苏州大学研究生分子生物学考试答案完整版

1、一名词解释1.移动基因：又叫转位因子transposable elements）由于它可以在染体基因组上移动，甚至可在同染色体间跃迁，故称跳跃基因（ gene2.断裂基因（spli t ）真核细胞的结构基，其核苷酸序列中有与氨基酸编码无关的 间隔区，从而被分割成不续的若干区域。将这编码序 列不连续，有间隔段的 DNA 片称为断裂基因。3.重叠基因（overlapping ）：不同基的核苷酸序列有时相邻两个基因共用，将核苷酸彼重叠的两个基因称为叠基因。4.假基因：在珠蛋白因簇（gene cluster）各片断核酸序列分析时发现除了有正常的功能基因外，还有功能失活的殊序列片断，它不能使表达功能。

2、该类无表达功能的变核苷酸基因序列片，称为假基因。5.同尾酶：有一些限制性核酸内切识别的碱基顺序不完恒定，即识别顺序同，但酶切后产生样黏性末端的两种酶为同尾酶。6.质：细菌中存在于胞质中的一种独立染色体以外的遗传分，是由环状的 DNA 分组成的复制子。可在胞浆内自主复，把携带的遗传信通过自 我复制的子代质粒可随细菌分裂而进入代菌体中。7.柯（COS质：粘性质粒）有噬菌体的 Cos 位点和整个 的 顺序。经染进入细菌细胞以，它就好象质粒样在细胞中进行复。 分子量小，易环化扩增，可包装 外源因，可由 Ampr 抗性筛选常 用于构建基因文库8.COS 细：用一个复制起始部位失的 SV40 突变种感染猴

3、细胞，由于病DNA不能自主复制，便合到宿主染色体 DNA 中，期基因表达产生功性的 T 抗 原，这样的细胞就 胞。9.基因组文库：把某生物基因组的全部遗信息通过克隆载体存在一个受体菌克隆子群体中，个群体即为这种生物基因组文库。10.cDNA 文库 ： mRNA 为模板在反转录酶的作用将形成的互补 （cDNA 种载体相接，而后转入肠杆菌，建立克隆株 library11.转化 t r or at i on：以质粒作为克隆体将目的基因导入主细胞。转化作用就是一种基因细胞从周围介质中吸来自另一种基因型细DNA进 而使原来细胞的遗基因和遗传性发生变的现象。12.转（含噬菌体DNA 及其重组子 DNA 导

4、入宿主细（或细菌程。由于噬菌体是细菌病毒，因此噬菌体 导大肠杆菌的感受细胞也称 转染。13.14.转导：以噬菌体为介，将外源 DNA 导入细菌的过程启动子：是位于结基因上游，转录起始控所必需的一段 列，是RNA 聚酶与模板 结合的部。内含保守序列当启动子与全酶结后开 始转录。15.起始密码子：mRNA 上的碱基顺序每 个碱基解读框架划分开，决定其所生成蛋白质的氨酸顺序，为了使碱基序作为遗传信息能正转译，通常需 要从某个特定的位开始转译，这个起始的密码子就叫做起始码子。16.终止子：位于一个基因编码区3下游提供终止信号 序列，可以RNA聚合酶识别并发出止 mRNA 合成信号。一般为一段卡结构的反

5、向重复序 列。17.粘性末端 是指 DNA 分子在限制酶切割后产生一条链多几个碱基的互补对称的突出末端， 5 出称 粘末端，他们能够过碱基间的配对而新 环化起来，若平末的 DNA 片则不易重新环化、终止密码子 ：三个密码子（UAA, UAG，是使蛋白质合成终的 码子，通过一个或个组合在一起发挥作。只表示链的终止，表达氨基酸。 . 锌指结构：由两半胱氨酸残基和两组氨酸残基通过位于心的锌离子结 合成一个稳定的指结构，并以锌辅基螯成的环状结构作为活单位，在指状 突出区表面暴露的基及其极性氨基酸与 结合有关。20.载体vector）：可以插入酸片段、能携带外核酸进入宿主细胞，在其中进行独立和稳的自我复

6、制的核酸分。主要包括五类：质，噬菌体的 衍生物(柯斯质，单链 DNA 噬菌体 M13)动物病毒。21.：聚合酶链反应是依据细胞DNA 半保复制的机理，以及外 分子于不同温度下链和单链可以互相转的性质，在试管中给 的体 外合成提供一种合条件：模板 DNA寡链核苷酸引物，DNA 聚合酶，合适的缓 冲液系统和 DNA 变性复性及延伸的温度时间等，使加入 种 dNTP 由引 物沿模板从53按碱基配对则, 形成与模板DNA 互的半保留复制链 . i c ：即基因组 ，指组成生物基组的所有 DNA，包含一个物 体的全部遗传信息即 DNA 的部核苷酸序列。、I r on：即间隔子（内子），在转录后的工中，从

7、最初的转产物除去 的内部的核苷酸序。也指编码相RNA内子的中的区域。内含子翻 译产物的结构无意，它比外显子累积有多的突变。25、Exon：真核细胞的基因表达过程中能编码白质的核苷酸序列。 物基因的一部分，在剪(Splicing)后仍会被保存来，并可在蛋白质物合 成过程中被表达为白质。外显子是最后现在成熟 RNA 中的基因序列 , 又称 表达序列。既存在最初的转录产物中，存在于成熟的 RNA 分子中的核苷 序列。27.转录 transcription）：生物体 DNA 为板在 mRNA 聚合酶的作用下，合成 RNA 的程称为转录。包括录起始、延伸、终止过程。转录是不对 的，体现为在 双链上股链可

8、以转录而另股不可以。二是模板并不都 是在同一单链上。28.翻译（：在多种因子辅下，细胞内以 mRNA 为模板，在核糖体上通过以 tRNA 别 mRNA 三联体密码子和移相应氨基酸，组合成蛋 白质肽链的过程。29.顺式作用元：顺式作用元件为些能D 结的特定序列 片段主要位于真核基因上 ,含特有的相似或一致列 决定转录起始位点和 聚 合酶的转录效应。功能可分为启动子、强子、沉默子、衰减、 序列片段。30.反式作用因子 ：反式作用因子是组能直接或间接与 DNA 的式作用元件特定序列结合，挥调节作用的核内非蛋白，激活或阻遏基表达。 31. t r i i f act or 即转录因子，能结合在某基因上

9、游异核苷酸序 列上的蛋白质，活后从胞质转位至胞核通过识别和结合基因动子区的顺式 作用元件启动和调控基因表达. 瞬时表达：外源因进入宿主细胞后不整合到受体细胞染体而独立于其 外，随复制而出现因产物，但复制量不太多，否则会引起细死亡，也不能 随细胞传代，因而表达的量越来越少最消失。这种现象称为时表达。33. 稳定表达 ：外源基因转染真细胞并整合入基组后的表达。 因工程 表达系统中工程菌或细胞虽经过多次传或条件变化，但表达平仍然保持 稳定的现象。34.亮氨酸拉链： 出现在 DNA 结合蛋白质和它蛋白质中的一种构基元。当来自同一个或不同肽链的两个两用性的 -螺的疏水面（常常含亮氨酸残 基）相互作用形成

10、个圈对圈的二聚体结时就形成了亮氨酸拉35.基因突变：是基因 DNA 分在结构上发生碱基组成或排列顺序的改（通常它只涉及基因中分序列的变化引起个体表型的改 , 而使生物体生 遗传性变异。36.无义突变：是指由某个碱基的改变使代某种氨基酸的密码子变为终止密码子，从而使肽合成提前终止。37.错义突变：编码某种氨基酸的码子经碱基替换成编码另一种氨酸的密码子从而使多肽链的氨酸种类和序列发生改。38.同义突变：基被替换之,生了新的密码子但由于生物的遗传码子存在简并现象新旧密码子仍是同密码子，所编码的氨酸种类保持不变。 39. 限制性核酸内切：是一类能够识双链DNA 分子中某种特定核苷酸序， 并由此切割 D

11、NA 双链结构的核酸内切酶。要从原核生物中分纯化出来。40.基因拼接：将有共限制性内切酶切点基因连接起来形成种基因杂合体，如将 IFN- 与 亚间进行拼接，可成 IFN- 或 等。 . 基因缺失：有时了提高表达效率及低一些毒性作用，将基因中的非功能区域的编码子人地使之缺失的过程称基因缺失。42重组病毒载体：将源性的 直接插入缺型的病毒基因组上插入的 外源片段的大小同取代的病毒基因组区是等同的。这样形成重组体 能够在哺乳动物的纳细胞中增殖，使用病毒为病毒载体。43.重组质粒型载体： 即重组病毒 - 质载体，这类载体只病毒基因组中维持在哺乳动物中行复制的有关序列以抗性标记基因，使它一个细 菌质粒融

12、合，这样重组体也能够在大肠菌中进行复制和增殖44.基因工程多肽疫苗使微生物对人体具保作用的抗原基因经体重组表达后所制备的生物活多肽类疫苗称基因工多肽或亚单位疫苗。45.基因置换(gene ：指将致病基因整地被有功能的正常基所置换，使致病基因永地得到更正。46.基因修正(gene ：指将致基因的突变碱基序得以纠正，而正常序列部分予以保留使突变的致病基因恢正常功能。47.基因修饰 gene ：指将目的基因导入缺陷细胞或其细胞，目的基因的表达产物修饰和改变缺陷细胞功能或使原有的功能到加强。48. 基因失活( inactivation)：用反义技术特异封某些基因的表达以达到 抑制或阻止某些有基因的表达

13、49.转基因动物：就是把外源性目的基导入动物的受精卵其囊胚细胞中，并在细胞基因组中稳整合，再将合格的重受精卵或囊胚细胞筛出来，采用借 腹怀孕法寄养在雌动物的子宫 使发育成具表达目的因的胚胎动 能传给下一代。这，生育的动物为转基动物。50.动物克隆：是一种过核移植过程进行无繁殖的技术。取发育期的动物胚胎细胞，或成年物的体细胞，使之与掉细胞核的卵母细胞合，经短期培 养后形成胚胎细胞移植到生殖周期相近母体之中，可以发育为正常动物个 体。经过核移植而生的动物，其遗传结与细胞核供体完全相。这种不经过有 性生殖过程，而是过核移植生产遗传结与细胞核供体相同动个体的技术， 就叫做动物克隆。51.基因敲除：是向

14、正生物个体内引入某个变基因位点而选择性使某特定基因功能失活的技。52.ES 胞：胚胎干细胞，不仅有全能分化能力，且可以在体外培养立细胞株。同时还有无增殖和自我更新等功。53.基因：是控制生物状的基本遗传单位，遗传变异的主要物质支持着生命的基本构造和性。 二问答题1.什么叫基因？何谓因的新概念？其主功能是什么？答：基因就是指编有功能蛋白质多肽链 RNA 分所必须的全部核酸序。所 谓基因的新概念是着近年分子生物实验术的发展从分子水平研究基因的结 构和功能，提出的动基因、断裂基因、叠基因、假基因等基的新概念。功能：编码蛋白质RNA 分子本遗传信息的基本传单位 是构成 的 能单位。2.真核细胞基因组中

15、基因常有内含子存，能否在原核细胞中表达？，为什么？不能，为什？答：不能，真核细基因序列中的内含子插入在结构基因中间其不能连续的 间隔基因序列片段可随 DNA 录参与形成前体 mRNA，而后剪切掉，在原核细 胞中不包括这类内子，也缺乏相应加工统。因此不能完成内子基因序列的 剪切过程。同时，核生物基因在原核细中表达还必须有相应酶以及可识别的 原核细胞的启动, 才催化 合成。3.试述 DNA 分子的结构及其意义。答：DNA 一级构：即 DNA 分子中氧核糖核苷酸的列顺序。意义：1、蕴藏 遗传信息；2、定着 DNA 的空间结构基因间相互作用调控功能。DNA 二级构：为DNA 螺旋结构，由两反向平行互补

16、的脱核糖核苷酸链组 成。意义：形成遗信息稳定传递的半保复制机制。DNA 三结构，指双螺旋结基础上的卷曲，包超螺旋、多重螺旋等 DNA 体积更小、超螺旋状态存着必要的生物学程的能量和信息。一种 重要的功能态。三链 ：双螺旋结构基上形成的三链螺旋结。意义： 1、作为精确切割双 螺旋 DNA 靶列的分子剪刀、作为基因表达抑制物选择阻断靶基因，制 、阻止序列专一性白质结合，影 与蛋白质结合及 DNA 复制转录等。 四链 ：如端粒酶是真细DNA 末端特殊重复序列，对色体起保护作用。4.试述 cDNA 文库的构建过程及其义。答：过程：1、cDNA 隆：提取总 RNA，用亲和层法获取较纯的 mRNA。2、第

17、 一股 cDNA 合成：以离纯化的mRNA 为模板， 引物与反转录酶的用下，沿 模板的 3方向合成。 3、第二股 cDNA 的成： 自身引导 置换合 成法 外加引物成法 4 、cDNA 与体连接和导入宿主胞：cDNA 加或衔 接尾，使产生的黏末端与载体相应的黏末端互补，形成意义：1、 cDNA 内含子，大大减小长度，便于操作。、减少了筛选目的基 因的工作量。、利于获得较多板。、可直接找到编码，推测氨基酸顺序 分析性质和功能。、基因克隆可在原核细胞中表有生物活性的蛋白。5.试述基因组文库的建过程及其意义。答：过程：（1）分离纯化基组 DNA,提取哺乳动物细胞染体 DNA；（2） 备全部基因组的

18、DNA ）构建基因组文库体（ 4）DNA 片段与载的连 接包装5）导入细胞，可用粒或者噬菌体意义：（1）可于研究基因组中 5末端控制基因转的调控序列，内含的 分布和作用以及重序列的数量及分布的小）开展“人类基因组计划”研 究。3、在哺乳物细胞中，是表达目蛋白的基本形式之。6.什么是限制性核酸切酶？答：限制性核酸内酶是一类可以识别双 DNA 的异序列，并在识别位或其 周围切割双链 的一类限制酶。主要从原核生中分离纯化而来根据限制酶的 结构,辅因子的用方式，可将限制酶为三种类型： I 型II 及 III 型。 型既能催化宿主 DNA 甲基化，又催化非基化的DNA 的解；而型只催化 甲基化的 DNA

19、 水解III 型同时具有修饰及认切割的作用。7.试述双脱氧末端终 DNA 序法的原理及过程。答：原理：2 ，3双脱氧核苷酸（ddNTP）参入到新合的 DNA 链，由 于参入的 乏 3羟基因此不能与下一位核酸反应形成磷酸二键， DNA 合反应将中止。过程：测序时分成个反, 每反应除上述成分外别加入 2,3-脱氧的 C, G, T 核苷三磷 后进行聚合反 第一个反应物 ddATP 会机地代替d 参加反应一ddATP 入了新合成DNA 链 于3 位羟基变成了 所不 能继续延所以第一个反应中所产的DNA 都是到 A 终止; 同理 第二个反 应产生的都是以结 第三个反应的都以 G 结, 第个反应的都以T

20、 结尾, 电泳就可以读出序列了8.试绘图并说明大引 PCR 定点诱变法的过程。答：原理：以第一 PCR 产物作为第轮 PCR 扩增的引。第一轮以引物 和引 物 3 扩增出短片段 DNA物 2 含有预 设计的突变序列。 产物经纯化后 除去原来的引物然轮 PCR 增 产物作为大引物物 起再对靶 基因作第二轮 扩增，其产即为突 变的 。9.何谓基因工程的四里程碑和三大技术发明？答：四大里程碑：、肺炎球菌化实验，不仅证明生物的遗传物质是 DNA， 而且还证明了 DNA 可以转移，把一个细胞的性状递给另一个细胞； 2 双螺旋结构，建立 半保留复制及蛋白质合的中心法则，提出了传信息是 DNARNA蛋白质也

21、阐明了转录翻译过中出现误差造成生物异； 3遗传 密码子的破译：提操纵子学说，到完全译 64 个遗传密码子，确定传信息 是以密码子方式传的、基因转移载体发现 世纪 60 年，发现了细菌 的质粒，它是指生体染色体以外的环DNA，具有独立自复制的能力， 可在 微生物细胞间转移三大技术发明：工酶的发明（内切酶、成酶、连接酶） ；基合成和测序 （合成仪、测序仪 技术PCR 扩仪10.基因工程常用的载有哪些？其共同特如何？答：常用载体的种：质粒、噬菌体衍生物病毒；共同特征： 自主复制易于扩分离纯化有非必需有单一酶切位点选择标记基因 表达载体还应有达调控元件11.作为理想质粒载体基本条件有哪些？答：作为理想

22、的质载体 应具备以下个条件 1、能自主复制即本身是复制 子 2、具一种或多种限制的单一切割位点，在此位点中插入外基因片段， 不影响本身的复制能（3）在基因组中有 1-2 个筛选记 为寄主细胞提易 于检测的表型特征4）分子量要小，多拷贝，易于操。12.什么叫插入失活，例说明之？答：外源基因片段隆到插入型载体上后会使噬菌体的某种生功能丧失效力， 即所谓的插入失活应，也为克隆基因的择提供了表型。常用有免疫功能失 活和大肠杆菌乳糖甘酶失活。例一：免疫功能失。 是噬菌 434 免疫区段，通过菌体杂交的办 法导入体基因组，构成入型的派生载体内部有 EcoR和 Hind 的单一切割位点若在这两个位点中任一个

23、插入外致 基因的失活，阻遏白合成受阻，进入溶周期，结果产生出清的噬菌斑，而 亲本噬菌体 未失活，可以变溶原的状态，形成浑的噬菌斑。13.如何利用抗体标记因筛选阳性克隆？答：1、抗生素性标记筛选：大多数粒载体均带有抗生抗性基因，如抗氨 苄西林基因等，当有完整抗性基因的载转化抗性细胞后，所转入载体的细菌 都获得了抗性，被化的阳性克隆菌能在应抗生素的琼脂平板生长，而未被 转化的原宿主菌则能生长。2、抗性基因的插失活：在含有两个性基因的载体中，果目的基因 DNA 段插入其中一个抗基因，就会导致该抗基因的功能失活，用个分别含不同抗生 素药物的平板进行照筛选，可筛选出阳重组子克隆菌株。14.如何从所克隆到

24、基重组体中鉴定目的因的存在和正确性答：1、利用遗标志的表型特征筛选）由载体提供的性进行筛选：a、 抗生素抗性标记筛：当带有完整抗性基的载体转化抗性细胞，所有转入载体 的细菌都获得了抗，被转化的阳性克隆，能在含相应抗生素平板上生长形 成菌落，而未转化原宿主菌则不能生长 抗性基因的插入失筛选：在含 有两个抗性基因的体中，如果目的基因 片段插入其中一个性基因，就会 导致抗性基因功能活，用两个含不同抗素的平板进行对照筛。 c、乳 糖甘酶 基失活：通过基因互补作用，使缺 基因的变体和带有 完整 乳糖甘酶活的的突变体结合，形有功能活性的 乳糖 酶（2）根插入基因的遗传性进行筛选：如亮氨酸 ）为 Leu 营

25、养缺 陷菌所必须，如果源基因中能够可使细菌生长2、根据重组子的构特征筛选：）重组子大小鉴别筛选：带外源目的基因 的重组子质粒分量，条带滞后，反之在。鉴定原载体无外源目的 段，电泳为一条带装有外源基因的载体原载体和目的基因片两 筛选法：利用能与入基因片段两端互补特异引物，以少量抽的重 模板扩增出特异片的转化子为携有目的因的重组子，还可进直接 原位杂交：在培养平板上的菌落或噬菌按照其原来的位置原不变的转移到滤 膜上，并在原位溶裂解 变性和用特异探针进杂交。杂交：将重 组体 DNA 或 RNA 提取来，将样品点在硝酸维膜上进行杂交。化的重组体去除 了杂质干扰。）Southern ：将同源片段定位某个

26、酶切片段中，可于 对克隆后片段的基定位，也可测其含量15.质粒单酶切点的基连接缺点及如何降本底和防止自我环和提高连接效率？答：一般用细菌的小牛肠的碱性磷酸酶预先处理线性的载体 分子，以移 去其末端的 5-P 基团，于是在连接反应中，它己的两个末端就再也能被连接 酶共价连接起来了这样形成的杂种 DNA 子的每一个连接位中，载DNA 都 只有一条链是外源 DNA 接上的，而另外一链由于失去5-P 团，不能作 此连接，故留下一具有 3-OH 和 5-OH 缺口。另外，也可用双酶切片段 的定向克隆，用两不同的限制性核酸内酶切割目的基因和载，产生两个不同 的粘性末端，避免现象。16.真核表达调控的顺作用

27、元件和反式作因子有哪些？其作特点是什么？答：顺式作用元件：启动子，增强子，默子，衰减子，终止。作用特点：、多数位于真核生结构基因上游，只终止子位于下游，而强 子可以在上游也可在下游。 能够与 DNA 合蛋白质结合的定序列的 DNA 片段。3、决定录起始位点和 RNA 聚酶的转录效应。反式作用因子因子通用转录因子和转录节因子。作用特点 DNA 序列可被同蛋白质识别同蛋质因子可与不序列发生联系，但接连接为少数。 3、蛋质 蛋白质或 DNA-蛋白质的结合， 均导致构象上得细变化，构象变化常是现调控功能的分子基。 4、在反式 作用因子的自身生合成过程中，有相当的可变性和可塑性。17.目的基因表达系统哪

28、几种？其特点如？答：主要有原核和核两大表达系统。两个系统的特点：、真核生物 DNA 部分是非裸露的由核膜包裹，原核物 大部分 DNA 于非结合状态，又核膜相隔真核生物 DNA 中存在内含子， 原核生物 DNA 序中没有内含子、真核生物具有在要时以可控方式重某 些 DNA 片段扩增特定基因的制，原核生物中罕核生物有 种不同 的 聚合酶，而原核生往往只有一种核生物生的 mRNA 子寿命大 多比原核生物长真核生物初级转产物可进行转录后加工修饰真 生物不存在操纵子构，转录产mRNA 为单顺反子。原核因表达调控顺序为 纵子，转录产物为顺反子 8、真核生物基因为多拷贝而原核生物中除了RNA， tRNA 和

29、启动子分区域为重复序列其余基因很少含复序列生物一条 mRNA 上同时只能合成一肽链，原核生物每核糖体可独立合成一肽链。 10 真核生物翻译过程需要 SD 列的特异性结合原核生物必须依赖种序列 原核生物表达的外基因蛋白产物不能被基化。18.基因工程疫苗研究发常用的途径是什？答：19.基因治疗展望和应如何？答：展望：基因治存在感染率低，表达平低，长期表达效果，整合随机性 带来危害等自身问，以及伦理道德，安性，技术复杂，要求件高，所用细 胞寿命短等技术问。但它是人类治疗疑疾病的新方法，新技，随着研究和 应用的不断发展，断深入，技术不断完成熟，基因治疗将会人类常见病和多 发病及疑难病的有治疗中发挥巨大

30、作用许多原来视为“不治症”的疾病将 应用这先进技术得治愈，其应用前景极广阔。、遗传性疾病的基因疗 2、肿的基因治疗（ 1）抑癌基因转移的基因 治疗2）反义核苷酸的原癌基因活疗法（）药物自杀基因在瘤基因治疗 中的应用4）抗原基因转移的肿基因治疗5）多重耐药性基因移的肿瘤 基因治疗 3、病毒基因治疗1）止病毒复制策略（）使感染 HIV 细胞死 的方法（3）降策略20 有哪几种反义核苷酸基因失疗法？简述其原理。答：原理：反义 RNA 一种与 mRNA 补的 RNA 子，它是双链 DNA 无意义链 转录的 RNA，因此肿瘤癌基因活化表达的 mRNA 起始翻译部位就会相应的反 义 补结合形成 RNA/R

31、NA 双链体进而就阻止了核糖与启动子结合，或阻 止核糖体 mRNA 移，以抑制 mRNA 的翻译起到了抑制癌基过高表达癌蛋白的 效果。反义核酸包括三类1、将特异的反义基因重组到表达体上，导入靶细胞转录出反义 RNA。2、工合成寡聚脱氧糖核酸经过化学修导入细胞，与 和 DNA 结合，成 苷酸三聚体3、特性的核酸，根据癌因设计出特 异的“锤头”或“夹”结构，它能够催切割，降解异常表达因的 mRNA 而 响翻21.何谓动物克隆技术有何应用价值？答：动物克隆：是种通过核移植过程进无性繁殖的技术。取育早期的动物 胚胎细胞，或成年物的体细胞，使之与掉细胞核的卵母细胞合，经短期培养 后形成胚胎细胞并植到生殖

32、周期相近的体之中，可以发育成正常动物个体。 经过核移植而产生动物，其遗传结构与胞核供体完全相同。种不经过有性 生殖过程，而是通核移植生产遗传结构细胞核供体相同动物体的技术， 就叫做动物克隆。应用价值：、培育优良畜种和产实验动物。 、生产转基因动。 3、生产人 胚胎干细胞用于细和组织替代疗法。 4复制濒危动物物种保存传播动物物 种资源。22.试述 PCR 的原理及过。答：原理：是依据胞内 DNA 半保留制的机理，以及体 DNA 分子于不同温度 下双链和单链可以相转变的性质，在试中给 的外合成提供一种合条 件：模板 DNA，寡核苷酸引物， 合酶，合适的缓液系统DNA 性、 复性及延伸的温度时间等，

33、使目 得迅速扩增。其技术原理如图：PCR 过1 板变性：与体内不同，体外用 左右的高温使其变性形成单、模板与引物退 需要两条寡链核苷酸作为合成时引物， 分别与待扩增 DNA 的列两端互补。在降低温度过中，通过控制退火条件就能使与扩增区域两端配对。 3 种dNTP 及 Mg 子存在的条件下，DNA 聚酶在最适作用温度可将核苷酸从引物 3端掺入，沿模板延伸。整个程约需要30 轮的环。23.试述 RT-PCR 的原理过程答：原理：即逆转在逆转录酶的作用下 为模板合DNA,再以 为模板进行 PCR 反应。这低浓度的 mRNA 被扩放大易于检测。是种快速、 简便且敏感性极高检测 RNA 的方法，可用于分

34、析基因转录产物、克隆 及合成 cDNA 探针、改造 cDNA 序列。RT-PCR 过、mRNA引物和逆转录酶以适当的缓冲体系 70，成 相应的 cDNA 聚合酶，引，适当的缓冲体 灭活反应体系中的他杂质，4 保存。24 试述肿瘤的发生机理。答：1、癌基因原癌基因）的异常表。、抑癌基因的失活会对癌基因的异 常表达失去抑制作。3 胞在增殖过程由于些因素使DNA 在制过程中产生 碱基错配的基因，于细胞 DNA 修功能的丧失而无法到校正 肿瘤转移基 因和肿瘤转移抑制因相互制约的关系发失调或障碍。5 瘤细胞免疫功能 强弱也与肿瘤的发相关。25.试述肿瘤的发生与胞周期调控的相关 .答：细胞周期素和 等细胞周期相关蛋白表达或者缺陷，特别那些决定细 胞有 G1 入 S 期的蛋白表达异常，使细胞周进程超越或突破细周期的控制 点，细胞不能正常生细胞自发产生的细死亡，衰老或分化，而造成细胞恶性 增生，形成恶性肿 抑癌基因的突变或失，与许多恶性肿瘤发生 进展