无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友

无菌工艺验证培养基模拟灌装试验国家大容量注射剂工程技术研究中心葛均友无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第1页123|42

|Cont

tents培养基灌装相关法规要求怎样设计培养基灌装方案

培养基灌装评价与调查常见问题及FDA

483缺点

国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第2页3

|

无菌药品基本理念无菌药品生产须满足其质量和预定用途要求，应最大限度降低微生物、各种微粒和热原污染。生产人员技能、所接收培训及其工作态度是到达上述目标关键原因无菌药品生产必须严格按照精心设计并经验证方法及规程进行

|处理或成品检验。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第3页空调系统资质职责公用设施人员操作生产设备环境监控容器密封质量确保|

质量控制质量受权人

过程控制4

|无菌特征组成清洁消毒

质量确保更衣确认

人员卫生

文件体系物料质量

无菌药品风险分析为基础国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第4页5

|

培养基模拟灌装试验培养基模拟灌装试验---使用培养基作为药品替换品（Placebo）进行无菌模拟生产，对无菌工艺进行验证。

–

培养基灌装在某种意义上是一个挑战性试验，因为几乎在

全部情况下，微生物在培养基中繁殖和生长要比在实际

产品中更轻易全方面反应整个生产过程采取无菌工艺生产无菌产品能力。

|各国药品法规要求基本内容。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第5页6

|培养基模拟灌装试验

相关法规要求

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第6页7

||

ng

US

FDA和EU

GMP要求

FDA

CGMP

无菌工艺药品指南An

aseptic

processing

operatio

on

should

be

validated

using

a

microbiological

growth

mediu

um

in

place

of

the

product.

This

process

simulati

ion,

also

known

as

a

media

fill.

EU

GMP

Annex1

无菌药品生产Validation

of

aseptic

processin

should

include

a

process

simulation

test

using

a

nutrient

t

medium

(media

fill).国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第7页8

| GMP附录一：无菌制剂第四十七条无菌生产工艺验证应包含培养基模拟灌装试验。 应依据产品剂型以及培养基选择性、澄清度、浓度和灭菌适用性选择培养基。应尽可能模拟常规无菌生产工艺，包含全部对产品无菌特征有影响关键操作，及生产中可能出现各种干预和最差条件。 培养基模拟灌|装试验首次验证，每班次应连续进行3次合格试验。空气净化系统、设备、生产工艺及人员重大变更后，应重复进行培养基模拟灌装试验。培养基模拟灌装试验通常应按生产工艺每班次六个月进行1次，每次最少一批。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第8页9

| GMP附录一：无菌制剂 培养基灌装容器数量应足以确保评价有效性。批量较小产品，培养基灌装数量应最少等于产品批量。培养基模拟灌装试验目标是零污染，应遵照以下要求： （1）灌装数量少于5000支时，不得检出污染品； （2）灌装数量在5000至10000支时： 有1支污染，需调查，可考虑重复试验； 有2支污染，需调查后，进行再验证。 （3)灌装数量超出10000支时： | 有1支污染，需调查； 有2支污染，需调查后，进行再验证。 （4）发生任何微生物污染时，均应进行调查。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第9页批量（瓶）3000允许染菌数量（瓶）010

|

注册申报要求SFDA

化学药品注射剂基本技术要求（）

…

培养基灌装验证是对设备、环境以及人员操作一个系统验证,是判断无菌确保水平关键伎俩…工艺验证工作主要为培养基灌装验证试验。灌装批数、批量与合格标准见表1。

|4750

63007760≤1≤2≤3国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第10页fofo

|11

|

相关指南文件PDA

关于培养基模拟灌装技术汇报

–

PDA

Technical

Repo

ort

No.

28,

Process

Simulation

Testing

or

Sterile

Bulk

Pharmaceutical

Chem

micals,

Revised

Supplement

–

PDA

Technical

Repo

ort

No.22

1996,

Process

Simulation

Testing

or

Aseptically

Filled

Products

）国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第11页12

|培养基模拟灌装试验

试验设计

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第12页13

|

1、试验涵盖范围模拟必须包含产品成为无菌状态后全部无菌生产工艺步骤(如转运,

灌装,

装载/卸载,

冻干,

加塞,

轧盖)

模拟必须包含全部无菌处理(如灌装线设置,

无菌连接,人员干扰操作)

培养基灌装研究不包含非无菌混合操作或产品除菌工艺(如无菌过滤)

培养基制备和灭菌能够与产品

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第13页14

|

2、多产品简化试验思绪一条灌装线生产多个产品时，

依据以下原因可被划分为不同类型组

灌装工艺

不一样容器、密封方式由此选出两个或更多个在以下方面能涵盖全部其它相关产品产品：

容器大小、开放或密封设计

灌装线速度和干预

|

冻干,

贮存容器形式、转移方式推荐使用类似于矩阵式试验设计，选择产品和工艺国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第14页15

|

模拟灌装试验设计包装容器代表性选择：

–

对于多规格、容器形状不一样灌装生产线，应对不一样大

小、形状容器进行评定。

–

多数可能选取最大敞口直径容器和最低生产线速度；

–

有时也会选择轻易倒落小型容器用来代表最差情况，

因可能需要更多人工干预；

–

当不能兼顾

|

时，应考虑选取有代表性几个容器进行培

养基模拟灌装试验。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第15页材质与安装质量16

|

3、验证与确认稳定产品质量性能确认及工艺验证（PQ/PV）可靠设备性能

运行确认（OQ）安装确认（IQ）

|用户需求与设计

设计确认（DQ）国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第16页17

|

验证开始前准备工作设备设施确认

HVAC及压空系统（或氮气）确实认

设备在线清洗和灭菌CIP

P,SIP灭菌工艺验证

湿热、干热灭菌工艺

除菌过滤验证及空气过滤器完整性检测

容器/胶塞密封完好性测试人员培训

|

无菌更衣确认环境监控符合要求国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第17页18

|

4、模拟灌装试验设计最差情况：高于或低于正常范围条件程度，与正常生产条件相比最有可能造成工艺或生产失败条件。宜尽可能模拟实际无菌生产过程，并包含产品加工中“最差情况”。其设计应含有以下几方面代表性：

–

时间代表性

|

–

运行代表性

–

包装容器代表性国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第18页19

|

模拟灌装试验设计时间代表性：

–

应选择正常工作阶段不一样时间间隔，并考虑可能

中止、换班。培养基灌装应连续足够长时间，覆

盖允许工艺时间程度，并包含实际加工中最常发生

操作。操作代表性：

–

依据实际生产中可能发生动作或操作来设计培养基

|

中发生、允许和禁止干预事件一览表，并在试

验中进行模拟。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第19页20

|

模拟灌装试验设计运行代表性：应模拟包含“最差情况”生产条件下进行培养基灌装。（如：最大干预次数、模拟加卸料、可能生产线停机纠正、灌装针/管调整和更换、人工轧盖、在线过滤器更换以及所用人员数量等）

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第20页|21

|

最差条件设计（1）储存时间验证灌装设备、部件、储罐、无菌物料、药液在实际灌封前能够放置最长时间

–

1.

灌封设备、灌封部件、储罐、无菌物料需要再灭菌（除菌

）时间间隔

•

用超出单项验证后确定最长保留时间设备部件、储

罐、无菌物料参加培养基灌装试验

–

2.

产品从无菌过滤到灌封加塞完成所需要时间

•

无菌过滤后存放在中间储罐内培养基模拟实际生产时产

品最大储存时间后再灌封产品在灌装后密封前储存时间国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第21页22

|

最差条件设计（2）最长灌装连续时间最保守设计：在培养基灌封试验中，模拟生产用时最长批量所需要时间，其中包含正常干扰时间（换班、设备维修）。（普通不采取）其它设计：1

1.在生产完成后接着进行培养基灌封试验2.为了降低灌封瓶数，在每批试验开始、中间及结束前均灌装培养基，

|

–

任何干扰操作都应在培养基灌装时进行

–

在正常生产过程中所需最长时间，包含可能发生事件，人员

换班等国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第22页|拟一次23

|

最差条件设计（3）干预设计全部干预都应是预先设定和进行统计正常—每班次都会发生（灌封线装配，称量调整，加胶塞/铝盖，处理倒瓶，中控取样，环境监测，手工补充轧盖等）非正常—非正常情况才会发生（设备故障，灌封线堵塞，轨道调整，拆卸/替换破损部件）SOP中应列出哪些干预是允许，非正常干预最少每年模干预次数应该等于正常生产时发生次数国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第23页|设备组装加入胶塞取出卡住胶塞取走倒下玻瓶手工装载到冻干机放置热电偶环境监测-放置和取走培养皿操作人员进出及更衣24

|干预举例—冷冻干燥工艺不一样区域玻瓶破碎设备故障更换灌装针头灌装针头位置调整自动称量故障自动加塞故障国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第24页25

|

5、培养基灌装试验频率新建或生产工艺、设备、人员等重大变更后无菌工艺生产线，必须经最少连续三批合格培养基灌装试验常规生产条件下再验证频率，培养基模拟试验通常按生产工艺每班次六个月进行1次，每次最少一批。生产线生产不一样规格无菌产品，则应考虑不一样规格产品原因，培养基灌装试验最差情况进行评定。

|员，确保每年最少参加一次成功培养基灌装试验。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第25页26

|

变更后培养基模拟灌装试验变更及其评定

对产品或生产线每一个变更，均应依据书面变更控

制系统进行评定

。

假如经过评定认为此项变更会影响到无菌生产工艺产品

无菌确保水平，则需要进行增补性培养基模拟灌装实

验。

比如，设施或设备改变、生产线配置变动、人员重

|

环境监控异常和无菌检验结果阳性等。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第26页|培养温度27

|

6、试验用培养基和培养温度选择培养基选择

适应广谱微生物生长，包含细菌和真菌

很好澄明度，较小粘度

液体培养基易于除菌过滤

惯用培养基：3％大豆胰蛋白肉汤（TSB）

厌氧培养基仅在特殊情况下使用（FTM）

干粉工艺：具备与干粉产品流动性能相同无菌TSB干粉或

无菌抚慰剂粉末（PEG,乳糖,甘露醇…)20-35℃，目标值±2.5℃，不少于14天；如选择两个温度，

则每一温度下最少培养7天，从低温开始。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第27页28

|

惰性替换粉末选择惰性替换品选择要求：

–

无活性、易灭菌

–

易溶解

–

对培养基促进生长作用无副作用

–

易灌装，流动性要好（培养基流动性较差）惯用替换品

–

聚乙二醇Polyethylene

glycol

系列(PEG

6000,PEG

8000）,

甘露醇Mannitol，乳糖Lactose等

|

–

事先需要伽马辐照灭菌（钴60，用量约15～25kGy）

–

应进行无菌性、抑菌性和溶解度测试国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第28页29

|

培养基适应性检验培养基适应性检验

应符合培养基无菌性检验及灵敏度检验要求。本检

查培养基灌装试验前或同时进行。

必须用药典要求标准微生物或工厂特定微生物（分离

自环境人员监测及无菌试验）来进行

通常为枯草芽孢杆菌、白色念珠菌，菌液浓度控制约在

100个菌/ml

加入菌液应小于100

CF

FU/单位

|

生长良好，判该培养基适应性检验符合要求国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第29页30

|

7、灌装体积与数量单位灌装体积

选择体积要使培养基能适当地接触容器内表面，而且适当翻

转或旋转，接触到密封件内表面。

每只容器灌装体积普通不少于总容积1/3，但也要考虑保

留25

%

至40

%顶空能确保肯能存在微生物取得足够氧

气生长。

对于厌氧灌装:

用惰性气体代替氧气，

并使之完全充满容器灌封试验数量

综合考虑统计学要求和实际生产批量。

|

5000瓶，则培养基灌封最少应为实际生产线最大批次量。

PIC

(>3000瓶)：假如正常生产批次量低于3000瓶，则培养

基灌封最少应为实际生产线最大批次量。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第30页|31

|

8、培养基模拟灌装试验阳性对照培养基阳性对照试验：

随机选取已经完成14天培养灌装培养基样品，按照药典要求

–

惯用枯草芽孢杆菌、白色念珠球菌或工厂特定菌作为阳性菌

–

将每个菌种准备含<100cfu

u/0.1ml菌液，每个菌种接种2支

培养基样品，同时并平板计数（双份）

–

对真菌在20-25°C下培养，对细菌在30-35

°C下培养，天天

检验，5天内需有生长迹象国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第31页I.32

|MP

9、培养基灌封试验合格标准FDA、EU

GMP

和中国新版GM

无菌附录：灌封量<5000瓶时，若有1瓶污染，需彻底调查，并重新验

证(3批)。II.

灌封量为5000-10000瓶时，若有1瓶污染，视调查结果决定

是否需要重新进行1批培养基灌封试验；若有两瓶污染，必

须重新验证（3批），同时进行彻底调查。III.

灌封量>10000瓶时，若有1瓶污染，需彻底调查；若有两瓶

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第32页污染瓶数01234595%置信限值333

|

培养基灌封试验合格标准PIC及SFDA研发注册标准：在95

5%置信限时污染率低于0.1%。

计算公式：污染率

=

(95%置信限值)/(灌封容器数)

×

100%

污染瓶数与95%置信限值间关系678910

|4.74

6.3

7.75

9.15

10.

.51

11.84

13.15

14.43

15.7116.9

6国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第33页菌空气破真空（不使用惰性气体），全压塞、轧盖1.2.3.4.

1.

2.

3.34

|

10

0、举例-冻干工艺方式A：模拟灌装、装载/卸载过程，缩短放置时间容器内灌封好培养基，以半压塞状态装入冻干机冻干机内部分抽真空，在室温放置一定时间，不进行冷冻。用无菌空气破真空（不使用惰性气体），全压塞、轧盖缺点:真空度不能过高，不能照成培养基沸腾。方式B：以经稀释培养基模拟冻干过程容器内灌封好经稀释培养基，以半压塞状态装入冻干机模拟冻干过程，直到容器内培养基大致到达正常浓度。用无

|缺点：耗时长，需开发特殊冻干程序，营养支持性不均一，影响微生物存活力。

国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第34页1.2.35

|

冻干工艺方式C：模拟灌装、装载/卸载过程，缩短放置时间，不抽真空或补充空气容器内灌封好培养基，以半压塞状态装入冻干机冻干机不抽真空或者边抽真空边补充无菌空气。在室温放

置一定时间，不进行冷冻。注意：用培养基完全模拟冻干工艺非常困难(

如时间长、真空、低温等)

应该首先识别有污染风险活动，并加以模拟(

如未完全密封小瓶

|

小瓶必须不被冷冻

注意确保培养基需氧状态国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第35页|注意事项36

|

举例-无菌粉末分装工艺方法A

在灌装线上手工或增加灌装设备，先灌装液体培养基，再分装无

菌替换品粉末后压塞、轧盖。方法B

在灌装线上手工或增加灌装设备，先分装无菌替换品粉末，再灌

装液体培养基后压塞、轧盖。方法C

先灌装干粉培养基，再手工或增加设备加入注射用水所用惰性剂或干粉培养基需事先经过辐射灭菌。惯用替换品粉末有聚乙二醇、甘露醇、乳糖等。应对添加替换品量和对培养基适应性影响进行研究和评定。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第36页|37

|

举例-无菌原料药原料药生产工艺中常有结晶步骤，因结晶过程有相变产生，也使模拟过程存在困难。可用一个液体介质模拟结晶过程，让其流经除菌过滤器和全部管路加到结晶罐中。若结晶过程有加晶种操作，模拟过程中也应有这么操作，晶种也可用模拟介质代替。为使晶体粒度均匀，有些结晶过程需要降温，在模拟过程中一般不应降温，因在低温下抑制微生物生长。离心、洗涤和干燥步骤普通采取常温，以免温度对微生物影响。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第37页38

| 11、环境及人员监测环境和人员监测－按照对应规程和方案进行，应涵盖无菌工艺各工序，频次数与正常生产一致。包括： 空气粒子数 沉降菌 浮游菌 表面微生物 人员监测 |国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第38页39

|

12、其它提议关键点模拟灌装全过程提议应进行录像，便于事后调查分析和原因查找，也有利于员工培训。如有可能，应有专员观察和统计操作人员有意或无意干预行为及时间。在试验设计时，有时还要考虑人员状态，如夜班人员注意力往往不够集中。培养基灌封后能够进行生产，但要等培养基灌封合格后产品才能放行

|样品或按照托盘应进行编号，方便

于调查和追溯国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第39页40

|培养基模拟灌装试验

结果分析与调查

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第40页41

|

培养后检验目检培养基是否浑浊，是否有微生物生长要由经过培训、而且有资质能够发觉微生物生长迹象人员进行检验假如在两个温度下培养时，必须在温度切换时进行中间判读可疑单位马上交给质量控制微生物

人员，进行进

|一步分离培养和判定。依据染菌单位数，判断是否到达验

证接收标准国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第41页污染

率|42

|灌装污染曲线图

1

污染可能起源于液体培养基

(

如与培养基贮罐非无菌连接，

在循环管路中受到污染，微生

物连续繁殖)。在灌装结束时，

应注意保持培养基贮罐处于无菌密闭状态，在储罐内取样测

试，能够核实这么假设。灌装过程(时间或灌装数量)国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第42页污染率|43

|灌装污染曲线图

2

表明污染仅发生在试验初

期，可能污染来自起始

生产设备中（

胶塞容器/

轨道,

计量泵

/

针头)，在灌装过程中污染被部分或

全部“清洗掉”。灌装过程(时间或灌装数量)国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第43页染率

污

|灌装过程(时间或灌装数量)44

|灌装污染曲线图

3

出现一个尖峰（在短时段一

些产品被污染）可能与在灌装

过程中不正确操作或干预造成

污染相关。

很关键是必须知道被污染产

品灌装准确时间，以及当初

实施干预办法（灌装操作过

程录像是非常有用），这

样会比较轻易调查到原因。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第44页率

污染灌装过程(时间或灌装数量)45

|

灌装污染曲线图

4

一样可能是某个假如错误

干预办法所造成，不

同是该污染影响到液体

管路/回路时（如培养

基贮罐改变，泵或针|

替换），造成微生物连续

繁殖。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第45页污染率

|灌装过程(时间或灌装数量)46

|灌装污染曲线图

5

非常不幸是，这种现象

是最常出现，也是最难

调查。假如这种现象在

屡次试验中重复出现，可

能说明这个工艺存在不确

定原因，需要采取根本

办法（如

更衣/着装、消

毒剂和气流模式改变)国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第46页47

|

失败调查流程|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第47页

–

人员样

–

表面样

–

环境空气样2.

对培养基污染评定

–

培养条件

–

对污染培养基菌种必须进行

判定

–

确定培养基污|染可能发生时

间3

3.

惰性粉末无菌测试评定48

|

培养基灌装失败调查

11.

生产环境监控数据评定

4.

对气体取样结果评定

–

压缩空气

–

氮气等5.

对水微生物评定

–

纯水

–

WFI6

6.

对培养基评定

–

培养基配制和消毒统计

–

培养基预培养条件

–

培养基预培养结果中国家大容量注射剂工程技术研究

48

心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第48页1.

粒子监控评定–––––粒子测试监控情况层流风速报警统计烟雾测试历史监控情况和趋势2.

清洁和消毒评定

–

设备清洁

|消毒3.

消毒剂配制检验

–

起源或配制百分比统计

–

效期及效力

49

|培养基灌装失败调查

24

4.

人员评定–––––灌装间最多人数操作人员连续工作时间其它人员更衣情况手消毒及污染可能中

5

5.

干预操作评定

–

频次，是否有非预期干预

–

危险程度

–

污染样品与干预关联国家大容量注射剂工程技术研究

49

心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第49页50

|

培养基灌装失败调查

3设备评定

–

灭菌柜

•

灭菌装载情况，灭菌程序和统计等

•

最近穿透试验，泄漏试验和干燥试验结果

–

隧道烘箱，洗瓶机等

•

运行状态，参数是否正确

•

隧道烘箱各段层流压差是否正确

–

灌装设备

|状态

•

设备是否存在偏差和非计划干预

–

过滤器完整性测试评定

•

产品和空气过滤器完整性测试结果中国家大容量注射剂工程技术研究

50

心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第50页51

|

培养基灌装失败后续办法调查结论与风险评定

培养基灌装试验结果有效

暂停生产，直至确定污染起源并采取有效纠偏办法。

对培养基灌封试验后和以前所生产产品，进行风险评定

培养基灌装试验结果无效，重新进行培养基模拟灌装

试验

无菌灌装区物理条件不满足要求

|后续办法

依据调查情况，采取纠偏办法后，进行一批或多批培养

基模拟灌装试验。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第51页52

|关键点提醒：

任何失败样品都应单独进行分离培养和判定，因为可能不只有一个污染源。

人员与环境等监控微生物也应进行分离判定，并与污染菌相比较。

防止试验室引入新污染，造成误判

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第52页53

|培养基模拟灌装试验

常见问题及缺点

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第53页|54

|

常见问题怎样判断哪些灌装样品不需要进行培养？

破损，影响到密封性样品

完整性测试（泄漏测试）失败样品

文件中明确要求给予丢弃中控测试样品

设备自动剔除样品

文件中明确要求，每次干扰后应予手工剔除样品

（要求应详细、明确，并需证实其可操作性和稳定可

信性）。

剔除样品应进行统计注明丢弃原因国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第54页55

|

常见问题是否需要厌氧工艺模拟灌装试验？

假如工艺中存在冲氮气等惰性气体操作时

假如在环境监测样品或无菌试验中检出厌氧菌

有企业认为，即使常规无菌工艺，也应定时使用硫乙醇酸

盐培养基进行厌氧工艺模拟试验，或在模拟过程中进行培

养基切换。培养基灌装试验中样品是否需要在培养过程中进行

|

不需要。培养基灌装样品应在开始培养前进行操作，使

培养基充分接触到内部各个表面，开始培养后不应再进行

反转等干扰。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第55页56

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常见问题怎样对培养基灌装试验中干预进行设计？

考虑到最差情况

涵盖整个生产周期，包含换班、连续生产等

全部干预应经预先同意和文件化，干预描述、发生时间、频

率、连续时间、受影响瓶数等

常规干预每次培养基灌装都要模拟，非常规干预可每年一次。培养基灌装试验是否要模拟全部生产过程？是否可以分段进行模拟试验？

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菌过滤以后。

能够，比如冻干工艺，能够把无菌灌装和冻干模拟分开；粉

针工艺中可把加注培养基与粉剂分装分开。但都需要有明确

方案和判断标准。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第56页|57

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常见问题什么情况下，能够认为培养基灌装试验无效？

阳性对照失败

工艺过程中在无菌操作区发生重大偏差，如停电，高效过

滤器损坏等在培养基灌装试验中，是否必须进行录像？录像保存期需要多长？

不是必需，录像仅是一个可选辅助调查和培训伎俩。

假如采取了录像办法，也仅作为企业内部资料（如同内

部审计汇报），无须向检验员出示。

企业应有文件要求，什么情况下要进行录像，录像储存

时间等国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第57页58

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Warning

LetterYour

firm

failed

to

design

and

perform

an

adequateaseptic

process

simulation

(i.e.,

media

fill)

basedupon

the

same

controls

used

for

routineproduction.

We

note

that

t

the

(b)(4)

wasobserved

(b)(4)

during

ac

ctual

production.

However,this

intervention

was

per

rformed

only

once

duringthe

media

fill

in

.

–

企业培养

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基灌装验证未依据日常生产控制进行设计

和完成，如在实际生产中观察到一些干预操作国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第58页th59

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Warning

LetterThe

written

procedur

res

related

to

theproduction

simulations

–

“media

fills”

-conducted

to

validate

e

your

capability

toaseptically

produce

s

small

volume

parenteral(SVP)

were

found

to

be

inadequate.

The

mediafills

for

this

line

did

not

represent

actualoperations

used

in

he

aseptic

production

ofampoules

and

vials.培养基灌

|装没有模拟实际生产过程。国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第59页60

|

Warning

Letter-

A

routine

production

of

a

(b)(4)

Injection

vials

lot

would

take

approximately

(b)(4)

hours

to

be

filled.

Your

written

pro

ocedures

for

routine

production

require

tha

at

an

intervention

take

place

every

(b)(4)

minu

utes

for

fill-weight

verification

measurements.

SOP要求每几分钟就要对装量进行测试，不过模拟

|国家大容量注射剂工程技术研究中心无菌工艺验证培养基模拟灌装试验葛均友第60页61

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Warning

Letter–

The

process

simulatio

ons

(media

fill)

do

not

represent

actual

production

operations

for

your

sterile

API.

The

proces