生物反应器的检测及控制

关于生物反应器的检测及控制第1页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五生物反应器的检测及控制在微生物发酵以及其他生物反应过程中，为了使生产稳产高产，降低原材料消耗，节省能量和劳动力，防止事故发生，实现安全生产，必须对生物反应过程和反应器系统实行检测和控制。生物反应器的检测是利用各种传感器及其他检测手段对反应器系统中各种参变量进行测量，并通过光电转换等技术用二次仪表显示或通过计算机处理。第2页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五检测控制中要明了下述几点：

（1）进行检测的目的；（2）有多少必须检测的状态参数，这些参变量能否测量检出？（3）能测定的参数可否在线检测，其响应滞后是否太大？（4）从状态参数的检测结果，如何判断该生物反应器及生物细胞本身的状态；（5）反应系统中需控制的主要参变量是什么？这些需控制的参变量与生物反应效能如何相关对应？第3页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五第一节生化过程主要检测的参变量物理参数

1．温度

2．压强

3．液面（或浆液量）

4．泡沫高度

5．培养基流加速度

6．通气量

7．粘度（或表观粘度）第4页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五物理参数

8．搅拌转速与搅拌功率9．冷却介质流量与温度10．蒸汽压强11．湿度12．酸、碱及消泡剂用量第5页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五化学参数1.pH2.溶氧浓度3.溶解CO2浓度4.氧化还原电位5.排气的氧分压6.排气的CO2分压7.培养基质浓度8.产物浓度9.前体浓度第6页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五生物量细胞浓度酶活性细胞生长速率第7页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五第二节生化过程常用检测方法及仪器一、检测方式及仪器的组成在线（On—line）检测：仪器的电极等可直接与反应器内的培养基接触或可连续从反应器中取样进行分析测定；离线（Off—line）检测：从反应器中取样出来，然后用仪器分析或化学分析等方法进行检测。对生物发酵过程的控制来讲，在线检测是首选方式。第8页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五生物反应检测仪器的基本构成

l.传感器2.信号转换3.信号放大4.输出显示第9页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五二、主要参数检测原理及仪器杜绝杂菌污染。无论是在线检测或取样分析，均应尽可能不影响反应器系统的运行状态。对于挥发性物质的检测，可采用微孔管在线取样检测法。第10页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五发酵罐内无菌取样系统

（1）陶瓷微孔膜取样系统第11页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五

（2）渗透膜取样系统

第12页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五微孔管在线取样装置

第13页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五

1.温度的测定

温度检测仪表有热电阻检测器（RTD）、半导体热敏电阻、热电偶和玻璃温度计等。最常用的是金属热电阻温度计，其中以铂电阻温度计最常用，其次铜电阻温度计也可选择。

铂电阻温度计可耐热杀菌，耐腐蚀，精度高，但价钱较贵。铜电阻温度计价格较便宜，但容易氧化，且温度计的体积也较大。

半导体热敏电阻具有灵敏度高、响应时间短的优点，但体积小、结构简单、耐腐蚀性好、寿命长，但因其温度与电阻值的关系非线性，所以使用不多

第14页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五2．压强的检测

最常用的压强检测仪是隔膜式压力表。在生物反应器中，在压力表安装时必须注意使仪表的管路能够加热灭菌，尽量不存在死角，这样才能保证反应器的无菌操作。第15页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五3．液位和泡沫高度的检测液位的检测主要方法有压差法、电容法和电导法等。第16页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五电容式液面计示意图

第17页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五压差法测量液位原理

第18页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五泡沫高度的测定最常用的方法是电极探针测定法：当泡沫产生增多，其表面上升与电极探针接触从而产生电信号。泡沫高度的检测还可应用声波法，即利用装于罐顶的装置发射声波，检测此声波经液面反射后返回罐顶所需的时间，就可推出泡沫表面高度。第19页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五4．培养基和液体流量测定椭圆流量计效应流量计

第20页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五

科里奥利（Coriolis）效应流量计

第21页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五5．气体流量计（1）体积流量型气体流量计原理：根据流动气体动能的转换及流动类型改变而检测其流量。实验室小试和中试发酵系统几乎都应用转子流量计。

同心孔板压差式流量计，可用于工业生产规模上。第22页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五气体流量计（2）质量流量型气体流量计检测原理是利用流体的固有性质，如质量、导电性、电磁感应及导热等特性而进行设计的。对气体流量测定，最常用的是利用其导热性能。第23页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五气体热质量流量传感器结构

第24页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五气体热质量流量计工作原理

第25页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五6．发酵液粘度的检测发酵工业上常用的粘度测定仪有振动式粘度传感仪、毛细管粘度计、回转式粘度计以及涡轮旋转粘度计等。第26页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五（1）振动式粘度传感仪可保证无菌操作，但只能测定粘度的相对值，且精确度较差，仍有待改进提高。第27页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五（2）发酵液循环粘度测定装设自动无菌取样循环系统，使发酵液通过取样管路流过旋转式粘度计或毛细管粘度计，以实现发酵液粘度的连续在线检测。第28页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五7．搅拌转速和搅拌功率（1）搅拌转速搅拌转速的检测常用方法有磁感应式、光感应式和测速发电机等三种。前两种测速仪是利用搅拌轴或电机轴上装设的感应片切割磁场或光束而产生脉冲信号，此信号即脉冲频率与搅拌转速相同。测速发电机是利用在搅拌轴上或电机轴上装设一小型发电机，后者的输出电压与搅拌转速成线性关系。第29页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五

（2）发酵搅拌功率生产规模的发酵罐搅拌功率只是测定驱动电机的电压与电流，或直接测定电机搅拌功率。第30页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五8.PH的检测最通用的pH测定仪是复合pH电极，因其具有结构紧凑，可蒸汽加热灭菌的优点。第31页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五复合PH电极结构

第32页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五复合PH电极为了使PH电极适应工业发酵生产的要求，通常加装不锈钢保护套才能插入发酵罐中使用。具有温度补偿系统。在每批发酵灭菌操作前后进行标定。通常PH计的测定范围是0～14，精度达10.05～0.1PH，响应时间数秒至数十秒，灵敏度为0.1PH。第33页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五9．溶氧浓度的检测通常用溶氧电极法，其化学基础是氧分子在阴极上还原，因而有电流产生，所产生的电流和被还原的氧量成正比，故设法测定此电流值就可确定发酵液的溶氧浓度。第34页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五溶氧电极实际上，用一层高分子膜使电极与被测溶液分隔开，具有如下特点：（1）氧分子扩散透过膜是限速步骤，故测出的电流值与溶氧浓度成正比；（2）温度变化1℃，则产生4％的变化，故必须装设温度补偿线路；（3）电流值和氧的扩散系数与溶解度的乘积成正比关系；（4）这类溶氧电极的阳极面积应比阴极面积大得多，这样可减小误差。

第35页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五溶氧电极溶氧电极的溶氧值有两种表示方法，即饱和溶氧的百分数和溶氧值，前者最常用。值得注意的是，测定时要使电极周围的液体适度流动，以加强传质，尽量减小与电极膜接触的液膜滞流层厚度，并减少气泡和生物细胞在膜上积存，以保证溶氧测定的准确。第36页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五10．溶解CO2浓度的检测测定原理利用对CO2分子有特殊选择渗透通过特性的微孔膜，使扩散通过的CO2进入饱和碳酸氢钠缓冲溶液中，平衡后显示的pH与溶解的CO2浓度成正比，由此原理并通过变换就可测出溶解CO2浓度。第37页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五溶解CO2浓度的检测溶解CO2浓度测定仪的工作原理和pH计类似不同点是电极内装了饱和的碳酸氢钠溶液，在高温灭菌时会部分分解，故要每次灭菌后均需校准才能测定。第38页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五11．氧化还原电位（ORP）的检测检测原理：基于溶液中的金属电极上进行的电子交换达到平衡时，具有相应的氧化还原电位值，此值与溶液的PH和温度有关。溶液的氧化还原电位值不仅取决于溶氧值，还与温度T和PH有关。目前常用的氧化还原电极的检测范围在一700～＋700mV，灵敏度110mV，响应时间数十秒至数分钟，精度为±0.1l％FS。第39页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五12．排气的氧分压和CO2分压的检测

（1）排气的氧分压的检测：气体中氧浓度的检测，主要有磁氧分析、极谱电位法和质谱法。磁氧分析仪的检测原理：氧是顺磁性的，它的磁化率较大，在所有气体中占有重要地位；而大多数气体具有抗磁性，而且有较小的磁化率。

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磁氧分析仪结构原理图第41页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五（2）排气中CO2分压的检测

常用的排气中CO2分压（浓度）检测仪为红外线二氧化碳测定仪和二氧化碳电极。红外线二氧化碳分析仪原理：CO2的红外吸收峰在2.6～2.9×103和4.1～4.5×103nm之间。在上述两个波段的近红外线通过含有CO2的气体时，光强度衰减，其衰减量依从Lambert－Beer的规则。第42页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五

通气发酵罐排气检测流程图l.粗滤器2.膜片泵3.贮气瓶4.除水器5.流量计6.精过滤器7.CO2检测仪8.氧分析仪第43页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五13．细胞浓度测定

生物细胞浓度的测定有全细胞浓度和活细胞浓度之分。（1）全细胞浓度的测定：可分湿重法、干重法、浊度法、湿细胞体积等。以准确度来说，干重法最好，但其余三种方法简便易行，节省时间，有利于生产过程的监测控制，尤其是对发酵流加操作和连续操作过程。第44页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五在线检测

对于生物反应器在线检测用的生物传感器或普通的传感器，必须尽可能满足下述要求：①响应要连续、迅速；②灵敏度应在0.02g/L以上；③电极本身对生物细胞无影响；④检测过程对细胞无损伤，不必加药物；⑤可检测含固体微粒营养物质的发酵液；⑥易于清洗、灭菌。第45页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五细胞浓度在线检测浊度计

流通式浊度计第46页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五流通式浊度计用流通式浊度计检测细胞浓度，必须注意：

A．适用于游离细胞，细胞形状为球状、杆状的酵母、细菌、绿藻等。

B．空气泡会干扰读数，使样液先经气液分离器脱气后才检测可减少误差。

C.传感器的比色皿会因细胞附壁而增大测定误差，为尽量使此误差减至最小，可适当提高发酵液流过光电比色皿时的速度。第47页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五（2）活细胞浓度测定测定原理：利用活生物细胞催化的反应或活细胞本身特有的物质而使用生物发光或化学发光法进行测定。对于取样离线测试方法还有染色计数法检测活细胞数，这可用于多数的微生物和动植物细胞。第48页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五荧光测量活细胞装置简图

第49页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五流动细胞计数法测定原理被检测的含细胞的试样流过检测器，使细胞逐个滴下，由激光检出，根据预先设定的各种细胞的电特性进行识别，由此可统计出细胞的尺寸分布及细胞龄等特性。第50页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五流式细胞仪结构示意图

第51页，共58页，2022年，5月20日，8点54分，星期五三、生物发酵溶液中营养成分与产物的分析反应溶液中的营养成分和