实验动物染色体标本的制备课件精美版

1、实验动物染色体标本的制备实验动物染色体标本的制备 染色体是生物遗传基因的载体。在物种进化、作物育种、性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时需要制备染色体标本。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。给动物注射了特异作用于微管系统的秋水仙素后，可以抑制纺锤体的形成，使分裂细胞阻断于有丝分裂中期。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。2022/10/42二、实验原理 染色体是生物遗传基因的载体。在物种进化、作物育种2022/10/432022/10

2、/23人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）2022/10/44人外周血淋巴细胞染色体（Giemse 染色）2022/10/2022/10/452022/10/25三、实验用品试剂：0.65生理盐水，甲醇冰醋酸(3:1)固定液, 蒸馏水，Giemsa染液。器材：显微镜，离心机，搪瓷盘，剪刀，骨剪，离心管，注射器，染色缸。材料：肉用成体牛蛙2022/10/46三、实验用品试剂：0.65生理盐水，甲醇冰醋酸(3:1)动物的药物处理（课前已经完成） 牛蛙称重，按每克体重2 g的剂量腹腔注射秋水仙碱溶液(用065生理盐水配制)。注射后3.5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。2022/10/47四、实验

3、步骤动物的药物处理（课前已经完成） 牛蛙称重，按每克体重2画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。不使用油镜的情况下不需要盖玻片。牛蛙称重，按每克体重2 g的剂量腹腔注射秋水仙碱溶液(用065生理盐水配制)。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。画出两个好的分裂相的显微图。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。此3ml的生理盐水

4、要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。取后肢3：剪开后的后腿关节。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶液喷出，损失骨髓细胞。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。画出两个好的分裂相的显微图。实验动物染色体标本的制备 1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。剪去骨两端膨大部的

5、半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。每组保证有1根后肢长骨，或者2根前肢长骨。 2在小烧杯中加入3 ml的0.65生理盐水，取带针头的注射器，吸入1 ml 0.65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶液喷出，损失骨髓细胞。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。将骨髓冲出物中大块白色脂肪组织用针头挑出弃去。2022/10/48四、实验步骤画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。 2022/10/49四、实验步骤2022/10/29四、实验步骤取后肢：剪开牛蛙

6、后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。2022/10/410四、实验步骤取后肢：剪开牛蛙后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。取后肢：剪开牛蛙后肢与躯干接合部的肌肉，可看到膨大的关节部。1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射

7、器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。画出两个好的分裂相的显微图。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶液喷出，损失骨髓细胞。取后肢3：剪开后的后腿关节。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。在载玻

8、片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。取后肢3：剪开后的后腿关节。取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。2022/10/411四、实验步骤65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢取后肢3：剪开后的后腿关节。2022/10/412四、实验步骤取后肢3：剪开后的后腿关节。2022/1

9、0/212四、实验步取前肢1：找到关节所在。2022/10/413四、实验步骤取前肢1：找到关节所在。2022/10/213四、实验步骤取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。2022/10/414四、实验步骤取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。2022/10/2142022/10/415四、实验步骤2022/10/215四、实验步骤3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。18-20下静置，低渗处理20-30分钟。注意防止水分蒸发。4.在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（

10、无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。5.吸走固定液，换入无水乙醇，蒸汽固定10-20分钟。6.取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直立载玻片空气干燥。注意，每组做2片452022/10/416蒸汽固定法四、实验步骤3.在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞7.在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3片），将固定并充分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将Giemsa染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染20-30分钟。8.用蒸馏水稍

11、洗使脱去浮色，吸水纸吸干载玻片底面和周围的水分，空气干燥后在显微镜下观察。不使用油镜的情况下不需要盖玻片。Giemsa染色改良苯酚品红染色2022/10/417蒸汽固定法四、实验步骤7.在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3片），将固定并充分注意事项 1.骨髓染色体标本的制备成败决定于取材，若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少，不易获得较多的中期分裂相。 2.低渗处理极为重要，低渗不够，则染色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。2022/10/418注意事项 2022/10/218此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程

12、度以刚刚露出骨髓组织为宜。取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3片），将固定并充分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将Giemsa染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染20-30分钟。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。不使用油镜的情况下不需要盖玻片。2在小烧杯中加入3 ml的0.不使用油镜的情况下不需要盖玻片。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体

13、的分散。1找出最好的几个分裂相，数出染色体条数.取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。注意：冲洗时动作要徐缓，以免溶液喷出，损失骨髓细胞。取后肢3：剪开后的后腿关节。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。低渗处理极为重要，低渗不够，则染色体聚在一起，分散不好。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把

14、所有材料中的骨髓冲出为止。在物种进化、作物育种、性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时需要制备染色体标本。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。取后肢3：剪开后的后腿关节。取出载玻片，缓缓倒去低渗液，用吸管将固定液II(无水乙醇:冰醋酸=1:2)自载玻片的一端缓慢滴下形成水幕，固定3-4次，直立载玻片空气干燥。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。

15、取后肢3：剪开后的后腿关节。取后肢3：剪开后的后腿关节。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。画出两个好的分裂相的显微图。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。在干净的培养皿中放入两垛盖玻片（每垛3片），将固定并充分干燥的载玻片有细胞的一面向下，放置于盖玻片上，将Giemsa染料用吸管注入载玻片和培养皿底的间隙中，扣染20-30分钟。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。在载玻片上滴1滴蒸馏水，然后滴加2滴第2步获得的骨髓细胞悬液。1每组同学取

16、前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。18-20下静置，低渗处理20-30分钟。实验动物染色体标本的制备取后肢3：剪开后的后腿关节。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。取后肢3：剪开后的后腿关节。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。牛蛙称重，按每克体重2 g的剂量腹腔注射秋水仙碱溶液(用065生理盐水配制)。在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料

17、。取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。画出两个好的分裂相的显微图。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细

18、胞冲洗到10ml离心管中。18-20下静置，低渗处理20-30分钟。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。65生理盐水，取带针头的注射器，吸入1 ml 0.将骨髓冲出物中大块白色脂肪组织用针头挑出弃去。在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。动物的药物处理（课前已经完成）此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出

19、为止。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。取后肢3：剪开后的后腿关节。取后肢3：剪开后的后腿关节。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。65生理盐水，取带针头的注射器，吸入1 ml 0.轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。取前肢1：找到关节所在。骨髓染色体标本的制备成败决定于取材，若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少，不易获得较多的中期分裂相。取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。牛蛙称重，

20、按每克体重2 g的剂量腹腔注射秋水仙碱溶液(用065生理盐水配制)。取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。动物的骨髓中存在大量活跃的进行有丝分裂的细胞，是染色体制备的理想材料。取骨髓前，为什么要给牛蛙注射秋水仙素？骨髓染色体标本的制备成败决定于取材，若抽取的骨髓太少或太稀，细胞数目过少，不易获得较多的中期分裂相。取前肢1：找到关节所在。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。2在小烧杯中加入3 ml的0.收集骨髓细胞，低渗处理，使细胞质膜破裂，以利染色体的分散。取前肢1：找到关节所在。取后肢3：剪开后的

21、后腿关节。1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。在物种进化、作物育种、性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时需要制备染色体标本。低渗处理极为重要，低渗不够，则染色体聚在一起，分散不好。取后肢3：剪开后的后腿关节。取后肢2：用剪刀顺着关节外围剪开。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。在物种进化、作物育种、性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时需要制备染色体标本。轻轻晃动载玻片，使液体混匀，并在载玻片上铺展开。65生理盐水，将针头沿

22、骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。不使用油镜的情况下不需要盖玻片。取前肢1：找到关节所在。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。画出两个好的分裂相的显微图。取后肢3：剪开后的后腿关节。画出两个好的分裂相的显微图。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。1每组同学取前肢、后肢各一，取

23、出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。取前肢2：剪开肌肉，顺着关节外围剪开。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。低渗处理极为重要，低渗不够，则染色体聚在一起，分散不好。剪去骨两端膨大部的半透明软骨，程度以刚刚露出骨髓组织为宜。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。此3ml的生理盐水要反复使用，直到把所有材料中的骨髓冲出为止。1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。取前肢2：剪开肌肉，顺

24、着关节外围剪开。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入骨中，缓慢推动注射器活塞，将骨髓细胞冲洗到10ml离心管中。取后肢3：剪开后的后腿关节。取前肢1：找到关节所在。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。在培养皿中放入两根竹签，将滴有骨髓细胞的载玻片放在竹签上，缓慢向培养皿中加入固定液I（无水乙醇:冰醋酸:蒸馏水=1:2:3）室温下利用挥发的蒸汽固定100-120min。细胞经固定后，于预冷的载玻片上滴片，使染色体散开，再用姬姆萨染色，便可以制成染色体标本。画图里用铅笔，对照着显微镜视野来画，不要画“想象图”。在物种进化、作物育种、性别鉴定、基因定位以及癌症和遗传性疾病的诊断中，有时需要制备染色体标本。5-4小时，双毁髓法处死牛蛙。1每组同学取前肢、后肢各一，取出肱骨、股骨和胫腓骨等长骨。太过，则造成细胞破碎，染色体丢失。65生理盐水，将针头沿骨的长轴方向从骨的一端刺入