微生物学课件

1、第13章 药品微生物学检查规定灭菌药品：注射剂、输液剂、用于体腔、溃疡、严重烧伤、出血、眼科用药等 （需经无菌检查） 非规定灭菌药品：常用口服、一般外用制剂 （ 需经微生物限度检查）1第一节、无菌检查一、概念：p173应用范围：各种注射剂 眼外伤用制剂 植入剂 可吸收的止血剂 外科用的敷料及器械 2 二、无菌检查常用方法 1.直接接种法：供试品溶液接种培养基中，培养数日后观察培养基是否出现浑浊或沉淀，与阳性、阴性对照品比较或直接用显微镜观察 需氧菌检查： 普通培养基 （金黄色葡萄球菌） 厌氧菌检查 ： 硫乙醇酸钠培养基 （生孢梭状芽胞杆菌） 真菌检查 ： 真菌培养基 （白色假丝酵母菌） 需氧菌

2、、厌氧菌30-35C培养5天、真菌20-25C培养7天2.薄膜滤过法3无菌检查注意事项1.严格无菌操作2.作好阳性菌对照，如阳性菌对照无菌生长，供试品的检验结果无效4 一般注射药物的无菌检查取规定药品的量，分别接种在一定量的培养基中,同时做培养基的阳性、阴性对照试验5二、常用微生物限度检查法染菌量检查：细菌总数测定 霉菌总数测定 酵母菌总数测定控制菌检查：大肠埃稀菌沙门菌金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌破伤风杆菌7 控制菌检查口服药物检测：大肠杆菌、沙门菌、活螨外用药检测：金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、活螨眼科制剂：金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌8 2.霉菌总数 每克或每毫升待检药品中所含活霉酵母菌总数菌或酵

3、母菌总数的检查 采用琼脂倾注平皿计数法（琥红培养基） 选取菌落均值在550个之间的平板作为霉菌总数的 测定范围10（二）控制菌的检查： 1.大肠埃稀菌：检查要点： 稀释药液 伊红美兰（EMB）平板 - 紫黑色有金属光泽菌落 挑取可疑菌落 革兰染色镜检 平板纯培养 生化反应 乳糖发酵 IMViC + + + - -11EMB平板上的E.coli12 2.沙门菌检查要点： 稀释药液 SS鉴别培养基 挑取可疑菌落 G染色镜检 生化反应 血清学鉴定 葡萄糖+、乳糖- 等 玻片凝集试验 动力（ + ） 14 稀释药液 十六烷三甲基溴化铵平板 挑 取 可 疑 菌 落 革兰染色镜检 普通琼脂纯培养 氧化酶试

4、验 绿脓菌素试验 明胶试验3.铜绿假单胞菌检查要点：G小杆菌155.破伤风杆菌检查要点： 待检药品 (外用药) 葡萄糖庖肉培养基 80 水浴1530min 表面加无菌凡士林或石蜡 37 培养 34d 革兰染色镜检 动物实验 小白鼠毒力实验 小白鼠保护力实验17第十四章 抗微生物药物作用的检定方法181. 抑制细菌细胞壁的合成 2.抑制核酸复制和转录 3. 抑制蛋白质的合成 4.影响细胞膜的功能5.抗代谢作用第一节 抗菌药物的作用机制19抗菌药物的作用机制 20 第二节 抗微生物药物作用的检定法一、抗微生物制剂的筛选体外试验：主要用于抗菌药物的筛选、测定抗菌谱和抗菌效果及临床药敏试验。还可了解筛

5、选的药物是抑菌药物、还是杀菌药物。主要方法有琼脂扩散法和稀释法。此外还有特殊抗菌试验（联合药敏试验） 21第二节、抗微生物药物作用的检定法二、体外法：（一）、体外抑菌试验最小抑菌浓度（ MIC）： 抑制细菌生长的最高药物稀释度 。将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂平皿，如培养后重新长出试验菌，说明该药仅有抑菌作用。如无菌生长，则该药有杀菌作用。依次可找出最小杀菌浓度。 最小杀菌浓度（ MBC ）： 无细菌生长 的最高药物稀释度为最小杀菌浓度221.连续稀释法：可定量测定药物抑制微生物生长的能力 找出最小抑菌浓度 能抑制试验菌生长的最高药物稀释度为该 药的最小抑菌浓度（ MIC） 用培养基将药

6、物按两倍稀释成系列浓度 24 药物的抗菌试验连续稀释法-管号 1 2 3 4 5 6 7 8-培养液 1ml 1 1 1 1 1 1 1待检药液 1ml - - - - - - -混合液 取出1ml- 1- 1- 1- 1- 1- 1-弃去稀释度 1：2： 1：4 1：8 1：16 1：32 1：64 1：128稀释菌液 0.1ml 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1-结果-25（二） 体外杀菌试验杀菌试验用于评价药物对微生物的致死活性1.最低杀菌浓度的测定最低杀菌浓度（ MBC ）： 药物能杀死细菌的最低浓度将未长细菌的培养液取出，分别转种琼脂平皿，如培养后重新长出试验菌

7、，说明该药仅有抑菌作用。如无菌生长，则该药有杀菌作用。依次可找出最小杀菌浓度。（三） 体外联合抗菌试验 纸条试验 协同, 相加, 无 关, 拮抗27 （四）体外抗病毒试验 1、吸附依赖宿主细胞膜上的病毒受体 2、穿入直接穿入、细胞膜内陷等 3、脱壳溶酶体作用、结构变化4、生物合成核酸的复制、蛋白质合成5、装配释放核内装配、核外装配体外抗病毒试验方法：1.病毒学方法28病毒的增殖过程29, CPE）1）病毒学方法： 病毒感染细胞后，可引起细胞病变效应 （ cytopathic effect CPE） 病毒在体外细胞培养中增殖所引起的典型的组织病理 学改变（细胞变圆、聚集、融合、脱落、形成空斑等 ）呼吸道合胞病毒感染 后形成多核巨细胞单纯疱疹病毒感染 后细胞变圆等正常成纤维细胞30一般注射药物的无菌检查取规定药品的量，分别接种在一定量的培养基中同时做培养基的阳性、阴性对照试验需氧菌检查： 2支普通培养基各