FL2200 型液相色谱仪实用标准操作规程

1、word批 准日 期分 发1、目的：建立一个 FL2200 型液相色谱仪的标准操作规程，以规其操作。2、围：本规程适用于本公司的 FL2200型液相色谱仪标准操作。3、职责：仪器操 负责该仪器的操作、清洁，并与时向上级、计量管理员汇报仪器的异常情况；仪器维护保养人：负责仪器定期清洁、保养工作；计量管理员：负责维护该仪器的正常运行，指导并协助培训仪器的操作、保养，与时处理设备的异常情况。4、操作程序：4.1：根本要求4.1.1 安装仪器的房间应通风良好,否如此会引起中毒或不良刺激 ,也可能引起火灾,因为液相色谱仪所使用的溶剂大多是易燃且有毒的.4.1.2 严禁在仪器附近吸烟,使用明火或其他火源,

2、或安装其他任何发射或可能发射火花的设备,房间应配备灭火装置或设备,以备紧急时防止火灾的发生.4.1.3 房间应配备自来水龙头或其他冲洗设备.如果溶剂进入眼睛或有毒溶剂溅到皮肤上,应立即用清洁的水冲洗.4.1.4 防止在有腐蚀性气体或大量粉尘的地方安装本仪器,否如此会影响仪器正常运转,并缩短仪器使用寿命.左右,建议安装空调. 4.1.6 电源电压为交流 功率为 房间有良好的接地线.配制流动相,配好后用有机膜过滤并超声 15 分钟配制乙腈:水=1:9；配制乙腈:缓冲盐称取 2.18g溶解在 1000ml 娃哈哈水中：94.2.2 打开泵、检测器和电脑，启动工作站；设置检测样品所需的各种条件；点击新

3、建,创建项目，设置项目名称、样品名称、实验人等，点下一步，设定分析方法，下一步，设定仪器条件，下一步，设定检测器，下一步，设定仪器条件，下1 / 8word一步，项目创建完毕，完成。停泵状态下把不锈钢吸滤头放于 10%5 分钟后泵停止关闭放空阀按“泵启动10%乙腈水过渡 20 分钟按“泵停止把不锈钢吸滤头放于流动相中打开放空阀点击系统清洗 5 分钟后泵停止关闭放空阀点击“泵启动稳定 30 分钟查看基线点击工作站界面的开接进样。称取 2mg样品，溶解在50ml 流动相里，用超声波超声让样品完全溶解就行。再用一次性针头过滤器把样品过滤到称量瓶中，进样 10-20。停泵状态下把不锈钢吸滤头放于10%

4、乙腈水里打开放空阀点击系统清洗5分钟后泵停止关闭放空阀按“泵启动10%乙腈水过渡 40 分钟可以小流量长统清洗5 分钟后泵停止关闭放空阀点击“泵启动清洗 30 分钟。甲醇：水=3:7 过滤下就可以用了，一天清洗一次 30-60 分钟就行。一次配制 300ml就行，太多流动相放久了容易变质。5、仪器的使用维护与须知事项5.0019.999ml/min压力在 1.020Mpa1%0.12.0ml/min 围，输液泵空载或柱压小于20Mpa时2.0019.999ml/min 围，使用流量校正系数补偿后RSD0.3%0.54.0ml/min 柱压Mpa环境温度 20流量设定值误差流量重复性误差040M

5、pa压力示值误差压力保护限值误差 1Mpa 在540MP 围为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照如下须知事项进展操作：2 / 8word馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜或等滤器。泵的入口都应连接或密封环，最终产生漏液。漏液。流动相应该先脱气，以免在泵产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无常工作。5.1.3 如果输液泵产生故障，须查明原因，采取相应措施排除故障：没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量如 5ml/min下运转，将气泡排尽，也可用一个 50ml 针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密

6、封环磨损，需更换。压力和流量不稳。原因可能是气泡，需要排除；或者是单向阀有异物，可卸下单向物局部堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸如4mol/L 硝酸迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进展进样装置要求：密封性好，死体积小，重复性好，保证中心进样，进样时对色谱系统的压力、流量影响小。3 / 8word阀的磨损。转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否如此流动相受阻，使泵压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。冲洗，或先用能溶解样品的溶剂冲洗，再用水冲洗。5.3 色谱柱5.3.1 柱型号:4.6*

7、250mm,5um损坏。在色谱操作过程中，需要注意如下问题，以维护色谱柱。 部是水，反之亦然。 去留在柱头的杂质。否如此反冲会迅速降低柱效。 选择使用适宜的流动相尤其是之前预先被硅胶“饱和，防止分析柱中的硅胶基质被溶解。 护柱可以而且应该经常更换。 统中流动相的置换应以相混溶的溶剂逐渐过渡，每种流动相的体积应是柱体积的 20倍左右，即常规分析需要 5075ml。二氯甲烷和甲醇依次冲洗，然后再以相反顺序依次冲洗，所有溶剂都必须严格脱水。一氯甲烷或氯仿依次冲洗，再以相反顺序依次冲洗。如果下一步分析用的流动相4 / 8word在甲醇乙腈冲洗时重复注射 100200l 四氢呋喃数次有助于除去强疏水性杂

8、质。四氢呋喃与乙腈或甲醇的混合溶液能除去类脂。 保存色谱柱时应将柱充满乙腈或甲醇，柱接头要拧紧，防止溶剂挥发枯燥。绝对禁止将缓冲溶液留在柱静置过夜或更长时间。 降低或色谱峰变形，如此可能柱头出现塌陷，死体积增大。 12mm 高度样填满色谱柱，压平，再拧紧柱接头。这样处理后柱效能得到改善，但是很难恢复到新柱的水平。使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素氟、氯、溴的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在 HPLC 仪上柱子如不经常使用，应每隔 45 天开机冲洗 15 分钟。10mm0.5*10 AU(波长为 254nm、流过池为空气)-5基线漂移1*10 AU/h波长为 254nm、流

9、过池为空气-4流动池有气泡线上出现许多线状“峰，这是由于系统有气泡，需要对流动相进展充分的除气，检5 / 8word但要注意不使压力增加太多，以免流动池破裂。流动池被污染洗检测池，要注意溶剂的互溶性；如果污染严重，就需要依次采用 1mol/L 硝酸、水和新鲜溶剂冲洗，或者取出池体进展清洗、更换窗口。光源灯出现故障紫外或荧光检测器的光源灯使用到极限或者不能正常工作时，可能产生严重噪音，基线漂移，出现平头峰等异常峰，甚至使基线不有回零。这时需要更换光源灯。倒峰时的压力变化，或者由于样品溶剂与流动相不同所引起的。5.5.1 流动相的性质要求低毒性等特征。所以选择流动相时应考虑以下几个方面：硅胶柱系统

10、。酸性流动相不能用于氧化铝、氧化镁等吸附剂的柱系统。累时。 UV 动相，以提高灵敏度。6 / 8word使柱压降增加，使别离时间延长。最好选择沸点在 100以下的流动相。化别离，且会使柱子恶化。样品易于回收。应选用挥发性溶剂。HPLC 所用流动相必须预先脱气，否如此容易在系统逸出气泡，影响泵的工作。气泡还会影响柱的别离效率，影响检测器的灵敏度、基线稳定性，甚至使无法检测。动相甚至固定相如烷基胺反响。溶解气体还会引起溶剂 pH 的变化，对别离或分析结果带来误5用滤膜过滤时，特别要注意分清有机相脂溶性滤膜和水相水溶性滤膜。有机 HPLC。对于混合流动相，可在混合前分别滤过，如需混合后滤过，首选有机

11、相滤膜。溶剂如用于 HPLC 系统，可能造成柱效降低。贮存容器一定要盖严，防止溶剂挥发引起组成变化，也防止氧和二氧化碳溶入流动相。5.6.1 流动相比例调整：由于我国药品标准中没有规定柱的长度与填料的粒度，因此每次新开检新品种时几乎都须调整流动相按经验，主峰一般应调至保存时间为615 其重现性更不容易达到，请注意充分平衡柱。5.6.2 样品配制：溶剂；容器：塑料容器常含有高沸点的增塑剂，可能释放到样硅烷化处理。7 / 8word5.6.3 记录时间：第一次测定时，应先将空白溶剂、对照品溶液与供试品溶液各进一 30 主峰的测定。5.6.4 进样量：药品标准中常标明注入 10l，而目前多数 HPLC 系统采用定量环10l、20l 和 505计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。5.6.5 计算：由于有些对照品标示含量的方式与样品标示量不同，有些是复合盐、有些含水量不同、有些是盐基不同或有些是采用有效部位标示，检验时请注意。5.6.6 仪器的使用：流动相滤过后，注意观察有无肉眼能看到的微粒、纤维。有请重新滤过。柱在线时，增加流速应以的增量逐步进展，一般不超过1ml/min，反之亦然。否如安装柱时，请注意流向，接口处不要留有空隙。样品液请注意滤过注射液可不需滤过后进样，注意样品溶剂的挥