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1、 第三章 基因工程制药基因工程的基础知识 第一节 基因的概念与特性 一、基因的概念:DNA分子中含有特定遗传信息的一段核苷酸序列,是遗传物质的最小功能单位。 早期认为遗传物质是蛋白质，1944年Avery从肺炎链球菌转化实验证明是DNA。/A：S有夹膜致病菌，B：R突变非致病菌，C：加热杀死S菌，D：活R死S二、基因的一般特性：基因可自我复制，基因决定蛋白质结构，基因可突变。基因按功能分为：结构基因调控基因三、DNA的结构与性能DNA的结构：四种核苷酸（A T C G）连接。 DNA二级结构双螺旋结构。DNA的性质与功能吸收光谱260电场中泳动变性 复性 杂交 二、基因表达 转录：在RNA聚合
2、酶的催化下以DNA为模板合成mRNA的过程。 转录后加工： 剪切：除去内含子 加帽：5加m7Gppp 加尾：3加poly（A） 二、翻译：以mRNA为模板,tRNA作为运载工具,将活化的氨基酸在核糖体上合成蛋白质的过程。 分为三个阶段： 起始 延长 止真核细胞的翻译过程翻译后的肽链加工肽链切断羟基化糖基化磷酸化乙酰化 基因工程制药第二节 基因工程药物生产的基本过程 基因工程技术是将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建成工程菌(或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。基因工程基本过程基因工程药物制药的主要程序获得目的基因 组建重组质粒 构
3、建工程菌（或细胞）培养工程菌 产物分离纯化 除菌过滤半成品检定 成品检定 包装第三节 目的基因的获得 克隆真核基因常用方法：逆转录法和化学合成法。 一、逆转录法 逆转录法就是先分离纯化目的基因的 mRNA，在反转录成 cDNA，然后进行 cDNA 的克隆表达。 mRNA的纯化 cDNA第一链的合成 cDNA第二链的合成 cDNA的克隆 将重组体导入宿主细胞 cDNA文库的鉴定 目的cDNA克隆的分离和鉴定 二、化学合成法 较小的蛋白质或多肽的编码基因可以用化学合成法合成。 必须知道目的基因的核苷酸顺序或目的蛋白质的氨基酸顺序。 用化学法合成目的基因DNA不同部位的两条链的寡核苷酸短片段，再退火成为两端形成粘性末端的DNA双链片段，然后将这些双链片段按正确的次序进行退火使连接成较长的DNA片段，再用连接酶连接成完整的基因。 人工化学合成基因的限制有： 不能合成太长的基
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