中药制剂分析 2课件

1、薄层扫描分析法在黄酮类化合物含量测定中的应用研究概况111508036 王彩丽111508037 王 蓉111508038 王 昕111508039 王志斌111508040 吴双平 目的：建立槐米中有效成分芦丁的薄层扫描测定方法。 方法：取槐米干品，采用乙醚提取，弃去乙醚层后，用乙醇连续回流提取，分离出不同的黄酮类成分，采用薄层扫描仪器对黄酮类化合物进行含量测定。 结果：芦丁呈良好的线性关系。 结论：本法可用于槐米中芦丁的含量测定。 黄酮类化合物（flavonoids）是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮（flavone）结构的化合物。它们分子中有一个酮式羰基，第一位上的氧原子具碱性，能

2、与强酸成盐，其羟基衍生物多具黄色，故又称黄碱素或黄酮。黄酮类化合物在植物体中通常与糖结合成苷类，小部分以游离态（苷元）的形式存在。绝大多数植物体内都含有黄酮类化合物，它在植物的生长、发育、开花、结果以及抗菌防病等方面起着重要的作用槐米具凉血止血之功效, 用于便血、痔血、血痢、崩漏、吐血、衄血、肝热目赤、头痛眩晕。槐米是常用中药材, 其主要有效成分为芦丁, 也是提取芦丁的主要原料, 芦丁主要用于出口与合成维脑路通。中国药典采用比色法测定槐米中芦丁含量, 条件较难掌握, 且操作繁琐。本文采用薄层扫描法测定槐米中芦丁的含量, 操作简便、快速、分离度好、结果准确。 薄层扫描法( TLC- Scanni

3、ng method) 亦称薄层光密度法( TLC- Densitometry) , 是薄层色谱技术与光密度计和微型电子计算机结合起来的一种新型仪器分析方法。应用薄层扫描仪或称薄层光密度计可同时对各种复杂的样品进行分离和测定, 简便快速、灵敏准确、专属性好。 因此, 在医药学领域得到广泛应用, 尤其在药品检验工作中, 现已被国内外药典普遍采用。 一、基本原理 二、方法与结果 三、小结 薄层色谱法在各国已公认为法定方法 1、3 , 但作为定量测定的薄层扫描法, 虽然早在50 年代初就已进行研究, 但进展较慢。直至70 年代后, 成功地应用了Kubelka- Munk 理论推导出反射吸收度与浓度的函

4、数关系才得到发展。虽然当浓度增加至一定程度时不成线性, 且与薄层板的性质有关,但是, 随着计算机技术的发展与联用, 问题得以解决。即在薄层光密度计内装有线性化器, 由微型计算机的程序控制,通过01 吸收度单位之间曲线上的7 个点进行校正, 使Kubelk 理论曲线中的非线性化数据转变为线性值, 使之符合Beer. s 定律, 即可定量测定, 详见图1。 图1 图1 Kubelk- Munk 理论与线性曲线值得注意的是, 当使用线性化装置对Kubelk- Munk 理论曲线校正时, 如果校正不足或校正过头, 都会使线性关系偏。在实际工作中, 可通过测试得以校正。二、定量分析方法1、试验条件的选择

5、 （1）薄层色谱条件：原则组分应完全分离，斑点对称，均匀，不拖尾。 （2）检测方法：吸收测定法和荧光测定法两种。在可见、紫外区有吸收的组分，可在200800nm范围内采用吸收测定法测定。有荧光的组分，可选择好激发光波长（ex）和发射波长（em）用荧光法具有专属性强、灵敏度高和线性范围宽度等特点。 （3）测量方法：有反射法和透射法两种。反射法是将光束照射到薄层斑点上，测量反射光的强度；反射光灵敏度较低，受薄层厚度影响较小，基线较稳，信噪比较大，因而使用较多。透射法受薄层厚度影响较大，且玻璃对紫外光有吸收，所以实际应用较少。 (4)散射参数SX：由于薄层对光散射，其吸收度A和浓度KX之间不服从比尔

6、定律，而符合K-M方程，其吸收度由于散射而减小，A-KX曲线偏向横轴，不成直线，其形状与SX有关。为测定方便。薄层扫描仪均装有线性化器，用于对工作曲线进行校正，使其成为直线。因此，测定时需输入散射参数SX值。不少薄层板的SX值已知。2.测定方法的选择 （1）外标法：若标准曲线经过原点，可用一点法校正，如不通过原点，宜采用二点法校正，必要时用多点校正法。测定时，供试品溶液和对照品溶液应交叉点于同一薄层板上，供试品点样不少于4个，对照品每一浓度不少于2个。（2）内标法：内标法是将内标加入供试品溶液和对照品溶液中以其峰面积的比值作为定量依据。目前应用较少。3、注意事项 影响因素较多，测定时应注意以下

7、几点：薄层厚度应均匀，表面应平整，最好使用预制板；点样应准确，原点大小应一致；喷洒显色剂应均匀，量适中；并用胶布加以固定。本法的线性范围较窄，应在其线性范围内测定。 三、实验部分1 、 实验仪器与材料 CS-9000双波长薄层扫描仪 ( 日本岛津) ; 紫外透射分析仪；定量用毛细管（Drummond）; 索氏提取器；自制薄层板( 硅胶GB硼酸B枸橼酸= 100B019B013; 用013% CMCNa 水溶液湿法铺板; 10cm 20cm、厚015mm) ; 芦丁对照品（中国药品生物制品检定所）；槐叶（秋季采集干燥后放置）；其它试剂均为AR。2 、方法与结果2.1 样品溶液制备 精密称取105

8、干燥3h 的槐米粉末约100mg, 置50ml 容量瓶中, 加入甲醇至刻度, 浸泡1h, 再超声提取30min, 放冷至室温, 如甲醇有损失, 再补加甲醇至刻度, 摇匀, 滤过, 弃去初滤液, 取续滤液作为供试液。2.2 对照品溶液制备 精密称取105干燥3h 的芦丁、槲皮素对照品约25mg、12.5mg 分别置50ml容量瓶中, 加入适量甲醇使溶解并至刻度, 摇匀, 即为对照品溶液。 2.5 重复性试验 精密称取同一样品5 份, 按上述方法制备供试品溶液, 进行平行试验, 测定平均含量, 结果, 结果含量平均值为25164% , RSD= 111%,表明重复性良好。 2.6 加样回收率试验

9、取已知芦丁含量的槐米粉末约50mg5 份, 各加入芦丁对照品1215mg, 按2、1 项下制备溶液, 依法测定, 结果平均回收率为98.52%,RSD = 1、76% ( n= 5) , 见表1 表1 回收率测定结果( n= 5) 1 12.79 12.50 24.88 96.69 2 12.63 12.47 24.91 98.48 3 12.71 12.01 25.06 98.00 98.52 1.76 4 12.46 12.32 24.57 38.26 5 12.55 12.68 25.36 101.40 2. 7 样品测定 按上述方法对3份样品进行 测定，结果见图1、表2。 1 2 3 图1 槐米的TLC 色谱图 1 芦丁对照品 2 槐米 3 槲皮素对照品 三、结 语 本文综述了近年来薄层扫描法在