细胞之一，MC增生及由 此引起的细胞外基质(ECM)分泌增加最终导致肾小球硬化.因此MC的增生在肾小 球硬化的发生发展中起重要作用.二氢青蒿素(dihydroartemisinin, DHA)是中 草药青蒿的提取物青蒿素及其衍生物在体内的代谢产物和有效成份.近年的研究 报道,青蒿素及其衍生物对肿瘤细胞在体外有杀伤作用,能显著抑制体外培养肿 瘤细胞的异常增殖1,并对大鼠移植纤维肉瘤的生长有抑制作用2.本实验观 察DHA对MC增生的抑制作用，旨在初步探讨DHA对肾脏疾病的治疗作用.1. 材料与方法材料大鼠肾小球系膜细胞株由

3、上海第二军医大学梅长林教授惠赠；MTT购自美国 Sigma公司;酶联免疫检测仪(ELX-800)美国Bio-Tek公司制造;细胞培养箱(311 型)美国Thermo Forma公司制造；DHA购自重庆华立武陵山制药有限公司.DHA 的配制：以少量二甲基亚砚(DMS0)溶解DHA配成浓度为02 mol/L的母液，超声 波助溶，4C保存;实验前用培养基稀释至所需浓度(DMSO终浓度小于01%).鼠MC培养从液氮罐内取出冻存管,37C水浴5min后1 000 r/min离心5 min,弃上清，用 培养基吹悬后，移入细胞培养瓶中静置培养.培养基由10%小牛血清、100 U/mL 青霉素、100 mg/

4、L链霉素和DMEM组成培养瓶置于5% CO2, 37C饱和湿度条件 下培养当系膜细胞生长至贴壁75%80%融合时，用025%胰蛋白酶与004%乙二 胺四乙酸二钠(EDTA)等量混合,消化细胞传代.第三代时，用RPMI1640代替DMEM, 其他成分相同.1.3大鼠MC增生水平测定将MC接种入96孔板中，每孔加入5X103个细胞含10%小牛血清的RPMI1640培 养基200L, 5%CO2细胞培养箱37C静置培养至细胞贴壁(一般为12h,显微镜 观察确定)弃上清，每空加入无血清RPMI1640培养基200L同步化(24 h);弃 上清，加入含不同浓度DHA (0, 01, 03, 1, 3,

5、10,30, 100mol/L)的 RPIM1640完全培养基(每组设6个复孔)分组，设对照组1组：DHA0mol/L;设 实验组7组,其浓度分别为01, 03,1, 3, 10, 30, 100mol/L于刺激结束前 4 h加入MTT (5g/L) 10L/孔，放入细胞培养箱37C继续培养4 h,弃上清，空 干，每孔加入DMSO 150L,90r/min摇浴10 min (室温避光)，用酶联免疫检测 仪(ELX-800)测量，以波长570 nm处的吸光度值(A570)表示.1.4 统计学方法所得数据以-X 土 s表示,采用单因素方差分析(One-way ANOVA)进行统计.两两比 较,方差

6、齐者米用LDS检验，方差不齐者米用Tamhane检验.米用Probit分析确 定 LD50.2结果2.1不同浓度DHA作用72 h对大鼠MC增生水平的影响经统计学分析，随着DHA浓度增加，MC增生逐渐降低，并呈剂量依赖性关系.DHA (30mol/L)作用不同时间对大鼠MC增生水平的影响经统计学分析，随着DHA作用时间的增加,MC增生水平逐渐减低,并呈时间依赖 关系。DHA对MC生长的LD50MTT法测定DHA对MC生长的LD50为197mol/L,表现有较强的抑制细胞增殖 的作用.LD50为抑制MC增殖达到50%时的DHA浓度.DHA对MC生长的影响没有DHA的作用时MC 72 h后生长状况

7、好，细胞融合生长达95%以上,见图3. DHA30P mol/L作用72 h后细胞生长状态好，但细胞增殖受到抑制.3讨论青蒿素于1972年从中草药青蒿中提取出来,其作为抗疟药物,对抗奎宁的疟疾有 极强的作用,而没有严重的毒副作用.迄今,青蒿素及其衍生物已经用于超过一百 万的疟疾病例.由于二氢青蒿素的安全性,其在东南亚、非洲等地被广泛的运用.Ilett 等人的研究中, 随机选取数十名越南疟疾患者, 给予二氢青蒿素 160 mg, 9 min后可达峰值血药浓度14mol/L3.这一数值与本次研究所得LD50相接近, 说明二氢青蒿素在人体可能达到抑制系膜细胞增殖所需的血药浓度,从而发挥治 疗肾小球疾病的作用.近年来的研究表明,青蒿素及其衍生物能显著的抑制肿瘤细胞的增殖.其机制是