土壤中分解尿素的细菌的 分离和计数课件-高二下学期生物人教版选修1

课题2

土壤中分解尿素的细菌的分离和计数1、尿素的利用

尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收，只有被细菌分解成氨之后才能被利用。2、细菌分解尿素的原因分解尿素的细菌能合成脲酶。课题背景CO(NH2)+H2O脲酶NH3+CO23.课题目的①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌筛选菌株

DNA多聚酶链式反应（PCR）是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。筛选环境：热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物，只有耐热的Taq细菌才能生存。

筛选耐高温的DNA聚合酶

人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。实验室中微生物的筛选原理

选择培养基15.0g琼脂1.0g尿素10.0g葡萄糖0.2gMgSO4`7H2O2.1gNa2HPO41.4gKH2PO4分解尿素的细菌的分离与计数的培养基①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上呢？固体培养基选择培养基②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？碳源：葡萄糖、尿素氮源：尿素尿素是培养基的唯一氮源，只有能分解尿素的微生物才能生活。③培养基选择分解尿素的微生物的原理1、显微镜直接计数统计菌落数目2.活菌计数法①常用方法：②原理：当稀释度足够高时，固体培养基表面生长的一个菌落来源于一个活菌。固体培养基主要用于微生物的——————————分离、计数稀释涂布平板法每克样品中的菌株数＝(C÷V)×M③计算公式：C代表某一稀释度下的平均菌落数，V代表稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。例：如果培养基上的平均菌落数是100，稀释液的体积是10ml，稀释倍数是104。那么每克样品中的菌株数是多少？1×105注意事项①一般选择菌落数在30—300的平板计数。②一般统计3个平板，计算菌落平均数。③统计的菌落数比活菌的实际数低。原因：当两个或多个细胞连在一起时，观察到的只是一个菌落。在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。分析其原因以及解决方案。

原因：①土样不同②培养基污染实例方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照。结果预测：如果结果与A同学一致，证明A无误；如果结果不同，证明A同学存在操作失误。结果预测：如果空白培养基没有出现菌落，证明A同学无误；如果空白培养基出现菌落，证明A同学培养基污染。

设置对照的目的：排除实验组中非测试因素（无关变量）对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。设置对照自变量：因变量：无关变量：土壤稀释液的有无菌落的有无培养基、温度等

㈠.土壤取样

在肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。◆取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。㈡.制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的选择培养基。实验设计◆应在火焰旁称取土壤10g。◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行。[三]样品的稀释√√√◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基种类、培养时间、稀释度等。[四]取样涂布选用104、105、106倍的稀释液进行平板培养，一般选择菌落数在30—300的平板进行计数。[五]微生物的培养与观察微生物PH温度时间稀释倍数细菌中性或微碱性30～37℃1～2d104～106霉菌酸性25～28℃3～4d102～103放线菌碱性25～28℃5～7d103～105分离不同微生物采用不同稀释度的原因：土壤中不同微生物的数量不同。同种微生物表现出稳定的菌落特征

在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，由于细菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，氨使培养基的碱性增强，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素（菌落周围出现红色环带菌落）。课题延伸

初步筛选：

分解尿素的细菌、固氮菌测定饮水中大肠杆菌数量的方法：滤膜法将一定体积的水用细菌过滤器过滤后，将滤膜放到伊红美蓝（染料）培养基上培养，大肠杆菌菌落呈现黑色，计算水样中大肠杆菌的数量。反刍动物作业1.选用加入哪