新生儿溶血三项检测的临床应用课件

新生儿溶血三项检测的临床应用1新生儿溶血三项检测的临床应用1有报道:新生儿溶血病(HemolyticdiseaseofnewbornHDN）,系指母、婴血型不合引起的同族免疫性溶血;已发现的人类29个血型系统中，以ABO血型不合最常见，Rh血型不合较少见;2有报道:新生儿溶血病(Hemolyticdiseaseo胎儿从父亲遗传而来的红细胞抗原恰为母亲所缺少,胎儿红细胞通过胎盘进入母体血循环中刺激母体产生相应的血型抗体（IgG）。此抗体又可通过胎盘进入胎儿血循环中导致胎儿、新生儿体内特异性抗原抗体反应，使红细胞致敏单核-吞噬细胞系统内破坏而溶血。3胎儿从父亲遗传而来的红细胞抗原恰为母亲所缺少,胎儿红细胞通过ABO溶血病的病因和发病机制ABO血型的遗传有A基因者称A型，有B基因者称B型，同时有A、B二个基因者称AB型，有H基因而无A、B基因为O型假如母“O”型，父“A”型（纯合子或杂合子）母基因型OOAOA父基因型AA子基因型子血型AOOO母基因型OO父基因型AOAO或或4ABO溶血病的病因和发病机制ABO血型的遗传母基因型OOAOABO血型抗体正常情况下，红细胞上缺乏A或B抗原时，血浆中存在相应的抗体即抗A抗体或抗B抗体为天然抗体，以IgM为主，实质是由于机体与广泛存在的类ABO物质接触产生。如果由于输血、怀孕或类ABO物质的刺激使抗体浓度增加，这种免疫抗A或抗B抗体多半为IgG，特别是O型母亲。5ABO血型抗体5ABO血型与抗体6ABO血型与抗体6ABO溶血病可发生在怀孕第一胎自然界存在A或B血型物质如某些植物、寄生虫、伤寒疫苗、破伤风及白喉类毒素等。

O型母亲在第一次妊娠前，已接受过A或B血型物质的刺激，血中抗A或抗B(IgG)效价较高。怀孕第一胎时抗体即可进入胎儿血循环引起溶血。ABO血型不合中约20%发病血浆及组织中存在的A和B血型物质，部分中和来自母体的抗体。胎儿红细胞A或B抗原位点少，抗原性弱，反应能力差。7ABO溶血病可发生在怀孕第一胎7Rh溶血病的病因和发病机制Rh基因编码Rh抗原的两个基因是RHD和RHCE;Rh基因系统的等位基因中最重要的是D、E、C、c、e五种，不存在d基因;RHD基因编码D抗原，RHCE基因的编码产物为C/c和E/e，C和E一起遗传，排列为DCE；无d抗原;d表示D阴性表现型;RHD和RHCE基因编码的单倍型中最常见的有8种形式：Dce、dce，DCe、dCe、DcE、dcE、DCE和dCE。8Rh溶血病的病因和发病机制Rh基因8Rh溶血病红细胞缺乏D抗原称为Rh阴性，具有D抗原称为Rh阳性，中国人绝大多数为Rh阳性。母亲Rh阴性(无D抗原)，若胎儿Rh阳性可发生Rh溶血病。母亲Rh阳性(有D抗原)，但缺乏Rh系统其他抗原如E等，若胎儿有该抗原也可发生Rh溶血病。RhD溶血病最常见其抗原性强弱依次为D＞E＞C＞c＞e。RhD溶血病最常见，其次为RhE，Rhe溶血病罕见。9Rh溶血病9Rh溶血病一般不发生在第一胎由于自然界无Rh血型物质

初发免疫反应次发免疫反应第一胎不溶血第二胎溶血胎盘10Rh溶血病一般不发生在第一胎初发免疫反应次发免疫反应第一Rh溶血病发生在第一胎的情况Rh阴性母亲既往输过Rh阳性血。Rh阴性母亲既往有流产或人工流产史。极少数可能是由于Rh阴性孕妇的母亲为Rh阳性，其母怀孕时已使孕妇致敏，故第一胎发病（外祖母学说）。RhD血型不合者约5%发病母亲对胎儿红细胞Rh抗原的敏感性不同。11Rh溶血病发生在第一胎的情况11临床表现

12临床表现12实验室检查

血型检查母子ABO和Rh血型溶血检查溶血时红细胞和血红蛋白减少，早期新生儿毛细血管血血红蛋白<145g/L可诊断为贫血;网织红细胞增高（第一天>6%）;血涂片有核红细胞增多（>10/100个白细胞）;血清总胆红素和未结合胆红素明显增加;致敏红细胞和血型抗体测定13实验室检查血型检查13抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验：

又称Coombs’试验，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。经常用作试验的有两类方法。直接试验：是检查被检红细胞上有无已结合的不完全抗体（包括IgG类的抗A或抗B）。间接试验：是检查血清中游离的不完全抗体（包括IgG类的抗A或抗B）。14抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验：14直接Coombs试验抗人免疫球蛋白自身抗体15直接Coombs试验抗人免疫球蛋白自身抗体15注意事项

标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞中丢失。抗球蛋白试剂应按照说明最适稀释度使用，否则可产生前带或后带现象而误认为阴性结果。受检红细胞一定要用盐水洗涤3次，除去红细胞悬液混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。最好对阴性结果进行核实，即在该试管中再加1滴IgG致敏红细胞如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白试剂未被消耗，阴性结果可靠。如需了解体内致敏红细胞的Ig类型，则可分别以抗IgM或抗C3单价抗球蛋白试剂进行试验。16注意事项标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗注意事项红细胞上吸附抗体太少,直接抗球蛋白试验可成假阴性反应。全凝集或冷凝集血液标本中有很多网织红细胞且抗球蛋白试剂中含有抗转铁蛋白时，均可使红细胞发生凝集。试剂：多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）；阳性对照细胞[IgG抗D致敏的5%Rh(D)阳性红细胞生理盐水悬液。取3人份O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后取压积红细胞，加等量抗D血清，至37℃水浴致敏1小时，取出后用生理盐水洗涤3次压积红细胞洗涤配成5%红细胞生理盐水悬液]；阴性对照细胞（正常人5%红细胞生理盐水悬液。取3人份O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后取压积红细胞，配成5%红细胞生理盐水悬液）。17注意事项红细胞上吸附抗体太少,直接抗球蛋白试验可成假阴性反应间接Coombs试验抗人免疫球蛋白同种异型抗体18间接Coombs试验抗人免疫球蛋白同种异型抗体18注意事项如血清与相应红细胞在37℃水浴中致敏1小时，75%的抗体吸附于红细胞上，如致敏2小时，则抗体吸附达95%；如以低离子盐水溶液代替生理盐水配制5%红细胞悬液，则致敏时间可减少至15-30分钟，但抗Fy抗体需较长的孵育时间。红细胞洗涤应迅速、彻底。要将生理盐水用力冲入管底，使管底红细胞松散分离。要防止手上的蛋白质污染。1滴1:4000稀释的血清可中和抗球蛋白血清1滴，导致假阳性结果。离心速度和时间非常重要，应取能使阳性对照管出现阳性反应的最小离心力和最短离心时间。19注意事项如血清与相应红细胞在37℃水浴中致敏1小时，75%注意事项当红细胞上的抗体分子数量在500个以上时在有利于抗球蛋白与不规则抗体的结合，当红细胞上抗体数量较少，可通过反复离心、摇摆，在离心的方法，增加抗原抗体的接触，提高阳性率。如果检测的抗体为补体依赖抗体，则必须加入新鲜AB型血清.试剂：多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）；已知抗体血清（用于检测特殊红细胞抗原）：5%已知抗原的红细胞盐水悬液（用于检测血清中不完全抗体）；5%D阳性红细胞盐水悬液（阳性对照用）；不完全抗D血清：AB型血清。20注意事项当红细胞上的抗体分子数量在500个以上时在有利于抗球抗人球蛋白试验的应用直接法：常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。间接法：多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生。亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。21抗人球蛋白试验的应用直接法：21游离试验检查新生儿血清中游离抗体：

将新生儿血清与标准A(B)细胞（与新生儿同种红细胞）做间接抗人球蛋白试验，阳性结果，则表示有抗体存在。

新生儿血清中游离抗体检查结果意义指示红细胞意义

ACBCOC+--游离的抗-A-+-游离的抗-B++-游离的抗-A抗-B或-AB+-+-+游离的ABO系统以外的抗体

---无游离抗体22游离试验检查新生儿血清中游离抗体：22放散试验

放散试验原理

抗原与抗体的结合是可逆的。在物理和化学的条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试验。

23放散试验放散试验原理23

放散液

用放散试验技术将大量附着于红细胞上的抗体放散到小量的生理盐水中，这种含有抗体的溶液称为放散液放散液中的抗体具有特异性，可以与相应抗原结合，从而可以进一步确定抗体的特异性。24放散液242525262627272828

热放散试验

主要应用ABO血型系统新生儿溶血病及从红细胞上洗脱掉IgM及IgG抗体。此方法制备抗体最容易，但抗体回收较差，即如果抗体较弱，放散试验可得到假阴性的结果。其优点是适用于一般化验室，缺点是放散液中含有较多游离白蛋白。29热放散试验主要应用ABO血型系热放散试验方法

1.将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤3-4次，最后一次尽量吸取红细胞上层的生理盐水。

2.在压积红细胞中加等量生理盐水（也可用AB血清或6%牛血清白蛋白），置56℃水浴箱中10分钟，期间摇动数次（15-30S摇动1次）。

3.取出后立即高速离心，3000转/分钟；取上清液（樱红色的上清液即为放散液），与已知红细胞试验。按不同试验要求做试验，将放散液作为抗体使用。30热放散试验方法1.将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤33131热放散试验注意事项鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗体较弱，可用酶处理红细胞做试验放散液用生理盐水制备不稳定，若要保存放散液，用AB血清进行放散受检血清与吸收用红细胞比例要高一些，若抗体弱，可以充分与红细胞结合加热放散温度要准确，如温度降低，放散出的抗体又会重新与抗原结合放散抗体时，应不断摇动，促使抗体从抗原抗体复合物上分离下来32热放散试验注意事项鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗乙醚放散试验

主要应用于温自身抗体（IgG）或同种抗体引起的直抗阳性，以及用于分离IgG抗体混合物其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫血，鉴定Rh抗体效果最好，不宜用于ABO抗体鉴定33乙醚放散试验主要应用于温自身抗体（IgG）或酸放散34酸放散34放散试验的应用鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体在溶血性贫血和可疑输血反应中，用来鉴定产生直抗阳性的红细胞制备少量的单特异性抗体从病人红细胞上去除抗体，制备可用于自身吸收或鉴定血型及交叉配血次测试验中使用的红细胞35放散试验的应用鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体35新生儿红细胞抗体放散试验结果意义

指示红细胞意义ACBCOC+--放散出IgG抗-A-+-放散出IgG抗-B++-放散出IgG抗-AB或同时放散IgG抗-A或IgG抗-B+-+-+放散出ABO血型以外的抗体

---没有放散出抗体36新生儿红细胞抗体放散试验结果意义36

新生儿血型血清学检查结果分析

游离释放结果直抗试验试验抗筛判定意义

+/-++-/+确诊ABOHDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体

+/--+-/+确诊ABOHDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体+/--+-/+确诊ABOHDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体+---可疑可疑ABOHDN

-+--可疑可疑ABOHDN

----否定血清学实验未能证实37 新生儿血型血清学检新生儿溶血三项检测38新生儿溶血三项检测38治疗产前治疗血浆置换宫内输血酶诱导剂提前分娩新生儿治疗光疗药物治疗换血疗法其他治疗39治疗产前治疗新生儿治疗39产前治疗血浆置换目的：换出抗体，减少胎儿溶血用于：血Rh抗体效价明显增高，又不宜提前分娩的孕妇宫内输血直接将与孕妇血清不凝集的浓缩红细胞在B超下注入脐血管或胎儿腹腔内目的：纠正贫血用于：胎儿水肿或胎儿Hb＜80g/L，肺尚未成熟者40产前治疗血浆置换40产前治疗酶诱导剂孕妇于预产期前1～2周口服苯巴比妥目的：诱导胎儿UDPGT产生增加，减轻新生儿黄疸提前分娩既往有输血、死胎、流产和分娩史的Rh阴性孕妇本次妊娠Rh抗体效价逐渐升至1:32或1:64以上用分光光度计测定羊水胆红素增高羊水L/S＞2，提示胎肺已成熟41产前治疗酶诱导剂41光疗

降低血清未结合胆红素简单而有效的方法。通过光线照射，能使胆红素的性质改变后经胆汁排泄到肠腔，或从尿内排出。副作用治标不治本42光疗降低血清未结合胆红素简单而有效的方法。通过光线照射，药物治疗

白蛋白纠正代谢性酸中毒肝酶诱导剂静脉用免疫球蛋白※

见新生儿黄疸43药物治疗白蛋白43换血疗法

作用换出部分血中游离抗体和致敏红细胞，减轻溶血。换出血中大量胆红素，防止发生胆红素脑病。纠正贫血，改善携氧，防止心力衰竭。44换血疗法作用44指征产前已明确诊断，出生时脐血总胆红素＞68μmol/L(4mg/dl)，血红蛋白低于120g/L，伴水肿、肝脾大和心力衰竭者。生后12小时内胆红素每小时上升＞12μmol/L（0.7mg/dl）者。总胆红素已达到342μmol/L（20mg/dl）者。不论血清胆红素水平高低，已有胆红素脑病早期表现者。

※大部分Rh溶血病和个别严重ABO溶血病有任一指征者即应换血;

小早产儿、合并缺氧和酸中毒者或上一胎溶血严重者，应适当放宽指征;45指征45换血疗法

方法—血源的选择※有明显贫血和心力衰竭者，可用血浆减半的浓缩血

46换血疗法方法—血源的选择※有明显贫血和心力衰竭者，可用方法—换血量一般为患儿血量的2倍（约150～180ml/kg）。换出85%的致敏红细胞和60%的胆红素及抗体。

也有人主张用3倍血。换出更多致敏红细胞、胆红素及抗体。所需时间较长对患儿循环影响较大。

方法—换血途径脐静脉或其他较大静脉进行换血。动、静脉同步换血。47方法—换血量方法—换血途径47预防

Rh阴性妇女在流产或分娩Rh阳性胎儿后，应尽早注射相应的抗Rh免疫球蛋白，以中和进入母血的Rh抗原。临床目前常用方法是对RhD阴性妇女在流产或分娩RhD阳性胎儿后，72小时内肌注抗D球蛋白300µg。48预防Rh阴性妇女在流产或分娩Rh阳性胎儿Thanks!49Thanks!49新生儿溶血三项检测的临床应用50新生儿溶血三项检测的临床应用1有报道:新生儿溶血病(HemolyticdiseaseofnewbornHDN）,系指母、婴血型不合引起的同族免疫性溶血;已发现的人类29个血型系统中，以ABO血型不合最常见，Rh血型不合较少见;51有报道:新生儿溶血病(Hemolyticdiseaseo胎儿从父亲遗传而来的红细胞抗原恰为母亲所缺少,胎儿红细胞通过胎盘进入母体血循环中刺激母体产生相应的血型抗体（IgG）。此抗体又可通过胎盘进入胎儿血循环中导致胎儿、新生儿体内特异性抗原抗体反应，使红细胞致敏单核-吞噬细胞系统内破坏而溶血。52胎儿从父亲遗传而来的红细胞抗原恰为母亲所缺少,胎儿红细胞通过ABO溶血病的病因和发病机制ABO血型的遗传有A基因者称A型，有B基因者称B型，同时有A、B二个基因者称AB型，有H基因而无A、B基因为O型假如母“O”型，父“A”型（纯合子或杂合子）母基因型OOAOA父基因型AA子基因型子血型AOOO母基因型OO父基因型AOAO或或53ABO溶血病的病因和发病机制ABO血型的遗传母基因型OOAOABO血型抗体正常情况下，红细胞上缺乏A或B抗原时，血浆中存在相应的抗体即抗A抗体或抗B抗体为天然抗体，以IgM为主，实质是由于机体与广泛存在的类ABO物质接触产生。如果由于输血、怀孕或类ABO物质的刺激使抗体浓度增加，这种免疫抗A或抗B抗体多半为IgG，特别是O型母亲。54ABO血型抗体5ABO血型与抗体55ABO血型与抗体6ABO溶血病可发生在怀孕第一胎自然界存在A或B血型物质如某些植物、寄生虫、伤寒疫苗、破伤风及白喉类毒素等。

O型母亲在第一次妊娠前，已接受过A或B血型物质的刺激，血中抗A或抗B(IgG)效价较高。怀孕第一胎时抗体即可进入胎儿血循环引起溶血。ABO血型不合中约20%发病血浆及组织中存在的A和B血型物质，部分中和来自母体的抗体。胎儿红细胞A或B抗原位点少，抗原性弱，反应能力差。56ABO溶血病可发生在怀孕第一胎7Rh溶血病的病因和发病机制Rh基因编码Rh抗原的两个基因是RHD和RHCE;Rh基因系统的等位基因中最重要的是D、E、C、c、e五种，不存在d基因;RHD基因编码D抗原，RHCE基因的编码产物为C/c和E/e，C和E一起遗传，排列为DCE；无d抗原;d表示D阴性表现型;RHD和RHCE基因编码的单倍型中最常见的有8种形式：Dce、dce，DCe、dCe、DcE、dcE、DCE和dCE。57Rh溶血病的病因和发病机制Rh基因8Rh溶血病红细胞缺乏D抗原称为Rh阴性，具有D抗原称为Rh阳性，中国人绝大多数为Rh阳性。母亲Rh阴性(无D抗原)，若胎儿Rh阳性可发生Rh溶血病。母亲Rh阳性(有D抗原)，但缺乏Rh系统其他抗原如E等，若胎儿有该抗原也可发生Rh溶血病。RhD溶血病最常见其抗原性强弱依次为D＞E＞C＞c＞e。RhD溶血病最常见，其次为RhE，Rhe溶血病罕见。58Rh溶血病9Rh溶血病一般不发生在第一胎由于自然界无Rh血型物质

初发免疫反应次发免疫反应第一胎不溶血第二胎溶血胎盘59Rh溶血病一般不发生在第一胎初发免疫反应次发免疫反应第一Rh溶血病发生在第一胎的情况Rh阴性母亲既往输过Rh阳性血。Rh阴性母亲既往有流产或人工流产史。极少数可能是由于Rh阴性孕妇的母亲为Rh阳性，其母怀孕时已使孕妇致敏，故第一胎发病（外祖母学说）。RhD血型不合者约5%发病母亲对胎儿红细胞Rh抗原的敏感性不同。60Rh溶血病发生在第一胎的情况11临床表现

61临床表现12实验室检查

血型检查母子ABO和Rh血型溶血检查溶血时红细胞和血红蛋白减少，早期新生儿毛细血管血血红蛋白<145g/L可诊断为贫血;网织红细胞增高（第一天>6%）;血涂片有核红细胞增多（>10/100个白细胞）;血清总胆红素和未结合胆红素明显增加;致敏红细胞和血型抗体测定62实验室检查血型检查13抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验：

又称Coombs’试验，利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接与红细胞表面抗原结合的特异抗体，使红细胞凝集。经常用作试验的有两类方法。直接试验：是检查被检红细胞上有无已结合的不完全抗体（包括IgG类的抗A或抗B）。间接试验：是检查血清中游离的不完全抗体（包括IgG类的抗A或抗B）。63抗人球蛋白试验抗人球蛋白试验：14直接Coombs试验抗人免疫球蛋白自身抗体64直接Coombs试验抗人免疫球蛋白自身抗体15注意事项

标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗体从细胞中丢失。抗球蛋白试剂应按照说明最适稀释度使用，否则可产生前带或后带现象而误认为阴性结果。受检红细胞一定要用盐水洗涤3次，除去红细胞悬液混杂的血清蛋白，以防止假阴性结果。最好对阴性结果进行核实，即在该试管中再加1滴IgG致敏红细胞如结果为阳性，则表示试管内的抗球蛋白试剂未被消耗，阴性结果可靠。如需了解体内致敏红细胞的Ig类型，则可分别以抗IgM或抗C3单价抗球蛋白试剂进行试验。65注意事项标本采取后应立即进行试验，延迟试验或中途停止可使抗注意事项红细胞上吸附抗体太少,直接抗球蛋白试验可成假阴性反应。全凝集或冷凝集血液标本中有很多网织红细胞且抗球蛋白试剂中含有抗转铁蛋白时，均可使红细胞发生凝集。试剂：多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）；阳性对照细胞[IgG抗D致敏的5%Rh(D)阳性红细胞生理盐水悬液。取3人份O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后取压积红细胞，加等量抗D血清，至37℃水浴致敏1小时，取出后用生理盐水洗涤3次压积红细胞洗涤配成5%红细胞生理盐水悬液]；阴性对照细胞（正常人5%红细胞生理盐水悬液。取3人份O型红细胞等量混匀，经生理盐水洗涤后取压积红细胞，配成5%红细胞生理盐水悬液）。66注意事项红细胞上吸附抗体太少,直接抗球蛋白试验可成假阴性反应间接Coombs试验抗人免疫球蛋白同种异型抗体67间接Coombs试验抗人免疫球蛋白同种异型抗体18注意事项如血清与相应红细胞在37℃水浴中致敏1小时，75%的抗体吸附于红细胞上，如致敏2小时，则抗体吸附达95%；如以低离子盐水溶液代替生理盐水配制5%红细胞悬液，则致敏时间可减少至15-30分钟，但抗Fy抗体需较长的孵育时间。红细胞洗涤应迅速、彻底。要将生理盐水用力冲入管底，使管底红细胞松散分离。要防止手上的蛋白质污染。1滴1:4000稀释的血清可中和抗球蛋白血清1滴，导致假阳性结果。离心速度和时间非常重要，应取能使阳性对照管出现阳性反应的最小离心力和最短离心时间。68注意事项如血清与相应红细胞在37℃水浴中致敏1小时，75%注意事项当红细胞上的抗体分子数量在500个以上时在有利于抗球蛋白与不规则抗体的结合，当红细胞上抗体数量较少，可通过反复离心、摇摆，在离心的方法，增加抗原抗体的接触，提高阳性率。如果检测的抗体为补体依赖抗体，则必须加入新鲜AB型血清.试剂：多特异性抗球蛋白试剂（IgG、C3d）；已知抗体血清（用于检测特殊红细胞抗原）：5%已知抗原的红细胞盐水悬液（用于检测血清中不完全抗体）；5%D阳性红细胞盐水悬液（阳性对照用）；不完全抗D血清：AB型血清。69注意事项当红细胞上的抗体分子数量在500个以上时在有利于抗球抗人球蛋白试验的应用直接法：常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血症、特发性自身免疫性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。间接法：多用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的发生。亦可对红细胞不相容的输血所产生的血型抗体进行检测。70抗人球蛋白试验的应用直接法：21游离试验检查新生儿血清中游离抗体：

将新生儿血清与标准A(B)细胞（与新生儿同种红细胞）做间接抗人球蛋白试验，阳性结果，则表示有抗体存在。

新生儿血清中游离抗体检查结果意义指示红细胞意义

ACBCOC+--游离的抗-A-+-游离的抗-B++-游离的抗-A抗-B或-AB+-+-+游离的ABO系统以外的抗体

---无游离抗体71游离试验检查新生儿血清中游离抗体：22放散试验

放散试验原理

抗原与抗体的结合是可逆的。在物理和化学的条件改变时，抗体又会从抗原抗体复合物上分离下来，将抗体由抗原抗体复合物上分离下来的试验称为放散试验。

72放散试验放散试验原理23

放散液

用放散试验技术将大量附着于红细胞上的抗体放散到小量的生理盐水中，这种含有抗体的溶液称为放散液放散液中的抗体具有特异性，可以与相应抗原结合，从而可以进一步确定抗体的特异性。73放散液247425752676277728

热放散试验

主要应用ABO血型系统新生儿溶血病及从红细胞上洗脱掉IgM及IgG抗体。此方法制备抗体最容易，但抗体回收较差，即如果抗体较弱，放散试验可得到假阴性的结果。其优点是适用于一般化验室，缺点是放散液中含有较多游离白蛋白。78热放散试验主要应用ABO血型系热放散试验方法

1.将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤3-4次，最后一次尽量吸取红细胞上层的生理盐水。

2.在压积红细胞中加等量生理盐水（也可用AB血清或6%牛血清白蛋白），置56℃水浴箱中10分钟，期间摇动数次（15-30S摇动1次）。

3.取出后立即高速离心，3000转/分钟；取上清液（樱红色的上清液即为放散液），与已知红细胞试验。按不同试验要求做试验，将放散液作为抗体使用。79热放散试验方法1.将疑有抗体包被的红细胞用生理盐水洗涤38031热放散试验注意事项鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗体较弱，可用酶处理红细胞做试验放散液用生理盐水制备不稳定，若要保存放散液，用AB血清进行放散受检血清与吸收用红细胞比例要高一些，若抗体弱，可以充分与红细胞结合加热放散温度要准确，如温度降低，放散出的抗体又会重新与抗原结合放散抗体时，应不断摇动，促使抗体从抗原抗体复合物上分离下来81热放散试验注意事项鉴定放散液应与原抗原抗体反应方法相同，如抗乙醚放散试验

主要应用于温自身抗体（IgG）或同种抗体引起的直抗阳性，以及用于分离IgG抗体混合物其最大优点是适用于检查获得性溶血性贫血，鉴定Rh抗体效果最好，不宜用于ABO抗体鉴定82乙醚放散试验主要应用于温自身抗体（IgG）或酸放散83酸放散34放散试验的应用鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体在溶血性贫血和可疑输血反应中，用来鉴定产生直抗阳性的红细胞制备少量的单特异性抗体从病人红细胞上去除抗体，制备可用于自身吸收或鉴定血型及交叉配血次测试验中使用的红细胞84放散试验的应用鉴定新生儿溶血病患儿红细胞上的抗体35新生儿红细胞抗体放散试验结果意义

指示红细胞意义ACBCOC+--放散出IgG抗-A-+-放散出IgG抗-B++-放散出IgG抗-AB或同时放散IgG抗-A或IgG抗-B+-+-+放散出ABO血型以外的抗体

---没有放散出抗体85新生儿红细胞抗体放散试验结果意义36

新生儿血型血清学检查结果分析

游离释放结果直抗试验试验抗筛判定意义

+/-++-/+确诊ABOHDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体

+/--+-/+确诊ABOHDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体+/--+-/+确诊ABOHDN,抗筛（+）存在ABO以外抗体+--