革兰氏染色法操作规程_第1页
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文档简介

1、革兰氏染色法操作规程文件编码BPZK3-SOP.F025 版本号-_一_一00文件编码BPZK3-SOP.F025 版本号-_一_一00代替文件革兰氏染色法工作标准代替文件编码BPSOS02.226-00日期QCA员职务QAA员1格式审核jQA室|文件管理员 J J 卜 UV4ML n IlIM：LliMllM_Lb LI XJ1 4. E k 9批准人！质量部！经理！ TOC o 1-5 h z II-iiIIICopy颁发部门;质量部生效日期分发份数Copy分发部门质量部QCS卜-I!建立革兰氏染色法操作规程，确保革兰氏染色法操作规范化、科学化。范围适用于用革兰氏染色法对细菌进行分类和鉴定

2、。职责检验员：负责按本规程进行革兰氏染色操作。QC主管、质量部经理：负责监督。内容仪器与用具酒精灯、洁净的盖玻片、接种环、滴管、生物显微镜。材料试剂结晶紫、番红、碘化钾、碘、95%乙醇、草酸铵、香柏油。试液及配制方法结晶紫染色液：称取结晶紫2g,溶于20ml95%乙醇中；称取草酸钱0.8g,溶于80ml水中；将两种溶液混合，静置48h后使用。碘染色液：称取碘化钾2g,加510ml水使充分溶解，加碘1g,待完全溶解后，加水至300ml。番红复染液：称取番红0.25g溶于10ml95%乙醇中，然后加水100ml。操作步骤样品固片取一干净的载玻片，用接种环挑取一环无菌水于载玻片中，挑取少量菌于生理盐

3、水中涂片或直接滴一滴待检菌在盖玻片中央，自然干燥固定。初染滴加结晶紫染液于已固定的涂片上，染1min,用水冲洗、甩干。媒染滴加碘染色液，液作用1min,用水冲洗、甩干。脱色滴加95%乙醇脱色，置白色背景下，侧动盖玻片，直至无紫色脱落为止（约为20-30秒），立即用水冲洗、甩干。复染滴加番红复染液，染1-2min，用水冲洗、甩干。镜检置油镜下观察。先用低倍镜找准目标，于涂有样品处滴加香柏油一滴，用油镜观察。结果判定革兰氏阳性菌呈蓝紫色，革兰氏阴性菌呈红色。以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常呈假阳性。注意事项待检菌菌龄应为1824h。一般情况下，革兰氏阴性菌的染色反应较稳定，不易受菌龄长短影响；而革兰氏阳性菌，有的在幼龄时呈阳性，超过24h可变为阴性。故培养物越陈旧，菌细胞衰老、死亡，则染色常为阴性，造成错判。涂片不宜过浓厚。过于密集的菌体，因洗脱不匀常呈假阳性。涂片后不宜用火焰烤干，宜自然干燥；若经火焰固定时，应以温热不烫手为宜，以免菌体受损，致染色反应不准。革兰氏染色操作的关键步骤是对脱色的

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